于世荣
- 作品数：6 被引量：1H指数：1
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- 重组人乳头瘤病毒58型L1蛋白在Sf9细胞中的表达条件优化
- 2010年
- 目的 采用昆虫细胞-杆状病毒表达系统扩增人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）58型L1蛋白基因,确定L1蛋白表达的最佳条件.方法 取处于埘数生长期的S19细胞以不同的感染复数（MOI）值扩增病毒,用噬斑试验检测病毒滴度,确定扩增重组病毒的最适条件 用间接免疫荧光法判断目的蛋白表达情况 通过蛋白印迹法测定不同的表达时间和MOI值条件下目的蛋白表达量,确定目的蛋白的最佳表达条件.结果 处于对数生长期的细胞以MOI值为0.5表达48 h条件下扩增含HPV58 LI基因的重组杆状病毒,滴度最高,可达5×108pfu/ml 以MOI值为5.0表达72 h获得最佳的目的蛋白表达量.结论 确定了扩增病毒和表达相应目的蛋白的最佳条件.
- 于世荣孙丽媛刘君丁军颖李军张夕燕张振龙
- 关键词：人乳头瘤病毒基因表达重组蛋白质类
- 人乳头瘤病毒预防性疫苗临床研究进展
- 2010年
- 人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）持续感染是妇女发生宫颈癌的重要原因之一.目前已鉴定出100多个HPV基因型,它们可分为高危型和低危型两类.在亚洲地区,HPV 16、18、58型与宫颈癌关系最密切.目前已上市的HPV预防性疫苗有Cervarix^TM和Gardasil疫苗.此文对HPV的基因结构和功能以及已上市的预防性疫苗的安全性和免疫原性做一系统阐述.
- 于世荣张振龙
- 关键词：安全性免疫原性
- 重组人乳头瘤病毒11型L1蛋白在昆虫细胞sf9中的表达条件优化研究
- 2009年
- 目的确定利用昆虫细胞一杆状病毒表达系统表达重组人乳头瘤病毒11型L1蛋白（HPV11 L1）的最适表达条件。方法通过间接免疫荧光法鉴定目的蛋白表达情况；用蛋白印迹法（Western blot）确定在不同感染复数（MOI）、不同表达时间条件下目的蛋白的最适表达条件。结果当sf9细胞密度为2．0×10^6／ml时，以MOI值为2．0的重组杆状病毒接种，悬浮表达96h收获为最适表达条件。结论确定了目的蛋白的最适表达条件，为进一步大量表达及纯化提供参考。
- 刘君张夕燕孙丽媛于世荣丁军颖许雪梅张振龙
- 关键词：荧光免疫测定L1蛋白昆虫细胞
- 不同浓度葡萄糖对sf9细胞生长特性及蛋白表达的影响
- 2010年
- 目的研究不同浓度葡萄糖对昆虫细胞sf9生长特性及蛋白表达的影响。方法将对数生长期的s丹细胞在含不同浓度葡萄糖的Hyclone无血清培养基（serum—free medium，SFM）中培养。采用台盼蓝拒染法监测细胞密度，分析比较不同浓度葡萄糖对s固细胞生长特性的影响。然后，将对数生长期的sf9细胞在含不同浓度葡萄糖的HycloneSFM中培养表达人乳头瘤病毒（humanpa pillomavims，HPV）18型L1蛋白。以蛋白印迹法鉴定并分析比较不同浓度葡萄糖对s19细胞表达蛋白的影响。结果4个不同葡萄糖浓度实验组的细胞增殖速率及最大细胞密度均大于不加葡萄糖的对照组。两个较低葡萄糖浓度组的细胞凋亡率低于对照组，最高葡萄糖浓度组的细胞凋亡率则高于对照组。另外，加葡萄糖的8个实验组的蛋白表达量均高于不加葡萄糖的对照组，其中，3个较高葡萄糖浓度组显示有目的蛋白的降解条带。在另外5个没有出现降解条带的实验组中，以培养过程中间补加葡萄糖浓度至15mmol／L的实验组蛋白表达量最大。结论葡萄糖可促进s移细胞增殖，不同浓度葡萄糖对细胞凋亡的影响不同；适宜浓度的葡萄糖可提高sf9细胞表达完整外源蛋白的量。
- 丁军颖张振龙李军赵建英于世荣许雪梅
- 关键词：葡萄糖昆虫细胞增殖蛋白表达
- 重组人乳头瘤病毒16型L1 VLP的初步纯化、鉴定及免疫效果的初步研究
- 2010年
- 目的 对昆虫细胞-杆状病毒系统表达的人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）16型L1蛋白病毒样颗粒（virus-like particle,VLP）进行初步纯化研究,并在小鼠中检测纯化VLP的免疫原性.方法 采用蔗糖-氯化铯密度梯度超速离心纯化方法纯化HPV16 LI VLP.对纯化得到的VLP分别进行蛋白印迹法、十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及电镜鉴定.然后用VLP免疫6周龄BALB/c小鼠.将小鼠随机分成6组（3个剂量组、2个佐剂组和1个对照组）,间隔2周免疫3次,3次剂量相同.取血分离血清,采用间接ELISA法检测抗HPV16 L1 VLP抗体滴度.结果 经蔗糖-氯化铯密度梯度超速离心纯化后,用SDS-PAGE鉴定纯化的HPV16 LI VLP,纯度达到90%.电镜观察可见完整的VLP颗粒.间接EUSA检测结果显示,剂量组及佐剂组小鼠血清中均可检测到特异性抗HPV16 L1 VLP抗体,且抗体滴度随针次和剂量的增加而增高.结论 采用蔗糖-氯化铯密度梯度超速离心纯化法得到的HPV16 L1 VLP可用于免疫学初步研究.通过昆虫细胞表达产生的HPV16 LI VLP 具有较强的免疫原性,能诱导小鼠产生强的体液免疫应答.
- 孙丽媛张婷于世荣陈祥鹏刘君李莉莉张夕燕张振龙许雪梅
- 关键词：人乳头瘤病毒16L1蛋白病毒样颗粒
- 含编码人乳头瘤病毒18型L1蛋白基因的杆状病毒扩增及相应蛋白表达的条件优化被引量：1
- 2009年
- 目的确定以昆虫细胞sf9F增含编码人乳头瘤病毒（human papillomavims，HPV）18型L1蛋白（HPV18L1）基因的杆状病毒以及相应蛋白表达的最佳条件。方法以对数生长期的sf9细胞在不同感染复数（M01）和不同时间条件下扩增病毒，以蚀斑试验检测病毒滴度，选择获得最高滴度病毒的最佳条件；再以sf9细胞在不同细胞密度、不同MOI值和不同时间条件下表达相应蛋白，以蛋白印迹法鉴定并比较不同条件下的蛋白表达量，选择获得最大量目的蛋白的最佳条件。结果对数生长期的sf9细胞在MOI值为0．50、扩增时间为48h时，所扩增的病毒滴度最高，可达3×10^8pfu／ml；在细胞密度为3×10^6／ml、MOI值为2．0、表达时间为72h时，所表达的蛋白量最大，约5mg/L。结论确定了含编码HPV18L1基因的杆状病毒扩增及相应蛋白表达的最佳条件。
- 丁军颖张振龙孙丽媛刘君张夕燕于世荣许雪梅
- 关键词：人乳头瘤病毒18L1基因杆状病毒昆虫细胞病毒样颗粒
