丁晓然
- 作品数：15 被引量：28H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学经济管理化学工程更多>>
- 靶向ASGPR的反义核酸与抗HBV药物联合用药的体外抗HBV作用被引量：6
- 2006年
- 研究以宿主基因ASGPR为靶的反义核酸与抗乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)药物联合应用的抗-HBV作用,为HBV感染的联合治疗和用药提供新的思路。以HepG2.2.15细胞为靶细胞,脂质体为载体将靶向ASGPR的硫代反义寡核苷酸(ASODN)转染至HepG2.2.15细胞中,6h后加入抗病毒药拉米夫定(3TC)或阿地福韦(ADV),72h后收集细胞培养液,采用酶联免疫法及荧光定量PCR法测定ASODN与抗-HBV药物联合应用后对细胞培养液中HBsAg、HBeAg及细胞分泌HBV DNA的抑制作用。采用金正均Q值法对数据进行分析。拉米夫定(3TC)和阿地福韦(ADV)分别与ASODN联用对HBsAg的抑制呈相加或协同作用。随着ADV浓度的增加,两药的协同作用下降。3TC与ASODN联用对HBeAg的抑制呈拮抗、相加和协同作用,其拮抗作用随着3TC浓度的增加逐渐减弱。ADV与ASODN联用对HBeAg的抑制只呈相加作用。3TC和ADV分别与ASODN联用对HBV DNA的抑制均表现为相加作用或协同作用,取ADV0.5μmol/L与取ASODN0.2μmol/L联用时对HBV DNA的抑制率可提高到72.6%。ASODN在一定条件下分别与3TC及ADV联用有相加或协同抗HBsAg、HBeAg及HBV DNA的表达,尤以抗HBsAg作用显著增强。
- 丁晓然杨静伯晓晨张敏丽陈苏红王升启
- 关键词：寡核苷酸反义乙型肝炎病毒
- 大鼠STAT3特异性shRNA慢病毒载体的构建与鉴定
- 2012年
- 目的在已经成功构建4个针对STAT3的shRNA质粒表达载体的基础上,筛选出干扰效果最佳者进行慢病毒包装并鉴定。方法将STAT3的干扰质粒shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4及Control1(空载体对照),Control2(无效shRNA对照)分别转染目的细胞(大鼠肾小球系膜细胞),48h后收集细胞提取mRNA,以RT-PCR检测各组分STAT3表达量。对于筛选所得干扰效果最佳的质粒,采用pPACKH1TM慢病毒载体系统进行病毒包装。利用绿色荧光蛋白作为报告基因,对感染效率及病毒滴度进行检测。结果 RT-PCR检测结果显示,shRNA3样品受干扰的效果最佳。成功构建了慢病毒载体Lenti-shRNA3,共转染293T细胞24h、48h,荧光显微镜下可见强绿色荧光,细胞生长状态良好,表明病毒包装成功。转染HT1080细胞,收集慢病毒液,测定病毒滴度为3.34×108ifu/ml,适合感染目的细胞。结论成功构建了STAT3基因的shRNA慢病毒表达载体,为进一步应用奠定了基础。
- 张五星周伟赵学伟丁晓然周喆张智敏周焕芝石炳毅
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰(RNAI)
- 一种抗乙型肝炎病毒药物的新靶标及其用途
- 本发明涉及一种抗乙型肝炎病毒(HBV)药物的新发明靶点及其用途。具体说是抑制纤连蛋白(fibronectin)的表达可以抑制HBV的活性，以纤连蛋白为靶可以有效地抑制HBV的复制及其基因和蛋白的表达，从而用于抗HBV药物...
- 王升启杨静伯晓晨丁晓然张毅张敏丽
- 文献传递
- 重组人磷脂爬行酶1的原核表达及纯化被引量：1
- 2011年
- 目的:建立重组人磷脂爬行酶1(hPLSCR1)原核表达及纯化工艺。方法:PCR扩增hPLSCR1编码基因并连接到原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达,Western印迹鉴定所表达蛋白;优化表达条件后,Ni2+柱亲和层析纯化重组蛋白。结果:构建了pET-28a-PLSCR1重组质粒,诱导表达后,经SDS-PAGE分析目的蛋白的表达量达32%,Ni2+金属螯合法纯化目的蛋白后纯度达到95%以上,Western印迹验证了融合蛋白的特异性。结论:建立了高效稳定的His-PLSCR1表达体系,获得大规模生产His-PLSCR1的分离纯化工艺,为进一步研究其蛋白功能奠定了基础。
- 朱向前杨静丁晓然王升启
- 关键词：原核表达纯化
- 多肽介导的核酸药物递送系统研究进展被引量：1
- 2015年
- 核酸药物作为新型基因治疗药物备受关注,但生物学稳定性差、易被体内核酸酶降解、生物利用度低、靶组织内聚集浓度低等是制约其发展的主要因素。新的药物递送技术的快速发展在一定程度上解决了核酸药物的稳定性及靶向递送问题,极大地推动了核酸药物的研发进展。尤其是多肽蛋白类递送载体,已成为核酸药物递送系统研究领域的热点之一。介绍核酸药物递送载体多肽修饰的两种主要方式——共价缀合和非共价络合,重点综述近年来多肽缀合物和复合物以及多肽修饰的载体在核酸药物递送系统中的应用研究,探讨多肽介导的核酸药物递送系统在应用中存在的问题,为新型核酸药物递送系统研发提供参考。
- 丁晓然王升启
- 关键词：药物递送系统
- H1N1型流感病毒血凝素抑制肽的筛选研究被引量：7
- 2013年
- 目的以流感病毒血凝素(HA)为作用靶点,筛选新型抗流感多肽药物。方法通过噬菌体展示技术,从随机十二肽库中筛选HA结合肽,并对筛选获得的多肽进行细胞及鸡胚水平的抗H1N1活性验证。结果筛选获得了9条HA结合肽,其中H6具有显著的抗病毒活性,其抑制A/FM1/1/47(H1N1)、A/PR/8/34(H1N1)两株流感病毒致细胞病变的IC50值分别为37.3和48.5μmol/L,抑制两株病毒在鸡胚内复制的IC50值分别为26.7和33.4μmol/L。结论 H6有显著的抗H1N1活性,具有开发成新型抗流感病毒药物的潜力。
- 汪崇文丁晓然杨静邓新秀高婵冯指泉鲁丹丹王升启
- 关键词：流感病毒噬菌体展示
- 用Far-Western印迹技术筛选人肝组织中与乙肝病毒表面抗原PreS1相互作用的蛋白被引量：3
- 2010年
- 目的:利用Far-Western印迹技术从正常人肝组织中筛选乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原PreS1结合蛋白,为阐明HBV的感染致病机理提供依据。方法:提取正常人肝组织细胞膜蛋白,双向电泳展示后转膜,对表达纯化获得的PreS1的重要片段与GST的融合蛋白PreS/1-48myr-GST进行Far-Western印迹实验,对筛选获得的蛋白点切胶,质谱鉴定。结果:对PreS/1-48myr-GST融合蛋白进行Far-Western-2D筛选,共获得22个蛋白点,经质谱鉴定获得15个候选相互作用蛋白,其中膜蛋白Ezrin可能在HBV感染致病过程中具有重要作用。结论:Ezrin蛋白能够与乙肝病毒表面抗原PreS1结合,其在HBV感染致病过程中的重要作用值得探索。
- 苏婧杨静张松丁晓然王学军胡伟朱向前张敏丽王升启
- 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原PRES1结合蛋白EZRIN
- 抑制纤连蛋白表达的反义寡核苷酸的结构和用途
- 本发明涉及一种新的抗乙型肝炎病毒靶标及相应的反义寡核苷酸药物的结构和用途。具体说是靶向纤连蛋白(fibronectin)抗乙型肝炎病毒(HBV)反义寡核苷酸的结构和用途。Fibronectin是人肝脏窦状隙的细胞外基质成...
- 王升启杨静伯晓晨丁晓然张敏丽
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒假病毒体外感染树鼩原代肝细胞模型的建立被引量：4
- 2009年
- 目的:建立乙型肝炎病毒假病毒(HBVpp)体外感染树鼩原代肝细胞(PTH)模型。方法:通过肝脏原位两步灌注法分离PTH并对其冻存方法进行优化,通过共转染293T细胞生产基于慢病毒包装系统的HBVpp并考察其感染的种属和组织特异性。结果:通过肝脏原位两步灌注法分离了PTH,并优化了PTH冻存液的配方;包装的HBVpp具有与HBV真病毒类似的感染种属和组织特异性。结论:该模型的建立对深化HBV进入肝细胞机制的研究具有重要意义。
- 王学军田琳琳杨静周喆丁晓然苏婧李丽红王升启
- 关键词：乙型肝炎病毒假病毒
- 抗乙型肝炎病毒药物靶标的筛选和验证
- 乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界范围的严重公共卫生问题之一，但是目前没有特效防治方法，存在的关键问题在于HBV基因组较小，易发生突变，限制了靶向病毒的抗病毒药物的发展。最近的研究表明，抑制宿主细胞中某些蛋白的功能可以阻断...
- 丁晓然
- 关键词：乙型肝炎病毒基因表达药物作用靶点反义寡核苷酸
- 文献传递
