马可
- 作品数：6 被引量：14H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院微循环研究所更多>>
- 发文基金：国家社会公益研究专项计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- SELDI蛋白质芯片筛选差异蛋白分子的二级鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的探讨以SELDI蛋白质芯片筛选后的细胞差异表达蛋白的分离和鉴定方法及其意义。方法以经体外培养及10μmol/L褪黑素药物干预的内皮祖细胞差异表达蛋白质为研究对象,分别采用Tricine-SDS-PAGE和双向凝胶电泳方法进行差异蛋白分离及结果比较,以FT-MS二级质谱鉴定。结果经Tricine-SDS-PAGE分离后,选取分子量为53 ku左右的趋势性差异表达蛋白进行FT-MS分析,质谱鉴定为微管蛋白-α3(吻合度评分为87)。经双向凝胶电泳分离后,于凝胶近酸性端、分子质量在72～95 ku之间区域,选取蛋白表达量较高的一点,质谱鉴定其为人热休克蛋白90-α(吻合度评分为91)。结论 Tricine-SDS-PAGE对于大致35～62 ku范围的蛋白分离较清晰、重复性好且样品用量少,2-DE对最低上样量有较严格要求,但它能提供分子质量、等电点双重参数来更准确定位所感兴趣蛋白点,且对大分子质量蛋白的分离效果更佳,经质谱鉴定结果理想。
- 卡米拉.阿不里米提仉红刚马可王琴张秋菊修瑞娟
- 关键词：SELDI双向凝胶电泳质谱
- 分泌型白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)在肺癌组织和外周血中的水平及其临床意义的研究
- 目前肺癌是全球最常见的恶性肿瘤之一。尽管诊断技术不断提高，但大多数患者就诊时病情已属晚期，因此肺癌的早期诊断尤为重要。同时，不同患者对治疗的反应不同，而相同分期的患者接受相似治疗后的反应也可能迥异，一个能有效评估患者治疗...
- 马可
- 文献传递
- SELDI蛋白质芯片检测技术被引量：8
- 2008年
- 从基因组学到蛋白质组学,到当前有关小RNA对蛋白质合成调控的研究无一例外地说明蛋白质是直接发挥对生命活动调控的物质。同基因研究相比较,由于蛋白质分子种类繁多,有复杂的修饰成份和空间结构,使得蛋白质研究比较困难。新近发展起来的蛋白质芯片技术为蛋白质的检测和研究提供了新的技术平台,比如荧光标记技术,蛋白质指纹图谱-飞行时间-质谱联用技术(SELDI蛋白质芯片),表面等离子基元共振生物传感器技术(SPR芯片)以及初步应用的光学蛋白质芯片技术,其中,后三种是新兴的无需标记进行蛋白质检测的技术。就SELDI蛋白质芯片及其新近研究作一综述。
- 马可仉红刚
- 关键词：蛋白质芯片疾病检测
- 褪黑素对人脐血来源EPC作用及应用蛋白质芯片检测蛋白质表达差异研究
- 目的：内皮祖细胞（endothelial progenitot cells，EPCs）是血管内皮细胞的前体细胞，其在组织缺血后的血管发生和血管新生中起着重要作用。本研究旨在建立体外培养脐血来源内皮祖细胞的培养体系及褪黑素...
- 马可
- 关键词：SELDI细胞蛋白细胞鉴定蛋白质鉴定褪黑素
- 文献传递
- 以SELDI芯片进行细胞标本蛋白分析的方法学研究被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨以SELDI芯片技术进行细胞标本蛋白分析的最适方法及条件,筛选细胞标本蛋白表达差异。方法:对细胞标本分别用超声裂解法,U9细胞裂解缓冲液配方和自配细胞裂解液提取蛋白,以BCA法测定蛋白浓度;分别以磁珠活化后点样和生物芯片处理器点样使蛋白样品与芯片结合;并对提取蛋白进行检测,比较不同蛋白浓度梯度点样及WCX2,SAX2,IMAC-Cu,H50芯片捕获蛋白差异,用WCX2芯片筛选蛋白差异表达。结果:相同培养条件细胞以上述三种不同蛋白提取方法获得的蛋白浓度分别为:0.25±0.034μg/μl,0.6±0.06μg/μl,1.02±0.077μg/μl;生物芯片处理器点样法操作简单,要求样本量较少,点样时间短;SELDI芯片蛋白质峰图谱与蛋白浓度呈较好的正相关;WCX2,SAX2,H50,IMAC-Cu芯片捕获的蛋白质种类有较大区别;在分子量1000～300000Da范围内,以WCX2芯片共检测到87个差异蛋白峰,其中17个呈趋势变化。结论:上述三种方法比较,选用自配的细胞裂解液提取蛋白的浓度较高且更适于芯片研究;生物芯片处理器能较好地使蛋白与芯片结合;SELDI芯片能准确定位蛋白,且其蛋白质峰与被测蛋白浓度呈正相关变化;SELDI各芯片捕获蛋白类型不同,选择适宜芯片或联合运用芯片检测更易获得较理想蛋白差异表达结果。
- 马可王琴仉红刚张秋菊修瑞娟
- 关键词：SELDI细胞蛋白
- 内皮祖细胞的体外培养被引量：4
- 2010年
- 目的建立一个体外培养脐血来源内皮祖细胞(EPC)的培养体系。方法脐带血经密度梯度离心获得单个核细胞,按本室已建立的培养体系培养细胞,免疫细胞化学和流式细胞术对培养7 d后的细胞进行CD34、CD133、vWF、CD146及CD144鉴定。结果接种后前5 d为生长的潜伏期,细胞开始贴壁,无明显扩增。第6天平均每个视野下细胞数目为287±45;第9天细胞数为282±46;第12天开始,细胞进入对数生长期,细胞数为805±67(P<0.05);第19天细胞继续增殖,细胞数为1 115±182(P<0.05);第23天时,细胞进入凋亡期,数量明显减少,为265±61(P<0.05)。vWF、CD146、CD144表达阳性。流式细胞术结果表明,梭形样细胞群体中,CD34阳性率为88.98%±5.15%(P<0.05),CD133阳性率为1.20%±1.44%(P<0.05)。结论利用本实验室的培养体系成功培养出内皮祖细胞。
- 王琴马可仉红刚张秋菊修瑞娟
- 关键词：内皮祖细胞细胞培养细胞鉴定
