雷鸣
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：武汉大学人民医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 透明质酸保护组织工程软骨拮抗硝普钠抑制作用的机制研究被引量：1
- 2008年
- 目的 研究透明质酸对壳聚糖复合支架与再分化软骨细胞构建的组织工程软骨的保护作用。方法藻酸钠微球包被体外单层扩增培养的去分化软骨细胞2周以恢复其表型，Ⅱ型胶原蛋白表达的免疫组织化学监测分化状态。扫描电镜观察再分化软骨细胞在壳聚糖复合支架上的生长，3周后用硝普钠或（和）透明质酸以及β1整合素特异性阻断抗体作用于该组织工程软骨，反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot检测软骨特异性的Ⅱ型胶原或聚集蛋白聚糖（aggrecan）的表达。结果藻酸钠微球包被去分化软骨细胞2周能显著提高Ⅱ型胶原的表达。壳聚糖支架支持再分化软骨细胞的贴附、增殖和迁徙。硝普钠呈剂量依赖性地抑制组织工程软骨上的软骨细胞Ⅱ型胶原和aggrecanmRNA的表达，而透明质酸显著提高Ⅱ型胶原和aggrecanmRNA的表达。当用特异性抗体阻断β1整合素后，透明质酸不能逆转硝普钠对组织工程软骨中Ⅱ型胶原蛋白表达的抑制作用。结论藻酸钠微球包被去分化的软骨细胞2周能恢复细胞的表型。透明质酸通过β1整合素信号通路拮抗低浓度硝普钠对组织工程软骨的抑制作用，保护软骨组织。
- 雷鸣刘世清刘宇兰汪喆彭昊
- 关键词：藻酸盐软骨组织工程透明质酸整合素
- 藻酸钠微球中骨髓间充质干细胞向软骨细胞的定向分化被引量：2
- 2008年
- 背景:传统的体外诱导干细胞向软骨细胞定向分化的方法有高密度细胞团块培养和平面培养。细胞团块诱导方式培养过程易损害细胞活性,而平面培养获得的细胞数量有限。目的:观察藻酸钠微球中骨髓间充质干细胞向软骨细胞的定向分化潜力,及其在壳聚糖复合支架上的生长情况。设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-03/10在武汉大学口腔医学院口腔生物医学工程教育部重点实验室完成。材料:SPF级1月龄雄性Wistar大鼠7只。壳聚糖复合支架材料由武汉大学资源与环境学院研制。藻酸钠盐、转化生长因子β3、胰岛素样生长因子Ⅰ均为Sigma公司产品。方法:取Wistar大鼠股骨和胫骨骨髓,体外扩增培养骨髓间充质干细胞。实验组用转化生长因子β3和胰岛素样生长因子Ⅰ联合定向诱导藻酸钠微球包被的骨髓间充质干细胞3周,对照组培养条件中无转化生长因子β3和胰岛素样生长因子Ⅰ。诱导3周后,免疫组织化学方法和反转录-聚合酶链反应法检测Ⅱ型胶原蛋白和aggrecan的表达。从微球中释放诱导的软骨细胞并接种于壳聚糖复合支架,扫描电镜观察其生长情况。主要观察指标:软骨特异性的Ⅱ型胶原、aggrecan的表达以及软骨细胞的三维形态。结果:实验组藻酸钠微球中的骨髓间充质干细胞表达的Ⅱ型胶原和aggrecan明显高于对照组(P<0.05),与原代软骨细胞比较差异无显著性意义(P>0.05)。壳聚糖复合支架支持分化软骨细胞的贴壁、伸展、增殖和迁徙,并呈典型的软骨细胞生长形态。结论:转化生长因子β3和胰岛素样生长因子Ⅰ能诱导藻酸钠微球中的骨髓间充质干细胞定向分化成软骨细胞,并与壳聚糖复合支架表现出良好的组织相容性。
- 雷鸣刘世清刘宇兰彭昊汪喆
- 关键词：骨髓间充质干细胞软骨分化壳聚糖生物材料
- 超声微泡介导白细胞介素-1受体拮抗蛋白基因体外转染兔软骨细胞的研究被引量：1
- 2009年
- 目的 观察超声介导下携白细胞介素-1受体拮抗蛋白基因（IL-1Ra）的微泡体外转染兔软骨细胞的效率和表达。方法体外分离培养兔软骨细胞，分为单纯质粒组（P）、微泡＋质粒组（M＋P）、超声＋质粒组（U＋P）和超声＋微泡＋质粒组（U＋M＋P），照射后48h，荧光显微镜和流式细胞术检测转染效率，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot法检测IL-1Ra基因的mRNA和蛋白表达，台盼兰染色检测细胞生存率。结果U＋M＋P组转染效率较其他三组明显提高，为（11．6±1．0）％；且eGFP—C1-IL-1Ra质粒经超声微泡介导转染后可表达IL-1Ra的mRNA和蛋白。结论超声微泡可介导IL-1Ra基因在兔软骨细胞内的转染和表达，可望成为软骨损伤基因治疗的新方法。
- 汪喆刘世清彭昊雷鸣
- 关键词：超声基因转染白细胞介素-1受体软骨细胞
- 转化生长因子β3诱导藻酸钠微球内骨髓间充质干细胞向软骨细胞定向分化过程中胰岛素样生长因子Ⅰ的协同效应被引量：4
- 2008年
- 背景:近年来利用藻酸盐微球包被骨髓间充质干细胞进行软骨细胞定向诱导逐渐开展。目的:采用体外藻酸钠微球三维立体培养骨髓间充质干细胞,观察转化生长因子β3在诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化过程中胰岛素样生长因子I的作用。设计、时间及地点:细胞组织工程体外实验,于2007-03/10在武汉大学口腔医学院口腔生物医学工程教育部重点实验室完成。材料:SPF级1月龄雄性Wistar大鼠7只用于制备骨髓间充质干细胞。藻酸钠盐、胰岛素样生长因子I,转化生长因子β3均为Sigma公司产品。方法:第5代骨髓间充质干细胞以3×109L-1密度重悬于1.2%藻酸钠盐溶液中,用22号针头将该溶液缓慢滴加在100mmol/L氯化钙溶液中使其聚合形成凝胶,10min后洗涤微球2次,即为包被骨髓间充质干细胞的藻酸盐微球。联合组加入含100μg/L胰岛素样生长因子I、10μg/L转化生长因子β3的软骨诱导培养基,诱导3周。同时设立胰岛素样生长因子I组、转化生长因子β3组、空白对照组。主要观察指标:甲苯胺蓝染色检测细胞外基质的形成,RT-PCR法及免疫组织化学法检测Ⅱ型胶原和Aggrecan的表达,Western blot检测Sox9蛋白表达及其与PCR产物的相关性。结果:包被于藻酸盐微球的骨髓间充质干细胞经胰岛素样生长因子I、转化生长因子β3联合诱导3周,细胞周围有大量均质蓝染物质。联合组II型胶原和Aggrecan mRNA及蛋白表达水平最高,转化生长因子β3组表达居中,胰岛素样生长因子I组表达较弱,空白对照组几乎无表达(F=10.52,P<0.01)。各组Sox9蛋白表达水平与上述指标类似(F=7.95,P<0.05),Sox9与II型胶原、aggrecan的相关系数分别为0.95和0.91。结论:体外定向诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的过程中,胰岛素样生长因子I可能通过促进Sox-9的表达来起到与转化生长因子β3的协同效应。
- 雷鸣刘世清刘宇兰彭昊汪喆
- 关键词：骨髓间充质干细胞藻酸盐软骨分化
