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许鹏: 作品数：14 被引量：56H指数：6; 供职机构：天津医科大学总医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”天津市科技计划更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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转染Notch2基因对人脑胶质瘤细胞系A172生长的抑制作用被引量：1: 2014年; 目的探讨人脑胶质瘤细胞系A172转染Atoc/i2基因后抑制细胞增殖情况及其机制。方法将A172细胞分为空白对照组、转染空载质粒组（pcDNA3）、转染Notch2质粒组（Notch2-pcDNA3）三组，后两组分别转染空载体和Notch2。采用MTT法检测其对细胞增殖的影响，流式细胞术检测其对细胞周期和凋亡的影响，Transwell方法检测其对细胞侵袭的作用，Western blotting检测转染Notch2质粒后A172细胞中重要信号通路成员Notch2、表皮生长因子受体（EGFR）、组织磷酸化蛋白（p-AKT）、胞内磷脂酰肌醇激酶（PI3K）、人第10号染色体缺失的磷酸酶（PTEN）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase3）、细胞核因子kB（NF-kB）、增殖细胞核抗原（PCNA）、白细胞介素-2（Bcl-2）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）及周期素依赖性激酶抑制因子l（CyclinDl）]相关基因的表达。结果MTT实验结果显示，与对照组及pcDNA3组比较，A172细胞被转染Notch2后细胞存活率明显下降，差异有统计学意义（P〈0.05）;S期及G2/M期细胞减少，G0/G1细胞较对照组相比增加22.1%,细胞明显被阻滞于G0/G1期；凋亡细胞数从对照组的1.2%增加到14.8%;细胞侵袭数由对照组的35.23个降低至17.43个。与PI3K-AKT通路相关的重要成员 EGFR、p-AKT、PI3K 以及 NF-kB、PCNA、Bc1-2、MMP-2、MMP-9 及 CyclinDl 等表达水平均有明显下调；而拮抗PI3K/AKT活性的抑癌蛋白PTEN以及Caspase-3的表达则明显上调。结论转染TVoteM基因可抑制细胞增殖和侵袭，诱导细胞凋亡以及重要信号通路成员的基因表达变化。; 王广秀许鹏贾志凡张安玲浦佩玉; 关键词：NOTCH2 神经胶质瘤 EGFR PI3K AKT通路

RNA干扰敲低Dicer对胶质瘤细胞恶性表型的影响被引量：4: 2011年; 目的观察应用RNA干扰（RNAi）技术敲低Dicer酶后,在体外对U251人胶质瘤细胞生物学特征的影响.方法构建针对Dicer基因的小分子干扰RNA重组腺病毒表达载体（rAd-Dicer）转染至U251细胞.应用RT-PCR检测Dicer mRNA水平的变化,应用免疫荧光和Western blot方法检测Dicer基因在蛋白水平的变化,并对肿瘤细胞中相关功能蛋白的表达进行分析比较.应用MTT法、流式细胞术和Transwell方法评价肿瘤细胞转染前后生物学行为的变化.结果 rAd-Dicer可显著抑制U251细胞Dicer基因的表达;与正常对照组（control）和阴性对照组（rAd-HK）比较,Western blot分析结果显示p-AKT,MMP2/9,PCNA,Cyclin a,VEGF,CD34功能蛋白在rAd-Dicer转染组细胞中表达明显上调;细胞周期结果表明rAd-Dicer转染组进入S期的细胞数增加了 14.1%～15.3%,MTT和Transwell实验结果显示rAd-Dicer转染组细胞增殖速率和体外侵袭能力显著增强.结论敲低Dicer酶表达后,U251细胞表型具有更为恶性转化的倾向,由此初步推测全面抑制细胞microRNAs表达有可能促进肿瘤生成.; 韩磊张安玲岳晓许鹏杨旸王广秀贾志凡浦佩玉康春生; 关键词：神经胶质瘤 DICER RNA干扰生物学表型

反义miR-21增加U251脑胶质瘤细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性的研究被引量：8: 2010年; 目的探讨as—miR-21增加U251脑胶质瘤细胞对5-FU化疗敏感性的效果。方法透析法制备5-FU／PAMAM载体，透射电镜观察形态，紫外分光光度计检测载药率和包封率；流式细胞仪检测转染效率并分析细胞凋亡比例；MTT法检测共转染后细胞生长抑制效果；免疫荧光检测Ki67和Bcl-2蛋白表达；Transwell检测细胞侵袭能力变化。结果纳米微粒形态规整；平均包封率为66．21％，平均载药量为31．77％；PAMAM转染效率为70．53％；共转染组细胞生长显著抑制（F=273．345，P=0．000）；凋亡比例升高（F=43．21，P=0．000），Ki67、Bcl-2表达均下调；细胞侵袭能力显著下降。结论PAMAM可以有效同载as—miR-21和5-FU，且更加有效地抑制U251脑胶质瘤细胞的体外生长并增加对5-FU的化疗敏感性。; 任玉周旋原续波许鹏王广秀贾志凡张安玲韩磊浦佩玉康春生; 关键词：PAMAM

Wnt2信号通路重要成员在胶质瘤中的表达及其意义被引量：6: 2009年; 近来发现Wnt信号通路对个体发育和肿瘤生成具有重要作用。为进一步探讨Wnt通路在胶质瘤中是否存在表达异常及其在胶质瘤生成中的作用，我们采用RT—PCR、组织芯片免疫组织化学染色以及蛋白印迹法，对人脑胶质瘤Wnt2通路相关因子的表达变化及其意义进行了分析。; 王广秀张志勇浦佩玉康春生于士柱贾志凡许鹏周旋; 关键词：人脑胶质瘤免疫组织化学染色 WNT通路蛋白印迹法肿瘤生成个体发育

SEPT7基因抑制人胶质瘤细胞系U251MG侵袭的研究: 2008年; 目的研究SEPT7基因对人胶质瘤细胞系U251MG侵袭的抑制作用及其可能的分子机制。方法以腺病毒为载体转导SEF／7（rAd5-SEPT7）人U251人脑胶质瘤细胞系；Transwell法和3-D Matrigel法观察U251胶质瘤细胞侵袭能力的变化，划痕实验和2-DMatrigel法观察细胞迁移能力的变化。应用蛋白印记检测MMP2，MMP9，MT1-MMP，TIMP1和TIMP2的表达变化，蛋白印记和免疫荧光检测整合素α，β3的表达，以及应用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞骨架蛋白tubulin—α结构的变化。结果转染SEF17后U251MG细胞的侵袭和迁移能力明显受到抑制、细胞MMP2、MMP9、MT1-MMP和整合素α，β3的表达下调、TIMP1和TIMP2的表达则上调；肿瘤细胞的微管蛋白tubulin—α结构出现了重新分布，发生了扭曲及聚集现象，接近于正常的非肿瘤细胞的tubulin-α结构。结论SEPT7基因可以抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移能力，其分子机制可能通过逆转MMPs／TIMPs的失衡状态，降低整合素α，β3的表达，以及改变细胞骨架tubulin—α的结构而实现的。SEPT7可作为基因治疗胶质瘤的重要候选基因。; 徐嵩贾志凡黄强王广秀张安玲刘晓智周旋许鹏浦佩玉; 关键词：胶质瘤基因治疗

反义miR-21抑制异种移植U251人脑胶质瘤生长的体内研究被引量：4: 2008年; 目的探讨敲低miR-21表达抑制裸鼠荷皮下U251人脑胶质瘤生长的疗效和机制。方法原位注射miR-21反义寡聚核苷酸（AS—miR-21）治疗裸鼠皮下荷U251人脑胶质瘤。定时测量肿瘤大小评估原位注射AS—miR-21治疗效果：使用Real time PCR和原位杂交方法鉴定治疗后miR-21表达水平下凋；采用HE染色和免疫组织化学染色（PCNA、PTEN、MMPs、和Septins）评价治疗后肿瘤生物学性状改变；TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果肿瘤生长曲线显示AS-miR-21治疗组肿瘤生长速度及体积小于空白对照与无义序列治疗组（F=52．458，P=0．000）；Real—time PCR法：AS—miR-21治疗组miR-21表达下调为对照组的0．018±0．009：原位杂交显示AS-miR-21治疗组miR-21表达水平较对照与无义序列治疗组下调；组织病理学检测表明AS—miR-21治疗后肿瘤恶性度降低；TUNEL法检测可见AS-miR-21治疗组细胞凋亡数显著高于对照与无义序列治疗组（F=141．021，P=-0．000）。结论以miR-21作为靶点抑制异种移植U251人脑胶质瘤生长．miR-21可能通过上调抑癌基因PTEN抑制胶质瘤的生长．可以作为人脑胶质瘤基因治疗的侯选靶点。; 周旋康春生浦佩玉许鹏王广秀张安玲贾志凡刘晓智徐嵩张春智; 关键词：脑胶质瘤

Notch信号通路与脑肿瘤: 2008年; Notch信号通路作为一个对细胞的生长发育具有广泛多样化影响的信号途径，也与肿瘤的发生、发展相关。对于不同的肿瘤或同一肿瘤的不同级别、不同发展阶段Notch信号通路可能具有不同作用。Notch信号在一些脑肿瘤（脑胶质瘤、髓母细胞瘤、神经母细胞瘤、脑膜瘤）中异常表达，且参与这些脑肿瘤的发生、发展。; 许鹏浦佩玉; 关键词：NOTCH 脑肿瘤基因疗法

反义miR-21抑制U251人脑胶质瘤细胞株增殖的体外研究被引量：10: 2009年; 目的探讨敲低miR-21表达抑制U251人脑胶质瘤细胞株增殖能力的效果和机制。方法脂质体介导转染反义寡聚核苷酸（AS—miR-21）下调U251人脑胶质瘤细胞株miR-21的表达。使用实时定量PCR和原位杂交法鉴定转染后U251细胞miR-21表达水平下调；MTF法评价AS—miR-21抑制U251细胞生长效果；流式细胞术检测转染后U251细胞周期分布和凋亡；采用细胞免疫荧光技术（PCNA、CyclinDl、Bcl-2、PTEN和Septin-7）评价转染后U251细胞肿瘤生物学性状改变。结果MTY结果显示AS—miR-21转染组肿瘤细胞生长速度小于对照组与无义寡核苷酸（F=78．926，P=0．000）组；实时定量PCR法：AS—miR-21转染组miR-21表达下调为对照组0．0424-0．012；LNA—miR-21原位杂交显示AS—miR-21转染组miR-21表达水平较对照组与无义寡核苷酸组下调；流式细胞术检测可见AS—miR-21转染组细胞周期存在G0／G1期阻滞（Х^2=14．160，P=0．007）且凋亡比例高于对照组与无义寡核苷酸组（F=23341．25，P=0．000）；细胞免疫荧光法表明AS—miR-21治疗后U251细胞PCNA、CyclinDl、Bcl-2表达下调，PTEN、Septin-7表达上调。结论以miR-21作为靶点抑制U251人脑胶质瘤细胞株生长结果肯定，miR-21可以作为人脑胶质瘤基因治疗的侯选靶点。; 周旋任玉许鹏王广秀贾志凡张安玲徐嵩浦佩玉康春生; 关键词：MIR-21 反义寡聚核苷酸基因治疗

Notch家族成员在星形细胞瘤及髓母细胞瘤中的表达被引量：1: 2010年; 目的检测Notch家族成员Notchl-4蛋白在人脑星形细胞瘤及髓母细胞瘤中的表达，探讨其在肿瘤生成中的作用。方法应用组织芯片免疫组化染色及WesternBlot检测正常脑组织、不同级别大脑星形细胞瘤、小脑髓母细胞瘤中Notch1、2、3、4蛋白的表达。结果正常脑组织中Notch1、2、3、4蛋白均无表达；星形细胞瘤中Notch1、3、4蛋白的阳性表达率及表达强度随肿瘤病理级别的增高而增高，Notch2无表达；髓母细胞瘤中Notch1、3、4低或无表达，Notch2呈高表达。结论Notch1、2、3、4在星形细胞瘤及髓母细胞瘤中表达有所差异，可能与Notch家族成员在脑发育过程中的作用不同有关。; 许鹏浦佩玉康春生贾志凡张安玲韩磊王广秀; 关键词：星形细胞瘤髓母细胞瘤

反义microRNA-221与反义microRNA-222抑制人脑胶质瘤细胞的体外与体内生长被引量：9: 2009年; 目的探讨敲低microRNA（miR）-221和miR-222表达以抑制人脑胶质瘤U251细胞生长的作用及其机制。方法脂质体介导转染反义寡聚核苷酸（AS—miR-221和AS．miR-222）于人脑胶质瘤细胞13251。采用Northern blot鉴定转染后U251细胞的miR-221和miR-222表达水平；四甲基偶氮唑蓝（Myr）法评价AS—miR-221和AS—miR-222抑制U251细胞生长的作用；Transwell实验检测细胞侵袭能力；流式细胞术检测细胞周期的分布和凋亡；Western blot检测转染后U251细胞相关蛋白表达的变化，并用AS—miR-221和AS—miR-222治疗裸鼠皮下移植瘤，观察其在活体内对肿瘤生长的抑制作用。结果Northern blot检测结果显示，AS-miR-221和AS—miR-222共转染后，肿瘤细胞miR-221和miR-222表达明显下降，细胞生长速度降低，细胞穿过率为14．5％，细胞周期出现G0／G1期阻滞，凋亡率（13．7％）增高，并可见connexin43、p27、PUMA、caspase-3、PTEN、TIMP3和Bax等相关蛋白表达增高，而bcl-2表达降低，p53无明显变化。经AS—miR-221和AS—miR-222治疗后，裸鼠皮下移植瘤生长明显受抑。结论AS-miR-221和AS—miR-222共转染可抑制U251细胞的增殖与侵袭，miR-221和miR-222可以作为人脑胶质瘤基因治疗的侯选靶点。; 张春智康春生浦佩玉王广秀贾志凡张安玲韩磊许鹏; 关键词：基因疗法

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