邹清平
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- TMEM64基因真核表达载体的建立与表达
- 2013年
- 目的构建带有GFP标签的TMEM64真核表达质粒，探求TMEM64在293T细胞中的表达特点。方法首先用RT—PCR的方法扩增白血病细胞株NB4中的TMEM64基因，并将其克隆到pEGFP—N2载体，然后用该质粒转染293T细胞，最后运用Western印迹检测TMEM64蛋白的表达情况，免疫荧光检测该蛋白亚细胞定位。结果在转染pEGFP—N2-TMEM64质粒的293T细胞中，能够检测到TMEM64一GFP重组蛋白的表达，而且该重组蛋白主要表达在细胞膜中。结论我们成功构建了带GFP标签的TMEM64真核表达质粒，为进一步研究TMEM64的功能奠定了分子基础。
- 武丽芳庄立琨邹清平贾培敏许桂平
- 关键词：真核表达载体急性早幼粒细胞白血病
- 维甲酸诱导基因G蛋白调控p21基因表达的机制
- 2014年
- 目的 研究维甲酸诱导基因G（RIG-G）蛋白调控p21基因表达的相关机制.方法 采用Western blot法检测白血病细胞株NB4中过表达RIG-G蛋白对p21蛋白表达的影响,以及U937细胞中过表达RIG-G蛋白对c-Jun和JNK蛋白磷酸化水平的影响.将c-Jun表达质粒与含p21基因启动子的报告基因质粒共同转染至293T细胞,采用荧光素酶报告基因实验研究c-Jun蛋白对p21基因的表达调控作用.结果 Western blot法检测结果显示,在NB4细胞中过表达RIG-G蛋白能明显上调p21蛋白的表达水平;而且在全反式维甲酸（ATRA）诱导NB4细胞分化的过程中,随着内源性RIG-G蛋白被明显地诱导表达,p21蛋白的表达水平也明显升高.在过表达RIG-G蛋白的U937细胞中,JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平均明显下降,而JNK和c-Jun总蛋白的表达水平则无明显变化.当U937细胞中加入JNK抑制剂SP600125后,尽管JNK蛋白的磷酸化被完全抑制,但与对照细胞U937T-pTRE比较,过表达RIG-G蛋白的U937T-RIG-G细胞中,c-Jun蛋白的磷酸化水平依然明显下降.表明RIG-G蛋白不仅能通过JNK信号通路抑制c-Jun蛋白的磷酸化,也可以以不依赖JNK信号途径的方式下调c-Jun蛋白的磷酸化水平.荧光素酶报告基因检测结果则显示,当293T细胞中分别转染0.1、0.5、1.0和2.0 μg c-Jun表达质粒时,荧光素酶报告基因的活性分别为转染空载体组的（83.0±1.7）％、（73.7±0.7）％、（68.9±0.9）％和（64.1±0.9）％,提示c-Jun蛋白能抑制p21基因的转录表达活性.结论 在U937细胞中,过表达RIG-G蛋白能通过多条不同的信号途径共同下调c-Jun蛋白的磷酸化水平,最终使p21基因的表达水平升高,发挥阻断细胞周期进程,抑制细胞生长的功能.
- 邹清平许桂平庄立琨张长林晏伟伟张颖婷楼叶江童建华
- 关键词：P21基因C-JUN蛋白磷酸化
