郜海涛
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 供职机构：山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划山东省优秀中青年科学家科研奖励基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 牛蒡寡糖脂质体的制备鉴定以及人a1,6岩藻糖基转移酶的初步研究
- 第一部分的研究内容为牛蒡寡糖脂质体的制备和鉴定，主要分为牛蒡寡糖含量测定方法的建立、牛蒡寡糖脂质体制备工艺及处方研究以及牛蒡寡糖脂质体理化性质鉴定三个方面的内容。
实验目的：建立计算牛蒡寡糖脂质体的包封率的方法，优...
- 郜海涛
- 关键词：脂质体多克隆抗体
- 文献传递
- 人GALNT3-sol蛋白的原核表达和抗体制备被引量：3
- 2011年
- 目的:构建人乙酰半乳糖胺转移酶3可溶性区域(GALNT3-sol)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化GALNT3-sol蛋白,制备小鼠抗人GALNT3-sol多克隆抗体,并对抗体的基本特性进行了检测。方法:RT-PCR扩增编码人GALNT3-sol的cDNA片段(1755bp),将其克隆至原核表达载体pET15b中,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,诱导表达人GALNT3-sol重组蛋白。将变性、复性和电泳纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗血清。分别采用ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性。结果:成功构建了pET15b/GALNT3-sol原核表达载体,转化BL21(DE3)后可高效表达重组蛋白GALNT3-sol,获得的小鼠抗人GALNT3-sol多克隆抗血清效价达1∶25600,并有良好的特异性。结论:成功获得人GALNT3-sol蛋白,得到了效价和特异性良好的小鼠抗人GALNT3-sol抗体,为进一步研究人GALNT3在肿瘤组织中的表达提供了可靠的材料。
- 孔蕴郜海涛李树芳王鹏顾黎
- 关键词：大肠杆菌多克隆抗体
- 牛蒡寡糖脂质体的制备和性质鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的采用不同的方法制备牛蒡寡糖脂质体,并对脂质体的主要性质进行检测,为其临床应用奠定基础。方法分别采用旋转薄膜分散法和逆相蒸发法制备大多室脂质体(MLV),再利用高压均质机处理得到小单室脂质体(SUV)制剂,并对此制剂的形态学、包封率、Zeta电势、粒径分布和稳定性等参数进行实验研究。结果均质后脂质体的平均粒径为75 nm左右,粒度分布均匀,电镜观察形态是呈球形的小囊泡,高压均质后其包封率达到45.55%,4℃下放置较稳定。结论薄膜分散法更适合于制备牛蒡寡糖脂质体。且其性质比较稳定,大小均匀,可进行细胞学和动物活体实验,为牛蒡寡糖脂质体的临床应用奠定基础。
- 郜海涛顾黎张鹏英孔蕴陈靠山王鹏
- 关键词：脂质体紫外可见分光光度法
- 牛蒡寡糖脂质体的制备鉴定以及人α1，6岩藻糖基转移酶的初步研究
- 第一部分的研究内容为牛蒡寡糖脂质体的制备和鉴定,主要分为牛蒡寡糖含量测定方法的建立、牛蒡寡糖脂质体制备工艺及处方研究以及牛蒡寡糖脂质体理化性质鉴定三个方面的内容。 实验目的：建立计算牛蒡寡糖脂质体的包封率的方法,优化制备...
- 郜海涛
- 关键词：脂质体
- 文献传递
- 环丙沙星单克隆抗体的制备和性质鉴定被引量：1
- 2010年
- 为了制备抗环丙沙星单克隆抗体,首先采用碳二亚胺法合成了环丙沙星与载体蛋白偶联的免疫抗原和包被抗原,免疫BALB/c小鼠,取效价最高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,HAT培养基筛选,有限稀释法克隆化,获得1株稳定分泌抗环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株。检测结果显示,杂交瘤细胞染色体数目平均102条,培养上清的效价为1∶1.28×103,单抗腹水效价达1∶1.024×106,IC50为68.31 ng/mL,属于IgM型,轻链kappa,CI-ELISA法显示单抗对环丙沙星有高度的选择性,提示获得的单抗可望用于环丙沙星残留物的免疫化学检测。
- 顾黎孔蕴刘围郜海涛郗日沫王鹏
- 关键词：环丙沙星药物残留单克隆抗体
- 重组人GALNT3-sol蛋白在毕赤酵母中的高效表达和活性鉴定
- 2012年
- 目的:为了获得有催化活性的人乙酰半乳糖胺转移酶3(GALNT3),构建了GALNT3可溶性区域(GALNT3-sol)的真核分泌表达载体,在巴斯德毕赤酵母中表达并纯化GALNT3-sol蛋白,体外检测其转糖基活性。方法:以构建好的pET15b/GALNT3-sol为模板进行PCR,扩增编码人GALNT3-sol的cDNA片段(1 755 bp),将其克隆至真核表达载体pPIC9K,载体线性化后采用电击法转化毕赤酵母GS115。通过MD平板和G418平板筛选出阳性高拷贝重组菌株。阳性菌株经过甲醇诱导表达人GALNT3-sol重组蛋白,表达上清进行Ni-NAT分离纯化。分别采用SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的重组蛋白,并使用HPLC和MALDI-TOF/MS分析其转糖基化反应的活性。结果:成功构建了能够分泌表达GALNT3-sol的毕赤酵母菌株。阳性表达菌株在BMMY培养基(pH 6.0)中20℃培养,经0.5%甲醇诱导表达96 h,摇瓶表达量可达5mg/L。SDS-PAGE和Western blot结果显示表达重组蛋白为糖基化形式。活性检测显示表达的重组蛋白具有转糖基活性。结论:成功获得可以高效分泌表达具有活性的人GALNT3-sol蛋白的毕赤酵母菌株,为进一步研究人GALNT3的性质及其应用提供了基础。
- 孔蕴郜海涛李树芳王鹏顾国锋顾黎
- 关键词：毕赤酵母分泌表达活性
- 单糖类似物在糖基化研究和临床治疗中的应用进展被引量：1
- 2009年
- 糖基化是生物体最常见的共翻译和翻译后修饰过程。糖链在生物的生长、发育和疾病过程中起着重要作用。人工合成带有各种活性基团的单糖类似物,使其被细胞摄取,进入到糖基化途径中,不仅使糖基化过程的调控和研究变得更为方便,还展示出诱人的临床治疗前景。
- 郜海涛孔蕴王鹏顾黎
- 关键词：糖基化代谢唾液酸肿瘤
