顾卉
- 作品数：37 被引量：34H指数：4
- 供职机构：中国医科大学附属盛京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 神经干细胞增殖在小儿先天神经管畸形发生发展中的作用被引量：3
- 2021年
- 神经管畸形(neural tube defects,NTD),是一种严重的先天畸形,发病率约1/1000,在我国NTD的平均发病率为1.295/1000[1]。近年来在发达国家发病率有改善,但在拉丁美洲、非洲、中东等地区发病率仍居高不下,在1/1000~11/1000之间[2]。
- 付佳琳顾卉袁正伟
- 关键词：神经管畸形神经干细胞增殖
- 宫内生长受限仔鼠肾脏发育和细胞外信号调节激酶的表达与活性
- 2012年
- 目的研究宫内生长受限(IUGR)仔鼠肾组织中调控输尿管芽分支发生的关键因子细胞外信号调节激酶(ERK1/2)及下游基因Wnt4的表达与活性,探讨其与肾脏发育不良和高血压发生的关系。方法孕鼠随机分为对照组(n=30)和IUGR组(n=30),孕期低蛋白饮食法建立IUGR模型,自然分娩后部分新生仔鼠(0 d)处死取其双肾称重,其他仔鼠常规饲养。测定3周龄和8周龄仔鼠的肾指数、肾小球数目、肾功能和血压,采用蛋白印迹法测定出生0 d和3周仔鼠肾脏中ERK1/2和Wnt4蛋白水平和磷酸化水平,荧光定量反转录(RT)-PCR法检测其肾脏Wnt4 mRNA水平。结果新生和3周龄IUGR仔鼠体质量和肾质量均低于对照组,8周IUGR仔鼠体质量超过对照组,但肾指数依然降低,肾小球数目明显减少(Pa<0.05)。8周IUGR仔鼠血压升高、内生肌酐清除率(CCr)减低,且肾小球数目与血压呈负相关(Pa<0.05)。出生0 d和3周时IUGR仔鼠肾组织中ERK1/2磷酸化水平降低(Pa<0.05),Wnt4的表达水平始终低于同龄对照组(Pa<0.05)。结论在肾单位发生和生长成熟阶段,宫内蛋白营养不良的子代肾组织ERK蛋白活性降低及诱导Wnt4表达异常可能是肾小球数目减少、成年肾滤过率降低引发高血压易感的机制之一。
- 刘晓梅顾卉焦伊胜苗佳宁袁正伟王爱媛
- 关键词：宫内生长受限肾脏细胞外调节蛋白激酶
- 用于非综合征型唇腭裂产前无创诊断的脂质分子标志物及其应用
- 本发明公开了用于非综合征型唇腭裂胎儿产前无创诊断的脂质分子标志物（FA(20:4)、LPC(18:0)和PC(16:0e_22:0)）及其应用，属于医药生物技术领域。本发明首先利用脂质组学检测平台的非靶和靶向脂质技术，分...
- 贾杉杉袁正伟杨春清张强顾卉魏晓伟马巍刘丹罗文婷曹嵩颖
- microRNAs作为神经管畸形的无创产前筛查分子标志物及其应用
- 本发明公开了microRNAs作为神经管畸形的无创产前筛查分子标志物及其应用，属于医药生物技术领域。提供用于NTDs胎儿产前无创诊断的分子标志物及其应用，所述分子标志物由hsa‑miR‑223、hsa‑miR‑187和h...
- 顾卉袁正伟黄琬淇魏晓伟马巍刘丹罗文婷曹嵩颖贾杉杉
- 一种与干细胞增殖相关的Abca4基因及其应用
- 本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种与干细胞增殖相关的Abca4基因及其应用。一种Abca4基因、Abca4基因编码的蛋白质、或含有Abca4基因重组载体在制备用于干细胞体外培养扩增的相关试剂中的应用。干预Abca4...
- 袁正伟黄捷婷顾卉魏晓伟马巍刘丹罗文婷
- GST-LMO1融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达被引量：3
- 2011年
- 目的构建GST-LMO1融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法以人胎脑文库为模板,用PCR方法法扩增出LMO1基因全长及各个截短突变体,通过BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点分别将其定向插入pGEX-5X-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突变体,通过酶切电泳鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突变体,并用Western blot方法证实了GST-LMO1全长及各个截短突变体融合蛋白的表达。结论成功构建了LMO1全长及其截短突变体原核表达载体,并证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为LMO1结构与功能的研究提供了前提基础。
- 顾卉佟宇鑫刘彤李慧李丹妮袁正伟
- 关键词：质粒原核表达
- COLIA1调控小鼠神经细胞迁移在神经管畸形中的作用被引量：1
- 2021年
- 目的探讨Ⅰ型胶原蛋白α1(COLIA1)调控神经细胞迁移活动对小鼠神经管闭合的作用。方法利用全反式维甲酸(ATRA)诱导建立神经管畸形(NTDs)小鼠模型。采用Western blotting检测COLIA1,上皮细胞间质转化(EMT)相关指标E-cadherin、Snail、Vimentin表达情况。在C17.2神经干细胞中沉默COLIA1后,Western blotting检测COLIA1对E-cadherin、Snail和Vimentin表达的调节作用,通过Transwell细胞迁移实验和细胞划痕实验观察细胞迁移生物学活动变化。结果在ATRA诱导的NTDs小鼠模型中,COLIA1表达下调,迁移相关的EMT指标Snail、Vimentin表达下调,E-cadherin表达上调。在C17.2神经干细胞中,沉默COLIA1表达后,EMT指标Snail、Vimentin表达下调,E-cadherin表达上调,细胞迁移能力降低。结论COLIA1通过影响细胞迁移抑制NTDs的形成。
- 黄天楚黄琬淇顾卉袁正伟
- 关键词：神经管畸形细胞迁移上皮细胞间质转化
- miR-92a-3p在小鼠胚胎神经管闭合中的作用及机制
- 2023年
- 目的探讨miR-92a-3p与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NOX4)之间的相互作用,以及两者在神经管畸形(neural tube defect,NTD)中对细胞迁移的影响。方法实验动物采用C57BL/6J小鼠,孕鼠随机分为NTD组与对照组,每组30只,NTD组采用全反式维A酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导NTD模型,于E9.5采集胚胎样本。实验所用细胞系为小鼠神经干细胞C17.2,转染NOX4过表达质粒、miR-92a-3p模拟物/抑制剂、模拟物对照/抑制剂对照。采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测胚胎和C17.2细胞中miR-92a-3p表达,采用蛋白质印迹法检测NOX4的表达。通过双荧光素酶报告基因实验明确miR-92a-3p对NOX4的结合及靶向调控关系。采用细胞划痕实验与Transwell实验观察miR-92a-3p和NOX4对细胞迁移活动的影响。统计学方法采用单因素方差分析、独立样本t检验。结果NTD组胚胎miR-92a-3p表达低于对照组(0.753±0.052与1.006±0.126,t=3.212,P=0.033),NOX4蛋白表达高于对照组(0.870±0.039与0.688±0.056,t=4.621,P=0.010)。在转染NOX43’端非翻译区(3’untranslated regions,3’UTR)荧光素酶报告基因的C17.2细胞中,共转染miR-92a-3p模拟物组的荧光素酶活性低于模拟物对照组(0.368±0.102与1.000±0.149,t=5.530,P=0.005);共转染miR-92a-3p抑制剂组的荧光素酶活性高于抑制剂对照组(1.254±0.080与1.000±0.129,t=2.899,P=0.044)。C17.2细胞转染miR-92a-3p模拟物组,NOX4的蛋白表达低于模拟物对照组(1.077±0.142与1.432±0.300,t=2.396,P=0.044);转染miR-92a-3p抑制剂组,NOX4的蛋白表达高于抑制剂对照组(1.443±0.054与1.249±0.090,t=3.709,P=0.010)。细胞划痕的实验结果表明,转染NOX4质粒后,细胞伤口愈合的速度低于对照组[(8.8±6.5)%与(44.1±6.8)%,t=6.513,P=0.003],然而当过表达NOX4的同时转染miR-92a-3p,与转染NOX4组比较,细胞伤口愈合速度加快[(37.2±11.7)%与(8.8±6.5)%,t=3.680,P=0.021]。
- 张燕秋付佳琳黄琬淇袁正伟顾卉
- 关键词：神经管畸形细胞迁移
- 蛋白激酶R样内质网激酶的磷酸化对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑神经细胞凋亡的影响被引量：4
- 2015年
- 目的研究蛋白激酶R样内质网激酶（proteinkinaseR—likeERkinase，PERK）的磷酸化及其下游的C／EBP同源蛋白（C／EBPhomologousprotein，CHOP）的表达在缺氧缺血性脑损伤（hypoxic—ischemicbraindamage，HIBD）中的作用和机制。方法60只新生7日龄SD大鼠分为假手术组和HIBD组，每组各30只，每组又按照手术0h，6h和24h分为3个亚组，每组10只。采用流式细胞仪检测脑细胞凋亡情况，并用Westernblot方法测定脑组织中磷酸化的PERK及CHOP表达水平。结果（1）HIBD6h出现典型的凋亡细胞峰，细胞凋亡率为（2．17±0．19）％。HIBD24h凋亡峰更为明显，细胞凋亡率达到（13．42±0．83）％，与假手术组（0．57±0．06）％相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）假手术组与HIBD0h大鼠脑组织中磷酸化的PERK和CHOP表达水平较低，在HIBD6h后二者表达开始上升，24h上升更加明显，而假手术组各个时间点二者表达差异无统计学意义（P〉0．05）。与假手术组比较，HIBD组各时间点二者的表达均明显上升，差异有统计学意义（P〈0．01）。（3）缺氧缺血后各时间点磷酸化的PERK的表达和CHOP的表达呈正相关（r=0．997，P〈0．05）。结论脑缺氧缺血后，随着凋亡的出现，磷酸化的PERK和CHOP表达水平升高，提示PERK—CHOP通路的活化可能参与了新生大鼠HIBD神经细胞凋亡的发生。
- 顾卉纪莲黄天楚梅妍袁正伟
- 关键词：缺氧缺血性脑损伤新生大鼠C/EBP同源蛋白凋亡
- miR-322-5p通过NOX4调控细胞凋亡抑制大鼠神经管畸形发生被引量：2
- 2021年
- 目的探讨miR-322-5p调控烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)的表达及改善细胞凋亡对大鼠神经管闭合的作用。方法采用全反式维甲酸(ATRA)诱导大鼠神经管畸形(NTDs)模型。通过实时定量PCR检测miR-322-5p在ARTA诱导的大鼠胚胎脊髓中的表达情况;通过Western blotting检测NOX4及凋亡蛋白的表达情况;采用免疫组织化学技术和组织免疫荧光技术观察NOX4在胚胎神经管中的定位和表达情况;通过对C17.2神经干细胞转染miRNA-空白对照(miR-NC)、mimic-322-5p及NOX4高表达质粒,明确NOX4和miR-322-5p之间的调控作用,采用实时定量PCR检测转染后miR-322-5p的表达,并通过Western blotting检测转染后细胞NOX4以及凋亡蛋白的表达情况。结果在ATRA诱导的大鼠NTDs模型中,NOX4表达上调,miR-322-5p表达下调。在C17.2神经干细胞中,转染miR-322-5p抑制了NOX4的表达,也抑制了凋亡蛋白的表达。结论miR-322-5p可抑制NOX4的表达,并抑制大鼠NTDs的发生。
- 黄琬淇刘玉思顾卉袁正伟
- 关键词：神经管缺陷细胞凋亡
