郭正光
- 作品数：10 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学理学更多>>
- 室温放置4 h对样本尿蛋白质组分析的影响被引量：1
- 2019年
- 目的探讨用医院检验科尿常规检查剩余的尿液样本开展尿蛋白质组分析,以便充分利用资源。方法同一个体尿液样本采集后分别采用立即冻存和室温下放置4h后冻存于-80℃备用。尿液样本分别进行聚丙烯酰胺凝胶电泳、二维凝胶电泳和液相色谱串联质谱分析,对比两种尿液样本采集方法对尿蛋白质组分析的影响。用点杂交免疫印迹法分析了室温放置4h尿液样本(n=150)中胞质非特异性二肽酶(CNDP2)蛋白在结直肠癌(CRC)患者与健康对照尿液中的含量。结果立即冻存和经室温放置4h后冻存的尿液样本的主要蛋白条带、数量和位置无明显差异;从中分别鉴定了(1204±50,n=3)个和(1155±7,n=3)个尿蛋白质,以及(7501±661,n=3)条和(6940±182,n=3)条多肽,两组样本间无差异。尿蛋白CNDP2在结直肠癌患者尿液中含量显著高于健康对照(P<0.001)。结论采集后立即冻存和室温放置4h后冻存尿液样本的尿蛋白质组分析无明显差异。医院检验科尿常规检查剩余的尿液样本可用于尿蛋白质组分析。CNDP2在结直肠癌患者尿液中含量升高,是结直肠癌候选的尿蛋白标志物。
- 杨丽君郭正光景宗攀孙玉琳孙伟赵晓航
- 关键词：二维凝胶电泳
- 探索式教学模式在研究生生物医学大型仪器课程中的应用和评价被引量：2
- 2021年
- 目的尝试和评价生物医学大型仪器理论与实验课程的探索式教学(IT)模式,为该教学模式的常规实施提供依据。方法在课程中开展IT小实验,总结其设计、实施、效果等;采用教育测量学理论和统计学方法对问卷进行评价,采用信度、相关性和区分度对问卷进行质量分析。结果IT小实验分别在2017级和2018级研究生选学本课程的部分学生中开展,取得了初步成果。参加人数达23人;问卷信度良好(α=0.852);27题项中有23题,与中间值比较,均有显著性差异(P<0.05)。结论问卷具有较好的区分度、信度、相关性和总体覆盖性,可用于评价教学中IT模式的需求。IT实验的合理设计、难度适中和时间安排是影响其实施效果的主要因素。
- 孙海丹郭正光周军骈红茹杨明珠王欣郑直
- 关键词：创新思维探索式教学问卷教学效果
- 泛素连接酶LNX1的表达、活性测定和功能初探被引量：2
- 2012年
- 目的:在大肠杆菌中表达重组人泛素连接酶LNX1,并研究其对钾离子通道蛋白Kv1.4的泛素化作用。方法:构建人LNX1重组蛋白原核表达载体pGEX-LNX1,在大肠杆菌中通过IPTG诱导表达重组蛋白,表达产物经GSTrap FF纯化,并通过体外泛素化(in vitroubiquitination)方法测定其泛素连接酶活性,同样用体外泛素化方法研究其对含有Kv1.4的C端的人工底物的泛素化。结果:获得了纯化的有泛素连接酶活性的重组人LNX1蛋白,重组LNX1可以在体外泛素化体系中泛素化含有Kv1.4的C端的人工底物。结论:重组人LNX1原核表达成功,具有泛素连接酶活性,并催化Kv1.4的泛素化。
- 郭正光高友鹤
- 关键词：泛素连接酶酶活性测定
- 通过配体文库研究GIPC2 PDZ配体结合特点及其相互作用蛋白
- 2016年
- 目的通过验证性筛选配体文库,获得GIPC2 PDZ结构域的配体结合特点,进而找到GIPC2的相互作用蛋白。方法 1)利用酵母双杂交的方法从已有的PDZ配体库中寻找与GIPC2的PDZ结构域配体结合特性;2)根据GIPC2的亚细胞定位和肿瘤相关功能再结合PDZ结构域结合序列的共同特征在蛋白质数据库中预测GIPC2的天然潜在配体;3)将天然潜在配体的C末端序列依次与GIPC2 PDZ结构域或GIPC2全长进行验证反应,从而得到阳性蛋白。结果 1)GIPC2 PDZ结构域的配体结合特性是C末端最后4个氨基酸为-X-S/T-X-V/L/I,是Ⅰ类PDZ配体;2)综合GIPC2的生物学特征和GIPC2 PDZ结构域的配体结合特点,在蛋白质数据库中预测得到47个天然潜在配体;3)将天然潜在配体的C末端序列克隆至酵母双杂交系统进行验证,最后得到10个确定的阳性蛋白。结论获得10个GIPC2相互作用蛋白。
- 范成艳郭正光郑直
- 关键词：PDZ结构域蛋白质相互作用
- 泛素连接酶MDM2促进外源NOLC1的泛素化和降解
- 2014年
- 目的研究泛素连接酶MDM2对其调节因子NOLC1的泛素化和降解。方法克隆原核表达了NOLC1全长蛋白和其核定位信号区域,在体外泛素化体系中利用有泛素连接酶活性的重组MDM2研究其对NOLC1的泛素化。在哺乳动物细胞中,研究MDM2对外源转染的NOLC1的降解。结果在体外泛素化体系中MDM2泛素化NOLC1全长和其核定位信号区域;在哺乳动物细胞中,MDM2促进外源NOLC1降解超过70%,且NOLC1的降解通过蛋白酶体途经实现。结论 MDM2促进外源NOLC1的泛素化和降解,为研究MDM2-TP53-NOLC1之间的相互调节提供了新的线索。
- 王小蓉郭正光高友鹤
- 关键词：泛素连接酶泛素化MDM2
- 从健康人尿液筛选年龄相关蛋白质
- 2021年
- 目的筛选健康成人尿液中与年龄相关的差异表达蛋白质,探讨成人因年龄增长而发生的蛋白质改变。方法选取14名健康男性及15名健康女性,按年龄各分为3组(20~30、40~50和≥60周岁),用非标记定量蛋白质组学技术进行尿液蛋白质组分析,筛选年龄相关尿液蛋白。结果从男性尿液中共获得100个与年龄增长相关的尿蛋白,其中上调66个,下调34个。从女性尿液中共获得94个与年龄增长相关尿蛋白,其中上调79个,下调15个。获得男女共有的年龄增长相关尿蛋白12个。蛋白功能分析显示,这些蛋白与凝血系统、蛋白泛素化、LXR/RXR激活、糖酵解等通路相关。结论尿液中存在与年龄增长相关的蛋白质,有可能成为衰老相关的尿液标志物,并为后续疾病生物标志物发现提供基础。
- 郑舒心赵敏迪邵晨孙海丹刘晓燕郭正光孙伟
- 关键词：年龄
- 超声辅助胶内酶切方法的优化及其酶切特点的分析
- 2017年
- 分别应用20、100和200 W超声功率对牛血清白蛋白以及人尿蛋白组的胶内条带进行胶内酶切,通过比较不同功率鉴定的多肽数和蛋白数,确定最优的超声功率。同时比较超声辅助酶切与传统过夜酶切方法,并分析超声辅助胶内酶切方法的特点。结果表明,超声功率为20W时对胶粒破坏最小,样品损失最少,在牛血清白蛋白样品中鉴定的多肽数最多为65。在人尿蛋白组2个条带中,20 W方法鉴定的蛋白数分别为168和199,鉴定效果最优。通过对多肽误切率和不完全酶切多肽的定性和定量分析发现,超声酶切方法的误切率高于传统方法,但不完全酶切率较低。通过分析多肽误切位点发现,传统过夜酶切法和超声辅助酶切法的主要误切类型分别为脯氨酸(P)和天冬氨酸/谷氨酸(D/E),3种超声方法之间各种误切类型所占比例均无明显差别。超声辅助酶切可显著缩短蛋白质胶内酶切时间,其中20 W功率超声酶切的效果最佳。与传统过夜酶切法相比,超声辅助酶切多肽的鉴定结果更好,其多肽的误切率更高,不完全酶切率较低,可用于发现蛋白质组学研究。
- 肖晓萍郭正光成洁孙伟
- 关键词：蛋白质组
- 幽门螺杆菌感染相关胃癌组织蛋白质组特征研究被引量：3
- 2023年
- 目的研究幽门螺杆菌(Hp)阳性和阴性胃癌组织蛋白质组特征。方法收集Hp阳性和阴性胃癌患者肿瘤和癌旁组织样本各1例,每个样本分别取3个不同部位,采用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS),进行蛋白质组分析,通过统计学分析筛选差异表达蛋白,并进行功能分析,寻找关键信号通路。结果基于LC-MS方法,在所有样本中共鉴定到5536个蛋白质。统计学分析表明Hp阳性与阴性肿瘤的不同部位蛋白质表达具有明显差异,表现出肿瘤异质性,且与能量代谢、细胞增殖侵袭、细胞生存死亡、免疫反应、病毒感染等功能有关。在胃癌肿瘤组织与癌旁组织中,分别有1630和1843个蛋白质的表达量发生显著变化(|Fold change|≥2),在Hp阳性与阴性两种胃癌肿瘤组织中发现了764个差异表达蛋白(|Fold change|≥2),这些蛋白质均与免疫反应、细胞迁移、细胞增殖侵袭、细胞生存与死亡等功能相关。特别的,在这两种肿瘤中发现与细菌生长有关蛋白质的表达变化。结论胃癌肿瘤表现出肿瘤异质性。胃癌肿瘤与癌旁、Hp阳性和阴性两种肿瘤具有显著的蛋白质组特征差异,影响机体能量代谢、免疫应答、细胞增殖侵袭、生存死亡等功能。本研究为胃癌肿瘤的深入研究提供了新的线索和思路。
- 孙佳萌刘震黄永胜孙海丹郭正光康维明孙伟
- 关键词：幽门螺杆菌胃癌蛋白质组学
- 结直肠癌患者尿液中20种氨基酸靶向代谢组特征研究
- 2024年
- 目的探究20种常见氨基酸在结直肠癌(CRC)患者的尿液特征;寻找CRC诊断的生物学标志物。方法纳入100名健康对照者和113名CRC患者(Ⅰ期27例,Ⅱ期28例,Ⅲ期34例,Ⅳ期24例),基于超高效液相色谱串联质谱法对尿液中的20种常见氨基酸应用多反应监测技术进行靶向定量分析,应用统计学方法分析CRC患者与健康对照氨基酸含量差异,并构建CRC诊断模型。结果CRC患者尿液中16种氨基酸含量与健康对照差异有统计学意义,Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ期各自有9种,15种,14种,17种氨基酸含量与健康对照差异有统计学意义。由异亮氨酸,天冬酰胺,脯氨酸,组氨酸,酪氨酸,苯丙氨酸6种氨基酸构建的生物标志物组合用于CRC诊断的AUC值在发现组/验证组分别为0.857/0.851,在Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ期CRC的AUC值分别为0.847,0.843,0.897,0.896。结论尿液中20种氨基酸含量变化可以用于CRC诊断,为CRC的早期诊断提供了新的研究思路。
- 祁峰孙玉琳刘佳琦郭正光刘晓燕孙海丹何成彦赵晓航孙伟
- 关键词：氨基酸尿液结直肠癌
- 泛素连接酶LNX1促进外源PBK的泛素化和降解被引量：1
- 2013年
- 目的研究LNX1对其相互作用蛋白PBK的泛素化和降解。方法克隆、原核表达、纯化了一系列重组人LNX1截断体蛋白和LNX1全长蛋白;在体外泛素化体系中研究其对PBK的泛素化,哺乳动物细胞内研究其对外源PBK的泛素化和降解。结果在体外泛素化体系中LNX1泛素化PBK,并研究了不同LNX1截断体对PBK泛素化的影响;发现在哺乳动物细胞内外源LNX1促进外源PBK的泛素化,进而导致其通过蛋白酶体降解。结论研究发现了LNX1对外源PBK的泛素化和降解,为研究LNX1的生理功能提供了重要线索。
- 王小蓉郭正光高友鹤
- 关键词：泛素连接酶泛素化
