隋欣
- 作品数：11 被引量：26H指数：3
- 供职机构：中央民族大学生命与环境科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家教育部“985工程”更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 盐芥谷胱甘肽过氧化物酶基因(ThGPX8)的克隆与原核表达被引量：3
- 2013年
- 【目的】克隆盐芥谷胱甘肽过氧化物酶(GPXs)基因ThGPX8,对其进行序列分析,构建原核表达载体,为进一步研究ThGPX8的结构和功能奠定基础。【方法】以盐芥为材料,利用RT-PCR技术获得其ThGPX8基因的全长cDNA序列;应用生物信息学手段对该基因编码的蛋白结构和系统进化关系进行分析;构建原核表达载体pET-ThGPX8,转化E.coli BL21(DE3),进行IPTG诱导表达、SDS-PAGE检测和Western blotting鉴定。【结果】获得的ThGPX8基因序列的开放阅读框(ORF)为504bp,编码167个氨基酸,具有GPXs的特征结构域,不是跨膜蛋白;其二级结构主要由无规则卷曲组成,三级结构为二聚体。进化树分析表明,盐芥ThGPX8与拟南芥AlyGPX8、AtGPX8和油菜BnGPX8具有较高的同源性。盐芥ThGPX8与ThGPX6的理化性质存在差异,但具有相似的二级结构和三级结构。将ThGPX8转入E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达得到了分子质量约23ku的蛋白,该蛋白在37℃下诱导5h可获得较高的表达量。【结论】获得的ThGPX8基因cDNA序列所编码的蛋白属于植物GPXs家族成员,利用构建的原核表达载体pET-ThGPX8转化E.coli BL21(DE3)获得了融合表达蛋白。
- 张孜宸隋欣高飞周宜君陈静刘楠
- 关键词：盐芥基因克隆原核表达
- 盐芥谷胱甘肽过氧化物酶响应逆境的蛋白表达分析
- 谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidases, GPXs)是植物体内重要的抗氧化物酶之一,对清除植物体内过量积累的自由基、保护生物膜具有重要作用。对于一种植物GPXs的研究,从单基因的克隆发展到对G...
- 隋欣
- 关键词：逆境响应蛋白表达双向电泳
- 文献传递
- 盐芥谷胱甘肽过氧化物酶基因(ThGPX6)的克隆及表达分析被引量：11
- 2012年
- 谷胱甘肽过氧化物酶在植物响应盐胁迫中具有重要作用。依据盐芥EST序列进行RACE实验,获得1个新的谷胱甘肽过氧化物酶基因,命名为ThGPX6(GenBank注册号为FJ357244)。该基因的cDNA全长892 bp,包含1个长为702bp的开放读码框,编码234个氨基酸。生物信息学分析表明,该蛋白具有植物GPX的典型结构,即GPX催化活性区(NVASKCGLT)和标志性基序(ILAFPCNQF),以及PHGPX特有序列(KWNF(S/T)KFL)。实时荧光定量PCR分析结果表明,ThGPX6在盐芥叶片和根中表达,其表达受NaCl诱导,显示ThGPX6在植物高盐响应中发挥作用。亚细胞定位结果表明,ThGPX6存在于线粒体和内体中的可能性最大,预示着ThGPX6在清除ROS过程中起着重要作用。
- 马亭亭周宜君高飞赵竹隋欣刘楠刘冉
- 关键词：盐芥基因克隆亚细胞定位
- 拟南芥过氧化物酶序列与功能的生物信息学分析被引量：5
- 2012年
- 植物过氧化物酶(POD)属于多基因家族,不仅是植物体内清除活性氧自由基的重要酶类之一,而且参与多种生理生化过程,在维系植物生长发育过程中发挥重要的作用。采用生物信息学方法对拟南芥过氧化物酶家族的73个基因编码的蛋白质序列的结构和功能进行了分析,其中包含氨基酸的数量、等电点、跨膜结构域、信号肽、二级结构组成及磷酸化位点等,并用Mega4.0软件构建了去除信号肽前后的系统进化树,旨在了解其结构特征。对已经进行功能研究的成员进行结构分析,以此来揭示结构与功能之间的联系,为植物抵御氧化胁迫方面研究提供理论基础。
- 马亭亭周宜君高飞余丽刘冉刘楠隋欣
- 关键词：拟南芥生物信息学分析
- 盐芥miRNAs耐盐表达研究
- 2012年
- 以盐生植物盐芥为实验材料,选择经过Solexa测序筛选的盐芥tsa-miR172a和tsa-miR398b为目标基因,采用茎环的反转录PCR(stem-loop RT-PCR)方法分析其在盐芥根中的耐盐表达模式,以探讨盐芥miRNAs的stem-loop RT-PCR验证体系。结果显示,经过300mmol.L-1 NaCl处理72h后,与对照相比,盐芥根中的tsa-miR172a上调表达,tsa-miR398b下调表达。用stem-loop RT-PCR方法进行tsa-miR172a和tsa-miR398b扩增,对其电泳图进行光密度分析结果显示,盐胁迫处理与对照的比值分别为1.8和0.55,Solexa测序结果分别为2.00和0.44,说明两种方法所得结果基本一致。表明该研究建立了盐芥miRNAs的stem-loop RT-PCR验证体系:每个miRNA设计3个引物(miRNA stem-loop引物、miRNA正向引物和miRNA通用反向引物);扩增条件为94℃2min,94℃15s,55℃45s,23个循环。
- 刘冉周立敬周宜君高飞马亭亭隋欣刘楠
- 关键词：盐芥MIRNAS盐胁迫
- 玉米谷胱甘肽过氧化物酶的生物信息学分析被引量：2
- 2013年
- 对植物基因组数据库和过氧化物酶数据库中玉米谷胱甘肽过氧化物酶(Zea mays Glutathione per-oxidase,ZmGPXs)进行查找和比对,确定了6个ZmGPXs,采用生物信息学方法对其进行了理化性质、亚细胞定位、结构域、高级结构、外显子和内含子构成等分析。结果表明,尽管6个ZmGPXs序列的氨基酸数量不同,但均属于碱性蛋白质,具有6个外显子和5个内含子,其中5个ZmGPXs高级结构表现为二聚体,具有植物GPXs的特征基序。亚细胞定位分析发现ZmGPXs主要定位于线粒体、叶绿体、过氧化物酶体和细胞质中。结构域分析表明ZmGPXs属于硫氧还蛋白超家族。
- 隋欣周宜君高飞刘楠陈静张孜宸
- 植物GPXs基因结构、表达与抗逆性分析被引量：2
- 2012年
- 谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GPX)是植物体内清除活性氧自由基的重要酶类之一,在保护膜免受氧化损伤中发挥重要作用.目前在一些植物中已经克隆获得了编码GPXs的基因序列.通过对拟南芥、杨树和百脉根等植物GPXs基因结构和功能的分析,研究植物GPXs基因结构及其在胁迫应答中的表达变化,总结了植物GPXs在抗逆应答反应中的可能作用.
- 隋欣周宜君马亭亭高飞刘楠
- 关键词：抗逆性
- 特殊生境植物的基因资源发掘与转基因研究
- 植物转基因技术彻底打破了常规育种中种属间不可逾越的障碍.采用植物转基因技术进行的抗逆作物育种,为解决因人口增长、环境变化带来的粮食危机开辟了一条新的途径.长期生活在干旱、盐渍等特殊生境的植物,具有重要的生态价值、经济价值...
- 周宜君高飞冯金朝马亭亭刘冉隋欣刘楠
- 关键词：转基因
- 文献传递
- 蒙古沙冬青根蛋白的提取及双向电泳体系的建立被引量：5
- 2013年
- 以蒙古沙冬青根为实验材料,采用TCA/丙酮沉淀法和Tris-饱和酚提取法分别提取根可溶性蛋白.用Bradford法测定蛋白质浓度,计算蛋白提取率,并对所提取的蛋白样品进行双向电泳检测及电泳体系优化.结果表明,选择Tris-饱和酚法提取蛋白,采用24cm、pH5～8的IPG胶条,上样量900μg,可获得分辨率高、重现性好的双向电泳凝胶图.
- 刘楠高飞周宜君张孜宸隋欣马冰张萌张根发
- 关键词：蛋白质提取双向电泳
- 盐芥TsGPX3基因的克隆、亚细胞定位与原核表达被引量：2
- 2016年
- 以盐芥(Thellungiella salsuginea)为材料,获得TsGPX3的cDNA全长序列,其开放阅读框(ORF)序列长591bp,编码196个氨基酸,具有GPXs家族的3个保守的特征结构域。系统进化分析显示,TsGPX3与同属于十字花科的萝卜RsGPX3、油菜BnGPX3和花椰菜BoGPX3等具有较高的同源性。构建植物表达载体pRTL2-TsGPX3-GFP,利用PEG转化拟南芥原生质体细胞进行瞬时表达,发现TsGPX3蛋白主要定位在细胞膜上。构建原核表达载体pET-TsGPX3,采用不同浓度IPTG对转入E.coliBL21(DE3)的pET-TsGPX3进行诱导表达,获得了分子量约为27kD的蛋白,该蛋白在37℃、诱导培养5h时可获得较高的表达量。
- 王宁陈静高飞李华云隋欣周宜君
- 关键词：盐芥亚细胞定位原核表达
