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猪伪狂犬病毒免疫相关基因的遗传进化分析: 2012年以来,中国多地免疫伪狂犬基因缺失苗的猪场爆发伪狂犬病.为了解新流行PRVFJ-2015株的主要免疫相关基因序列遗传进化情况,本研究参照GenBank已公布的PRV全基因序列设计了4对特异性扩增引物,并将扩增片段...; 陈秋勇吴学敏王隆柏陈如敬车勇良王晨燕刘玉涛严山周伦江; 关键词：伪狂犬病流行毒株免疫相关基因遗传进化免疫逃逸

用于检测经典型和变异型猪伪狂犬病毒的实时荧光PCR-HRM引物: 本发明涉及一组用于检测经典型猪伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）和变异型猪伪狂犬病毒的引物，属于动物传染学领域。该引物根据经典型PRV和变异型PRV在gE基因上的差异设计，由于变异型PRV和经典型...; 陈如敬吴学敏周伦江陈秋勇车勇良严山王晨燕王隆柏魏宏刘玉涛; 文献传递

鉴别猪圆环病毒3型两个基因亚型的实时荧光定量PCR-HRM引物: 本发明涉及一组用于检测猪圆环病毒3型两个基因亚型的PCR‑HRM引物，属于动物传染病学领域。基于Cap蛋白的遗传进化显示，PCV3进一步划分为2个基因亚型（G1基因型和G2基因型），进一步分析发现，PCV3‑G1和PCV...; 陈如敬陈秋勇吴学敏王晨燕周伦江严山车勇良王隆柏魏宏刘玉涛; 文献传递

猪伪狂犬病病毒与猪圆环病毒2型双重PCR检测方法的建立及初步应用被引量：1: 2015年; 目的为建立一种能同时鉴别猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)混合感染的诊断方法。方法与结果根据GenBank中公布的猪伪狂犬病病毒和圆环病毒2型的基因序列,分别设计一对特异性引物,扩增长度分别为612bp和238bp。将PCR产物进行测序,与PRV"Yangsan"株和PCV2"JX0301"株的同源性分别为98.6%和99.2%。通过反应条件的优化,建立同时检测PRV和PCV2的双重PCR方法。利用该方法对临床采集的78份疑似病料进行检测,其中59份为PCV2阳性,17份PRV阳性,其中11份为PRV和PCV2共感染。结论建立的双重PCR检测方法可以用于PRV和PCV2的临床快速鉴别诊断和流行病学调查。; 吴学敏陈如敬车勇良王隆柏陈秋勇严山刘玉涛周伦江; 关键词：猪伪狂犬病病毒

用RT-PCR方法检测猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染: ＜正＞猪瘟（CSFV）又称烂肠瘟,是由黄病毒科瘟病毒属成员之一的猪瘟病毒（CSFV）引起的一种高度接触性传染病,被OIE列为A类传染病,给养猪业造成了重大的经济损失。目前,猪瘟在发病特点上,既有高病死率的急性、典型猪瘟,...; 王隆柏周伦江吴学敏俞玉鸿严山; 文献传递

猪细环病毒k2型SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立被引量：2: 2016年; 为建立检测猪细环病毒k2型（Porcine Torque teno sus virus k2,PTTSu Vk2）SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,本研究根据PTTSu Vk2 ORF2基因序列特征设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测PTTSu Vk2的实时荧光定量PCR方法,该方法在PTTSu Vk2 ORF2基因含量为1.92×102~1.92×107 copies/μL反应范围内有很好的线性关系。扩增产物溶解曲线分析仅出现单一特异峰,无引物二聚体,Tm值为（83.83±0.08）℃,对猪圆环病毒（Porcine circovirus type 1 and type 2,PCV1和PCV2）、猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）、猪博卡病毒5型（Porcine bovavirus type 5,Pbo V5）、猪细环病毒1a型（PTTSu V 1a）和1b型（PTTSu V 1b）核酸均无阳性信号扩增,可重复性好,组内变异系数为0.39%~1.69%,组间变异系数0.69%~2.19%。本方法的建立可用于定量分析PTTSu Vk2感染噬性组织器官和感染程度,为PTTSu Vk2的流行病学研究及临床诊断等提供了一种可靠的方法。; 陈如敬黄秋宇修金生吴学敏严山车勇良周伦江; 关键词：ORF2基因 SYBR

应用双重PCR方法检测猪伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型: 本研究依据GenBank中公布的猪伪狂犬病毒和圆环病毒2型的基因序列,分别设计一对特异性引物,预计扩增长度分别为612bp和238bp.将PCR产物进行克隆测序,与PRV'Yangsan'株和PCV-2'JX0301'株...; 吴学敏陈如敬车勇良王隆柏刘玉涛严山周伦江; 关键词：猪圆环病毒病同源性分析; 文献传递

一种猪繁殖与呼吸综合征病毒血清学鉴别诊断试剂盒: 本发明提供一种猪繁殖与呼吸综合征病毒血清学鉴别诊断试剂盒。本发明建立的PRRSV血清学鉴别诊断试剂盒主要针对PRRSV类型有经典美洲型PRRSV、欧洲型PRRSV和高致病性PRRSV进行血清学鉴别诊断。第1个ELISA板...; 陈如敬吴学敏周伦江陈秋勇车勇良严山王晨燕王隆柏魏宏刘玉涛; 文献传递

猪流行性腹泻病毒结构蛋白基因的遗传变异分析: 为探明2012-2014年福建省流行PEDV毒株结构蛋白基因的变异情况,本研究对19株PEDV的E基因和18株PEDV的M基因进行了克隆和序列分析。结果表明:与CV777标准毒株相比较,福建流行PEDV毒株的E和M基因存...; 王隆柏林裕胜王晨燕车勇良陈如敬吴学敏严山周伦江; 关键词：猪流行性腹泻病毒; 文献传递

PRRSV N与GP5蛋白抗原表位的串联表达及其间接ELISA检测方法的建立被引量：1: 2017年; 【目的】建立基于N与GP5蛋白抗原表位串联的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体ELISA检测方法,为开发准确、廉价的PRRSV抗体检测试剂盒奠定基础。【方法】将PRRSV的N蛋白和GP5蛋白抗原表位串联优化后进行原核表达,以表达的目的蛋白为抗原,通过优化反应条件建立检测PRRSV抗体的ELISA方法,对其特异性、重复性进行检测。用建立的间接ELISA方法和商品化IDEXX试剂盒同时对临床送检的45份猪血清样品进行检测,计算其符合率。【结果】SDS-PAGE和Western Blot分析表明,表达的目的蛋白分子质量约为24.7ku,具有良好的生物学活性,且为可溶性表达。目的蛋白经纯化后作为抗原包被ELISA平板,建立检测PRRSV抗体的间接ELISA方法,优化后的ELISA条件为:抗原(纯化后的目的蛋白)包被量为5μg/mL、一抗(猪血清)1∶80稀释、酶标二抗1∶5 000稀释,以含50g/L脱脂奶粉的PBST作为封闭液,37℃孵育60min,抗体(一抗和酶标二抗)于37℃孵育90min,TMB避光显色8min;间接ELISA的判定标准为:OD450≥0.345 2为阳性,OD450<0.345 2为阴性。所建立的间接ELISA方法特异性强,对猪常见病原,如猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒和猪流行性乙型脑炎病毒高免血清检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为1.02%~3.94%和1.38%~4.83%。用所建立的间接ELISA方法对临床送检45份猪血清样品的检测阳性率为84.44%(38/45),商品化IDEXX试剂盒检测的阳性率为80%(36/45),2种方法的符合率为94.73%(36/38)。【结论】成功建立了基于N与GP5蛋白抗原表位串联的PRRSV抗体ELISA检测方法。; 陈如敬周伦江吴学敏车勇良王晨燕王隆柏黄晓凤严山刘玉涛魏宏; 关键词：N蛋白 GP5蛋白抗原表位间接ELISA

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严山

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