黄海浪
- 作品数：11 被引量：14H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 分泌型原核穿梭表达质粒pBCG-SP-HSP65的构建及其表达
- 用PCR技术从BCG基因组中扩增出抗原85B(Ag85B)的信号肽(SP)DNA序列,从pCMVMTHSP65质粒中扩增出人结核杆菌HSP65全长基因。利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒pBCG-2100的人结核杆...
- 戴五星陈智浩高红黄海浪梁靓皇甫永穆
- 关键词：信号肽
- 文献传递
- 人结核杆菌热休克蛋白65重组卡介苗疫苗的构建、表达及鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的 构建人结核杆菌热休克蛋白 6 5 (HSP6 5 )重组卡介苗 (BCG)疫苗。方法 用PCR技术从BCG基因组中扩增出抗原 85B (Ag85B)的信号肽DNA序列 ,从 pCMV MTHSP 6 5质粒中扩增出HSP6 5全长基因。利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒 pBCG 2 10 0的人结核杆菌HSP70启动子下游 ,构建一个分泌型的原核穿梭表达质粒pBCG SP HSP6 5。利用电穿孔的方法将该质粒转入BCG中 ,经热诱导后 ,用SDS PAG电泳来观察其表达水平。利用Westernblot来检验HSP6 5的生物学活性。结果 酶切鉴定、PCR和测序分析结果表明 ,所克隆的信号肽DNA片段和热休克蛋白 6 5DNA片段与报道结果完全一致 ,重组体的连接方向正确 ,阅读框与预期完全一致。热诱导后 ,重组BCG表达的 6 5kD (1kD =0 992 1ku)蛋白占菌体总蛋白的 35 6 7% ,占裂解物上清总蛋白的 74 0 9% ,表明重组的HSP6 5基因能在BCG中高效表达 ,表达的蛋白大部分以可溶状态存在。通过Westernblot证实分泌的该蛋白能与结核杆菌HSP6 5的抗体特异性结合。结论 成功构建分泌型原核穿梭表达质粒pBCG SP HSP6 5 ,重组的HSP6 5基因能在BCG中高效表达 ,表达的HSP6 5具有生物学活性 ,重组BCG疫苗构建成功。
- 高红戴五星黄海浪陈智浩梁靓程继忠皇甫永穆
- 关键词：HSP65BCG结核杆菌重组卡介苗重组体
- 分枝杆菌重组疫苗rBCG-Sj26 GST对小鼠的保护作用被引量：1
- 2003年
- 为了研究分枝杆菌重组疫苗rBCG Sj26GST对小鼠的保护作用,用分枝杆菌重组疫苗rBCG Sj26GST免疫雄性BALB/c,结核杆菌H37Ra进行攻击,检测小鼠淋巴细胞刺激指数(SI),腹腔巨噬细胞培养上清释放NO量,小鼠血清IFN γ、IL 2的含量,并计数小鼠肝、肺活细菌数.rBCG Sj26GST疫苗免疫的小鼠,其脾淋巴细胞刺激指数(SI)为4.12±1.11,与对照组(2.63±0.47)、载体组(1.06±0.08)和BCG组(1.50±0.41)相比,差异具有显著意义(P<0.05);rBCG Sj26GST组巨噬细胞释放的NO量明显高于对照组(P<0.05).小鼠血清IFN γ的浓度较对照组高33%,但差异无显著意义(P>0.05);与载体组相比,差异具有显著意义(P<0.05).血清白介素 2的浓度较对照组高43%,较载体组高38%,但差异无显著意义(P>0.05).经rBCG Sj26GST免疫的小鼠受结核杆菌攻击后其肺、肝脏结核菌数较对照组少.分枝杆菌重组疫苗rBCG Sj26GST免疫小鼠后能提高小鼠淋巴细胞刺激指数,刺激IFN γ、IL 2的分泌,说明此疫苗能诱导CD+4Th1和CD+8CTL的细胞免疫反应,增强小鼠细胞免疫功能,并使小鼠能抵抗结核杆菌的攻击.
- 胡佳杰黄海浪皇甫永穆
- 关键词：结核分枝杆菌
- 重组BCG-HSP70疫苗的免疫保护作用研究
- 2002年
- 胡佳杰文学明肖爱清王冀春黄海浪
- 关键词：免疫保护作用结核病免疫
- 人结核分枝杆菌hsp70 DNA疫苗的免疫保护作用研究被引量：3
- 2002年
- 目的研究人结核分枝杆菌hsp70DNA疫苗对小鼠的免疫保护作用。方法用人结核分枝杆菌hsp70DNA疫苗免疫雄性BALB c小鼠 ,8周后 ,用结核杆菌H37Ra进行攻击 8周 ,检测小鼠淋巴细胞刺激指数 (SI)、腹腔巨噬细胞培养上清释放NO量、小鼠血清IFN γ、IL 2的含量 ,并计数小鼠肝、肺活细菌数。结果hsp70DNA疫苗免疫的小鼠 ,其脾淋巴细胞刺激指数 (SI)为 3 2 4± 0 57,与对照组 (2 63± 0 47)比较 ,差异不具有显著意义 ;腹腔巨噬细胞培养释放NO量与对照组比较无显著差异 ,但较对照组高 2 6 %。免疫小鼠其血清IFN γ含量为 981 40pg ml,与对照组 (565 90pg ml)相比 ,差异具有显著意义 (P <0 0 5) ;小鼠血清中IL 2的浓度较对照组明显提高 (P <0 0 5)。经hsp70DNA疫苗免疫的小鼠受结核杆菌攻击后其肺、肝脏结核杆菌数较对照组少。结论人结核分枝杆菌hsp70DNA疫苗免疫小鼠后能提高小鼠腹腔巨噬细胞培养上清释放NO量 ,刺激IFN γ、IL 2的分泌 ,说明此疫苗能诱导CD+4 Th1和CD+8CTL的细胞免疫反应 ,增强小鼠细胞免疫功能 。
- 胡佳杰文学明肖爱清黄海浪
- 关键词：结核分枝杆菌免疫保护动物实验
- 人结核杆菌HSP65重组BCG疫苗的构建、表达及鉴定
- 在结核杆菌感染中,热休克蛋白65(HSP65)是最重要的免疫保护性抗原之一。用PCR技术从卡介苗(BCG)基因组中扩增出抗原85B(Ag85B)的信号肽DNA序列,从pCMVMTHSP65质粒中扩增出人结核杆菌HSP65...
- 高红戴五星黄海浪陈智浩梁靓皇甫永穆
- 关键词：信号肽重组BCG
- 文献传递
- 大肠杆菌-分枝杆菌分泌型穿梭表达质粒pBCG-SP-HSP65的构建及人结核杆菌HSP65的表达被引量：2
- 2004年
- 用PCR技术从BacillusCalmette gu啨ｒｉｎ(BCG)基因组中扩增出抗原 85B(Ag85B)的信号肽 (SP)DNA序列 ,从pCMVMTHSP65质粒中扩增出人结核杆菌HSP65全长基因。利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒pBCG 2 10 0的人结核杆菌HSP70启动子下游 ,构建成分泌型原核穿梭表达质粒 (pBCG SP HSP65)。酶切鉴定、PCR和测序分析结果均表明分泌型原核穿梭表达质粒pBCG SP HSP65构建成功。利用电穿孔将该质粒转入耻垢分枝杆菌(Mycobacterialsmegmatis,MS)中 ,用卡那霉素筛选出阳性重组子。经热诱导后用SDS PAGE观察到在耻垢分枝杆菌中 65kD蛋白占总蛋白的 2 0 % ,而在重组耻垢分枝杆菌表达的 65kD蛋白占菌体总蛋白的 3 4 46% ,占裂解物上清总蛋白的 68 56% ,表明重组的HSP65基因能在耻垢分枝杆菌中高效表达 ,表达的蛋白大部分以可溶状态存在。通过Western blot证实分泌的该蛋白能与结核杆菌HSP65的抗体特异性结合 ,说明该重组蛋白具有HSP65的生物学活性。
- 戴五星陈智浩高红黄海浪梁靓程继忠皇甫永穆
- 关键词：大肠杆菌分枝杆菌信号肽
- 重组耻垢分枝杆菌-Sj26GST疫苗的免疫保护作用研究被引量：2
- 2003年
- 目的 初步研究重组耻垢分枝杆菌疫苗 r Mc- Sj2 6 GST (recom binant M.smegmatism c2 1 5 5 - Sj2 6 GST)对小鼠的免疫保护作用。方法 用耻垢分枝杆菌重组疫苗 r Mc- Sj2 6 GST免疫雄性 BAL B/ c小鼠 ,检测小鼠淋巴细胞刺激指数 (SI) ,腹腔巨噬细胞培养上清释放 NO量 ,小鼠血清IFN- γ、IL- 2的含量 ,并计数小鼠肝、肺活细菌数。结果 小鼠脾淋巴细胞刺激指数 (SI)为 2 .6 4±1 .37,与 Mc组 (载体组 ) 1 .2 8± 0 .4 1相比 ,差异具有显著性 ;小鼠血清 IFN- γ为 1 96 .4 3pg· ml- 1 ,与 Mc组 1 1 2 .5 7pg· ml- 1相比 ,差异有显著性 ,较对照组高 4 1 % ;小鼠血清中 IL- 2的浓度较对照组高。经 r Mc- Sj2 6 GST疫苗免疫的小鼠受结核杆菌攻击后其肺、肝脏结核杆菌数较对照组少。结论 耻垢分枝杆菌重组疫苗 r Mc- Sj2 6 GST增强了小鼠细胞免疫功能 。
- 胡佳杰肖爱清黄海浪皇甫永穆
- 关键词：耻垢分枝杆菌免疫保护作用结核病传染病
- 结核分支杆菌Hsp70和Hsp65 DNA疫苗免疫原性比较研究被引量：2
- 2002年
- 戴五星黄海浪高红皇甫永穆
- 关键词：结核分支杆菌HSP70疫苗免疫原性结核病
- 重组BCG-HSP70疫苗有关毒性实验研究被引量：2
- 2002年
- 目的初步研究分枝杆菌重组疫苗rBCG -HSP70对小鼠的有关毒性作用。方法用分枝杆菌重组疫苗rBCG -HSP70免疫雄性BALB/c小鼠 ,16周后 ,称小鼠体重 ,摘眼球取血 ,测定小鼠的淋巴细胞、血红蛋白、白细胞及血小板含量 ;剩余血离心得到血清 ,测定小鼠肌酐及ALT ;处死小鼠 ,分离出肺、肾、肝并分别测定其重量。结果rBCG -HSP70疫苗免疫的小鼠 ,其淋巴细胞数较对照组高 (P<0.05) ;小鼠体重、各脏器重量、各血象指标、血清肌酐和ALT含量与对照组无差异 (P>0.05)。结论分枝杆菌重组疫苗rBCG -HSP70免疫小鼠后能提高小鼠淋巴细胞数 ,说明此疫苗能提高小鼠的免疫功能 。
- 胡佳杰文学明肖爱清黄海浪
- 关键词：结核分枝杆菌毒性作用结核病
