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乙型肝炎病毒X蛋白与细胞色素C氧化酶亚单位Ⅲ结合的定位研究被引量：1: 2014年; 目的探索细胞色素C氧化酶亚单位Ⅲ（COXⅢ）与乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）的具体结合位点。方法构建pAS2-1-X变异体重组载体，醋酸锂转化法将其转入酵母细胞，通过PCR法及测序法证实目的片段转入酵母细胞；Westem blot法明确变异体蛋白在酵母细胞中能否正确表达，滤膜转印法排除自身激活作用；固体培养基交合实验及β-半乳糖苷酶活性实验检测HBx和COXⅢ的结合区域。结果成功构建含HBx第1～72位氨基酸的变异体重组载体pAS2-1-Xl和第1～117位氨基酸的变异体重组载体pAS2-1-X2，测序及PCR均证实片段的正确性。Western blot证实变异体蛋白在酵母细胞中可正确表达，且变异体蛋白无自身激活作用。交合实验及β-半乳糖苷酶活性检测将HBx和COXⅢ的结合区域定位于72～117位氨基酸。结论通过酵母双杂合实验证实HBx和COXⅢ的结合区域定位于72～117位氨基酸，此结合区域的明确有望帮助进一步阐明X蛋白在体内的作用机制，并可能为慢性乙型肝炎、肝硬化及肝癌的防治提供新思路。; 李丹陈治新陈芸林纳王小众; 关键词：肝炎病毒乙型 X蛋白结合位点

HBV X蛋白与氧化应激的相关性被引量：4: 2009年; HBV X蛋白(HBx)是多功能蛋白,能转录激活多种病毒及细胞基因,从而参与病毒复制以及宿主细胞的基因调控、蛋白降解和细胞信号转导等过程。近期研究发现HBx可以定位在线粒体上,干扰线粒体氧化磷酸化等能量代谢过程,促进细胞凋亡。氧化应激是指人体的组织细胞中自由基产生增多,并且由于自由基清除酶的活性下降、数量减少等原因,使得机体的抗氧化能力下降的现象,反映了体内氧化和抗氧化系统间的失衡。本文从HBx在线粒体的定位以及与HBx结合的蛋白,从相关的分子机制阐明HBx与氧化应激的相关作用。; 陈芸王小众; 关键词：HBV X蛋白氧化应激线粒体

乙型肝炎病毒X变异体穿梭载体的成功构建及在酵母中的表达: 2009年; 目的构建表达乙肝病毒(HBV)X变异体基因的穿梭载体。方法用PCR法扩增HBVX基因及变异体基因序列,用EcoRⅠ和PstⅠ双酶切pAS2-1和PCR产物,连接酶切片段pAS2-1及X变异体片段以构建pAS2-1-(X变异体)穿梭质粒,并通过醋酸锂转化法转化入酵母AH109中。结果已构建的pAS2-1-(X变异体)穿梭质粒经序列测定含有所需的HBV-X变异体基因片段,转入酵母细胞后经PCR证实酵母内有表达。结论成功构建了pAS2-1-X变异体穿梭质粒,为进一步在真核细胞内更全面了解HBV-X蛋白作用奠定了基础。; 陈芸王小众; 关键词：乙型肝炎病毒病毒蛋白质类

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陈芸