任君萍
- 作品数：33 被引量：76H指数：5
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- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 含日本脑炎病毒pre-M/E蛋白基因真核表达质粒的构建及免疫效果观察被引量：3
- 1997年
- 本文作者将日本脑炎病毒（ＪＥＶ）的前膜蛋白和囊膜蛋白（ｐｒｅＭ／Ｅ）的基因插入到真核表达载体ｐＳＧ５中，构建了重组表达载体ｐＳＧＪＥ。用其体外转染地鼠肾细胞ＢＨＫ－２１，经间接免疫荧光法（ＩＦＡ）检测，证实了ＪＥＶ－Ｅ的瞬时表达。大量制备和纯化重组质粒，经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，结果显示该重组质粒可明显促进小鼠在受到ＪＥＶ活病毒攻击后特异性抗体的产生。
- 张富泉任君萍马文煜姜绍谆黄庆生
- 关键词：日本脑炎病毒疫苗质粒
- 噬菌体表达短肽模拟乙脑病毒糖蛋白的研究被引量：1
- 2002年
- 为研究日本脑炎病毒 (JEV )E蛋白模拟肽 ,将抗JEVE蛋白的mAb 2H4淘筛噬菌体 15肽库。经夹心ELISA、竞争ELISA鉴定后 ,随机挑取 10个阳性克隆 ,测序并与JEVE蛋白同源比较。将阳性噬菌体免疫小鼠 ,检测血清中特异性抗体。ELISA结果显示筛选到的噬菌体能特异地与mAb 2H4结合 ,并且这种结合可被JEV天然抗原所竞争抑制。 10个阳性克隆的氨基酸序列相同 :—RQDPQWPYANSTIAR— ,同源分析得到的序列STXAR可能为mAb 2H4识别的模拟表位。阳性噬菌体表达的 15肽能够刺激小鼠产生特异性抗体。该噬菌体表达短肽模拟JEVE蛋白的部分抗原性。
- 任君萍马文煜杨乔欣丁天兵黎志东
- 关键词：随机肽库表位日本脑炎病毒
- 我国首例与HIV感染者长期无保护性接触未引发感染的报告被引量：6
- 2001年
- 目的 通过某女 HIV感染的确认及其丈夫 HIV感染的排除 ,报告我国首例与 HIV感染者长期无保护性接触而未引发 HIV感染的案例 .方法 初筛实验用酶联免疫吸附(EL ISA)实验及明胶颗粒凝集 (PA )实验检测 HIV- 1抗体及HIV- 2抗体 ,确认实验用蛋白免疫印迹 (WB)实验检测 HIV- 1抗体及 HIV- 2抗体 .结果 某女 ,EL ISA实验结果 HIV- 1抗体阳性 ,HIV- 2抗体阴性 .复检结果相同 .PA实验结果 HIV-1阳性 .WB实验出现 HIV- 1特异性条带 gp160 ,gp12 0 ,p66,p5 5 ,gp41,p31,p2 4,p17,无 HIV- 2特异性条带出现 .结果为 HIV- 1抗体阳性 ,HIV- 2抗体阴性 .某男 ,EL ISA实验结果 :HIV- 1抗体及 HIV- 2抗体均为阴性 ,PA实验结果为阴性 .3mo及 6mo后复查 ,EL ISA,PA实验结果仍为阴性 .结论 某女为 HIV感染者 ,某男可排除 HIV感染的可能性 .某男与感染者长期无保护性接触未感染 HIV,也未因与感染者长期共同生活而感染 HIV.
- 黎志东徐志凯邢爱华杨乔欣任君萍张亮
- 关键词：HIV感染性交艾滋病
- 抗Doppel蛋白(叠朊蛋白)单克隆抗体细胞系的建立及其初步鉴定
- 2002年
- 丁天兵肖毅任君萍吴玉水杨敬胡玲郭振英宋建华马文煜秦克锋
- 关键词：单克隆抗体杂交瘤细胞系
- 抗人μ链单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用被引量：6
- 2005年
- 目的:制备高效价的鼠源性抗人μ链单克隆抗体(mAb),并建立可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。方法:以人IgM全分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,用间接ELISA法筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗μ链mAb的杂交瘤细胞株。mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)采用ELISA及Westernblot法鉴定。以纯化的mAb包被建立ELISA捕捉法,并用于可疑乙脑患者标本中特异性IgM抗体的检测。结果:筛选到1株可稳定分泌抗人μ链mAb的细胞株2E5。mAb腹水的ELISA效价为1×10-6,Ig亚类(型)为IgG1(κ),相对亲和力为1×10-5。Westernblot结果显示mAb2E5仅与IgM的μ链结合,Mr为75000。以辛酸硫酸铵法纯化的mAb2E5包被,建立了ELISA捕捉法,用于30份乙脑患者血清IgM的检测,敏感性及特异性良好。结论:成功地制备1株抗人μ链mAb2E5,建立了可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。
- 杨敬丁天兵任君萍宋建华马文煜
- 关键词：单克隆抗体杂交瘤ELISA
- 乙型脑炎病毒E蛋白N端片段在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2003年
- 利用 PCR扩增乙型脑炎病毒 E蛋白基因 5′端片段 ,克隆入原核表达载体 p ET-2 8a,转化大肠杆菌 BL2 1 ( ED3 )。经 IPTG诱导表达后 ,SDS-PAGE分析表达产物。结果表明 ,所表达的E蛋白片段的分子量约为 3 .4万 ,表达量约占菌体总蛋白的 3 5%。 JEV E蛋白片段在大肠杆菌中的成功表达 ,为制备 JE实验室诊断抗原和分析
- 柳丽娟吴玉水马文煜宋建华黄庆生任君萍丁天兵
- 关键词：乙型脑炎N端片段大肠杆菌基因表达抗原病毒性疾病
- 用杆状病毒表达系统构建携带JEV E蛋白的逆转录病毒样颗粒被引量：1
- 1997年
- 日本脑炎病毒(JEV)为黄病毒属成员,可引起日本脑炎,也称流行性乙型脑炎。该病在我国和亚洲的一些国家和地区仍有流行,具有发病急,病程凶险,病死率高和后遗症严重等特点。目前对该病尚无可靠的特异性治疗方法,临床以支持和对症疗法为主,采用疫苗预防接种仍是控制该病流行的唯一有效的途径。当前使用的疫苗为由感染的鼠脑或培养细胞制备的灭活疫苗。
- 张富泉马文煜姜绍谆任君萍
- 关键词：杆状病毒表达逆转录病毒E蛋白病毒样颗粒日本脑炎病毒
- 日本脑炎病毒受体功能缺陷细胞的筛选和鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的筛选并鉴定日本脑炎病毒(JEV)受体功能缺陷的BHK-21细胞突变株。方法用化学诱变剂ICR-191人工诱变JEV易感细胞系BHK-21,经JEV攻击,对存活细胞克隆化,RT-PCR筛选JEV RNA阴性细胞,用流式细胞术,免疫荧光和空斑实验鉴定其对JEV的敏感性。结果筛选到1株JEV RNA阴性细胞3A10-3F。流式细胞术检测3A10-3F细胞与JEV的结合率为2.10%,免疫荧光和空斑实验证实其对JEV感染有相当程度的抵抗,在JEV感染复数MOI 1时3A10-3F细胞培养上清中JEV最高滴度比BHK-21细胞中JEV最高滴度下降2个数量级。结论用化学诱变法筛选到1株JEV受体功能缺陷细胞,为进一步鉴定JEV受体,深入研究JEV致病机理提供了有益线索。
- 任君萍张伟黄庆生高淑娴宋建华丁天兵马文煜
- 关键词：病毒受体BHK-21细胞
- 真核表达单纯疱疹病毒糖蛋白模拟表位mgC及其基因免疫效果的观察
- 2001年
- 目的鉴定单纯疱疹病毒HSV糖蛋白CgC一个短肽模拟表位mgC基因作为HSVDNA表位疫苗的可能性。方法将mgC基因克隆入真核载体pcDNA3.1中,并在CHO细胞中表达,免疫荧光法鉴定表达效果。DNA免疫不同种属小鼠,ELISA法观察HSVgC特异结合抗体的诱生。结果含mgC的真核载体在哺乳动物细胞中可以成功表达外源蛋白。重组载体DNA在BALB/c小鼠体内可诱导抗天然HSVgC蛋白的抗体,而在C57BL鼠体内未见明显的抗体反应。结论成功构建了可表达模拟表位mgC的真核表达载体。证明了应用gC模拟短肽基因作为DNA免疫的基因源是可行的,但其对不同种属动物的反应性不同,提示DNA免疫还应针对不同免疫对象调整免疫策略。这一研究为HSV多表位组合多肽疫苗的研制提供了一个新的备选组份。
- 杨乔欣马文煜李圣青黎志东张亮任君萍
- 关键词：表位真核表达基因免疫
- 日本脑炎病毒糖蛋白模拟短肽的筛选和基因定位被引量：2
- 2001年
- 目的 寻找 JEV m Ab 2 F2识别的抗原表位 ,为 JEV小分子多肽疫苗合理设计提供依据 .方法 链亲和素包被塑料平皿 ,加入生物素标记 2 F2与噬菌体随机 15肽库 ,再洗脱 ,扩大培养进行三轮淘筛 ,经夹心 EL ISA、竞争 EL ISA鉴定后 ,挑取 10个阳性克隆 ,DNA测序 ,与 JEV E蛋白同源分析 .结果 筛选到的噬菌体能特异地与 2 F2结合 ,并且这种结合可被天然抗原所抑制 . 10个克隆的氨基酸序列相同 :-HTPQWSPSQYRPSL R- ,同源分析在 JEV E蛋白 2 2 4～ 2 2 9aa得到一个同源性较高的序列 :PXXSPS.结论 PXXSPS可能为 JEV E蛋白的一个模拟表位 .
- 任君萍马文煜杨乔欣肖毅丁天兵黎志东
- 关键词：日本脑炎病毒噬菌体肽库
