贾志凡
- 作品数：73 被引量：207H指数：8
- 供职机构：天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”天津市科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人隔蛋白7的真核表达载体的构建及表达
- 2008年
- 目的构建人隔蛋白7（SEPT7，hCDC10／SEPT7）的表达载体并对U251人脑恶性胶质瘤细胞系进行转染且检测其表达。方法RT-PCR方法扩增SEPT7cDNA片段，并将扩增的片段插入pCDNA3真核表达载体，构建成含SEPTTcDNA的重组载体pCDNA3／SEPT7，以脂质体介导该质粒转染人脑恶性胶质瘤细胞系U250，应用RT-PCR和免疫荧光染色鉴定转染细胞中hCDC10／SEPT7的表达。用流式细胞术对转染前后的U251细胞进行细胞周期分析。结果成功构建含SEPT7cDNA的重组载体pCDNA3／SEPT7，并使其稳定转染U251细胞，在转染的细胞中，证实有SEPT7mRNA表达上调。细胞周期检测结果G0／G1期细胞增多，SPF降低。结论成功构建SEPT7表达载体，并在人脑恶性胶质瘤细胞系获得表达，延迟细胞周期进展。
- 贾志凡浦佩玉康春生王广秀张志勇裘明哲黄强
- 关键词：胶质瘤细胞细胞周期
- siRNA靶向Notch1对U251人脑胶质瘤细胞系生长抑制作用的体内研究被引量：1
- 2008年
- 目的研究siRNA靶向敲低Notch1活性对裸鼠皮下U251胶质母细胞瘤的生长抑制作用。方法建立U251胶质瘤细胞裸鼠皮下模型，分为：对照组、无义组siRNA转染组、Notch1siRNA转染组，每4d给予siRNA、Notch1siRNA与oligofectamin混合物瘤内治疗，直至观察期结束。处死后取出肿瘤标本。应用免疫组化检查Notchl、PCNA、MMP9、GFAP和cyclinD1的表达水平；TUNEL法分析细胞凋亡。结果转染靶向Notch1siRNA组肿瘤生长受抑，肿瘤细胞Notchl、MMP9、cyclinD1、PCNA及表达明显下调，GFAP表达上调，细胞增殖、侵袭能力受到抑制。并诱发细胞凋亡。结论Notch1可作为基因治疗胶质瘤优选靶之一，RNA干涉Notch1治疗恶性胶质瘤具有潜在的临床应用前景。
- 裘明哲浦佩玉康春生张志勇王广秀贾志凡江荣才
- 关键词：胶质瘤RNA干涉基因治疗
- 隔蛋白7逆转裸鼠移植胶质瘤的恶性表型被引量：3
- 2008年
- 目的探讨隔蛋白（SEPT）7对胶质瘤恶性表型的影响。方法建立SEPT7表达缺失的人胶质瘤TJ905细胞的裸鼠皮下移植瘤模型，将荷瘤鼠分为治疗组（SEVIT／pcDNA3）、空载体组（pcDNA3）和对照组（PBS），观察各组肿瘤的大小及生长速度；采用免疫组化法检测各组肿瘤组织标本中SEPT7、增殖细胞核抗原（PCNA）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、侵袭相关因子[基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9]、细胞周期因子（CDK2、CDK4、cyclinD1、cyclinE、p21、p16）以及凋亡相关因子（bcl-2、caspase-3）的表达；原位末端标记（TUNEL）法检测肿瘤细胞的凋亡。结果治疗组肿瘤的生长速度明显减慢，6d后肿瘤体积明显小于对照组和空载体组（P〈0．05）；治疗组肿瘤标本中SEV17、p21、p16和caspase-3的表达上调，PCNA、MMP-2、MMP-9、CDK2、CDK4、cyclinD1、cyclinE和bcl-2的表达下降，且GFAP呈阳性表达；TUNEL法检测治疗组肿瘤细胞凋亡增加。结论SEPT7可抑制肿瘤生长、增殖和侵袭，并诱导肿瘤细胞凋亡，对胶质瘤的恶性表型具有逆转作用。
- 贾志凡浦佩玉康春生王广秀张志勇裘明哲黄强
- 关键词：细胞周期因子增殖
- U251胶质瘤荷瘤鼠皮下模型的建立及其表皮生长因子受体通路成员异常表达被引量：3
- 2007年
- 目的建立稳定可靠的荷瘤鼠皮下U251胶质瘤实验动物模型,使其良好地用于胶质瘤分子机制的研究。方法取生长状态良好的U251胶质瘤细胞悬液按1×106个细胞／50μl接种于10只荷瘤鼠腹腔皮下,待其成瘤后将肿瘤组织块接种于20只实验鼠,观察并记录肿瘤皮下生长情况,于成瘤后第5周处死荷瘤鼠检测是否存在肿瘤远处转移;同时对肿瘤组织行HE和免疫组织化学染色检测胶质瘤的病理学特征,观察表皮生长因子受体、磷酰肌醇3-激酶和丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶-2基因阳性表达率,结果与体外培养的U251胶质瘤细胞系的基因异常表达进行比较。结果细胞悬液接种可成功获得皮下U251胶质瘤模型,但潜伏期延长(2-3周),成功率低(6／10);若将其生成的肿瘤组织块再次接种于荷瘤鼠皮下则可获得高效、稳定的成瘤率(20／20)且潜伏期明显缩短(3d-5d)。荷瘤鼠生长状态良好,无恶病质变化,未发生其他脏器转移。大体标本观察显示,肿瘤体积>750mm3时其内部多见坏死伴囊性变,部分肿瘤尚有脂肪浸润或纤维化;肿瘤有假包膜形成,瘤体部分呈鱼肉状,是胶质瘤生发和再移植取材的部位。免疫组织化学检测显示,荷瘤鼠皮下胶质瘤组织和体外培养的U251胶质瘤细胞对表皮生长因子受体、磷酰肌醇3-激酶以及丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶-2基因通路主要成员的基因表达情况相似。结论将U251胶质瘤细胞悬液接种于荷瘤鼠皮下形成的胶质瘤再移植到荷瘤鼠皮下建立U251移植瘤实验模型的方法简便、潜伏期短、成功率高、稳定性好,可以作为胶质瘤体内实验研究的动物模型。
- 刘晓智康春生张志勇贾志凡王广秀浦佩玉
- 关键词：神经胶质瘤
- 反义miR-30a-5p对人脑胶质瘤细胞U251生长的抑制作用被引量：3
- 2011年
- 目的观察敲低microRNA（miR）-30a-Sp表达对人脑胶质瘤U251细胞生物学特征的影响。方法用脂质体介导转染寡聚核苷酸抑制物（miR-30a-Spinhibitor）于人脑胶质瘤U251细胞。采用实时聚合酶链反应（real—time PCR）检测转染后U251细胞的miR-30a-5p表达水平以鉴定抑制效果；噻唑蓝（MTT）比色法评价miR-30a-5p inhibitor抑制U251细胞生长的作用；Transwell实验检测细胞侵袭能力变化；流式细胞术检测细胞周期变化；AnnexinV法检测细胞早期凋亡。结果real-time PCR检测结果显示转染miR-30a-5p inhibitor后，肿瘤细胞miR-30a-5p表达下降，细胞增殖活性降低，细胞侵袭能力明显受到抑制，细胞周期阻滞在G0／G1期及早期凋亡增加。结论miR-30a-5p可能是癌微RNA（oncomiR）之一，有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点。
- 王坤贾志凡张安玲王广秀郝建伟浦佩玉
- 关键词：胶质瘤增殖细胞周期
- SEPT7与神经肿瘤的关系
- 2007年
- 人隔蛋白7(SEPT7)是隔蛋白家族成员,参与调控细胞内许多重要的生物学行为,现已初步发现SEPT7在神经肿瘤中表达下调,提示SEPT7与神经肿瘤具有相关性,文章对SEPT7与神经肿瘤的关系以及在酵母分裂过程中表达的与SEPT7高度同源的CDC10的资料进行了总结。
- 贾志凡浦佩玉
- 关键词：神经肿瘤细胞周期
- 反义AKT2 RNA抑制U251胶质瘤细胞生长的体内外研究被引量：7
- 2007年
- 目的 研究反义AKT2RNA对U251人脑胶质瘤细胞在体内外的生长抑制效用。方法 将逆转录病毒pLXSN为载体的反义AKT2构建体转染U251人脑胶质瘤细胞系，应用蛋白印记确定基因转染前后AKT2的表达水平。流式细胞法与Matrigel基质生长实验评价肿瘤细胞转染前后的增殖活性。进一步应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导pLXSN、pLXSN-AS-AKT2基因治疗对U251细胞生长抑制作用。在28d的观察期内定期测量皮下肿瘤体积，对肿瘤标本应用免疫组化的方法进行AKT2和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达比较。结果 脂质体介导pLXSN-AS-AKT2可显著抑制U251细胞AKT2表达。与对照组和pLXSN转染组比较，细胞周期分析结果表明AK—AKT2转染组进入S期的细胞数减少了8．5％～8．9％，而进入G0＋G1期细胞则增加了7．9％～8．6％。Matrigel基质生长实验显示对照组和pLXSN转染组细胞呈正常形态贴壁生长，而AS～AKT2转染组细胞不能贴壁生长，呈团块状簇集生长。裸鼠皮下荷瘤模型实验显示pLXSN-AS-AKT2显著抑制皮下肿瘤生长，组织病理学分析显示AS-AKT2转染组AKT2表达下降而GFAP表达上调。结论 体内外实验证明反义AKT2方法在抗胶质瘤增殖方面作用重要，AKT2可作为基因治疗胶质瘤的优选靶标。
- 康春生浦佩玉贾志凡张志勇王广秀刘晓智裘明哲
- 关键词：神经胶质瘤反义RNAAKT2
- 白藜芦醇抑制U251人胶质瘤细胞增殖及其相关机制的探讨被引量：2
- 2007年
- 目的 探讨白藜芦醇（Res）对U251胶质瘤细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制。方法 将不同浓度Res作用于U251胶质瘤细胞系，相差显微镜下观察其形态的变化，MTT法检测其对细胞生长增殖的抑制作用，流式细胞术（FCM）检测其对细胞周期的影响，用蛋白印迹（Western blot）检测Res处理前后U251细胞表皮生长因子受体（EGFR）、p53、p21、CDK4、CyclinD1、Bcl-2及caspase-3的表达，免疫组化分析MMP9、NFKB、P-AKT及AKT2的表达。结果 U251细胞经Res处理后，细胞形态发生一定变化，U251胶质瘤细胞的增殖被抑制，呈浓度和时间依赖性，细胞周期被阻滞在S期，Western blot检测显示EGFR、CyclinD1、CDK4、Bcl-2的表达降低，p21、p53、caspase-3蛋白表达升高，免疫组化检测显示MMP9，NFKB、P-AKT及AKT2的表达降低。结论 Res有可能通过调节EGFR及p53信号通路而抑制U251胶质瘤细胞的增殖和侵袭，诱导肿瘤细胞凋亡。
- 王广秀浦佩玉康春生张志勇贾志凡李彦和
- 关键词：白藜芦醇U251胶质瘤细胞增殖表皮生长因子受体P53
- 敲低Yes相关蛋白表达对人脑胶质瘤细胞SNB19生长的抑制作用被引量：4
- 2014年
- 目的探究敲低Yes相关蛋白（YAP）对人脑胶质瘤细胞SNBl9细胞生物学特征的影响。方法采用YAP干扰RNA（YAPsiRNA）敲低SNBl9细胞中YAP的表达，Westernblot法鉴定肿瘤细胞中YAP是否已被敲低；噻唑蓝（MTY）比色法测定YAP敲低后胶质瘤细胞的增殖能力；Transwell实验检测胶质瘤细胞侵袭能力的变化；流式细胞术和AnnexinV标记法分别检测胶质瘤细胞周期及凋亡的变化。应用统计软件SPSS18．0进行统计学处理。结果Westernblot证实转染YAPsiRNA可有效敲低SNB19细胞中Yes相关蛋白的表达；敲低Yes相关蛋白的表达可以抑制胶质瘤细胞增殖活性，细胞存活率由（100．00±0．00）％下降为（52．32±3．10）％（F=33．00，P〈0．01），细胞周期阻滞于G0-G1期（F=8．76，P〈0．01），细胞侵袭能力明显受抑，穿膜细胞数由（163．20±10．10）个下降至（37．71±2．52）个（F=282．05，P〈0．01），凋亡增加，凋亡率由（3．56±0．35）％增加至（18．99±0．66）％（F=931．99，P〈0．01）。结论敲低胶质瘤细胞SNB19中YAP表达可抑制肿瘤细胞增殖和侵袭，诱导细胞凋亡；YAP可成为人脑胶质瘤基因治疗的潜在靶点。
- 于福华贾志凡浦佩玉王广秀张安玲杨卫东
- 关键词：神经胶质瘤细胞增殖细胞凋亡
- 转染Notch2基因对人脑胶质瘤细胞系A172生长的抑制作用被引量：1
- 2014年
- 目的探讨人脑胶质瘤细胞系A172转染Atoc/i2基因后抑制细胞增殖情况及其机 制。方法将A172细胞分为空白对照组、转染空载质粒组（pcDNA3）、转染Notch2质粒组 （Notch2-pcDNA3）三组，后两组分别转染空载体和Notch2。采用MTT法检测其对细胞增殖的影响，流式细胞术检测其对细胞周期和凋亡的影响，Transwell方法检测其对细胞侵袭的作用，Western blotting检测转染Notch2质粒后A172细胞中重要信号通路成员Notch2、表皮生长因子受体 （EGFR）、组织磷酸化蛋白（p-AKT）、胞内磷脂酰肌醇激酶（PI3K）、人第10号染色体缺失的磷酸酶 （PTEN）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase3）、细胞核因子kB（NF-kB）、增殖细胞核抗原（PCNA）、白细胞介素-2（Bcl-2）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）及周期素依赖性激酶 抑制因子l（CyclinDl）]相关基因的表达。结果MTT实验结果显示，与对照组及pcDNA3组比 较，A172细胞被转染Notch2后细胞存活率明显下降，差异有统计学意义（P〈0.05）;S期及G2/M期 细胞减少，G0/G1细胞较对照组相比增加22.1%,细胞明显被阻滞于G0/G1期；凋亡细胞数从对照组 的1.2%增加到14.8%;细胞侵袭数由对照组的35.23个降低至17.43个。与PI3K-AKT通路相关的 重要成员 EGFR、p-AKT、PI3K 以及 NF-kB、PCNA、Bc1-2、MMP-2、MMP-9 及 CyclinDl 等表达水平 均有明显下调；而拮抗PI3K/AKT活性的抑癌蛋白PTEN以及Caspase-3的表达则明显上调。结论转染TVoteM基因可抑制细胞增殖和侵袭，诱导细胞凋亡以及重要信号通路成员的基因表达变化。
- 王广秀许鹏贾志凡张安玲浦佩玉
- 关键词：NOTCH2神经胶质瘤EGFRPI3KAKT通路
