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盐藻丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因DsSTPK的克隆、原核表达及纯化被引量：7: 2014年; 前期研究表明,盐藻丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶DsSTPK在转录水平上的表达受盐胁迫诱导。为了进一步研究该蛋白激酶的生理功能,通过RT-PCR扩增DsSTPK的开放阅读框,并将其克隆至pET32a(+)载体,得到重组表达载体pET32a(+)-DsSTPK。将重组表达载体转化E.coli.BL21(DE3),IPTG诱导表达,然后对融合蛋白进行表达形式分析,利用His60 Ni离子重力柱进行纯化,所得产物进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。本研究成功构建了重组表达载体pET32a(+)-DsSTPK,经IPTG诱导后表达出的融合蛋白的分子量与预期相符;表达形式分析显示该融合蛋白在上清和包涵体中均存在;将上清蛋白纯化后获得了纯度较高的融合蛋白;Western-blot检测显示该融合蛋白能被抗组氨酸抗体特异性识别,具有良好的免疫学活性。DsSTPK的成功表达、纯化,为下一步制备抗体,然后进一步在蛋白质水平上研究其在盐藻耐盐机制中的作用奠定了基础。; 陶晓迎柴晓杰薛飞李秀娟丛玉婷; 关键词：盐生杜氏藻原核表达纯化

VEGFR-2与抑制剂Sunitinib的分子对接及分子动力学研究被引量：4: 2012年; 用分子对接方法研究了VEGFR-2和抑制剂Sunitinib的相互作用模式,并对其复合物进行了10 ns的分子动力学(Molecular Dynamics,MD)模拟.结果表明,抑制剂Sunitinib能与VEGFR-2中位于活性空腔的Glu885,Ile888,His1026,Asp1028,Asp1046五个氨基酸残基形成疏水作用;另外,VEGFR-2中His1026,Cys1024,Asp1046三个氨基酸残基能与Sunitinib形成三个作用强度不同的氢键.这些基团之间的相互作用是Sunitinib抑制VEGFR-2活性的关键因素.研究结果可为VEGFR-2抑制剂的结构改良、分子设计、合成提供理论参考,并有助于寻找活性更高、效果更好的抗肿瘤药物.; 安康柴晓杰薛飞王媛张婷; 关键词：VEGFR-2 SUNITINIB 分子对接分子动力学

盐藻CDPK基因的克隆与生物信息学分析被引量：15: 2013年; 为了研究CDPK基因的结构和功能,应用RT-PCR和RACE方法从盐藻Dunaliella salina中克隆得到CDPK基因(GenBank登录号为JQ964113),并对其进行生物信息学分析。结果表明:盐藻CDPK基因的cDNA全长3 052bp。5'-UTR长70bp;开放阅读框长1650bp,编码549个氨基酸;3'-UTR长1332bp。蛋白表现为弱酸性,且稳定、亲水,二级结构中以无规则卷曲和α-螺旋为主,三级结构同源建模成功。亚细胞定位于叶绿体和细胞核中,无跨膜结构域,无信号肽。蛋白序列中存在4个丝氨酸磷酸化位点、4个苏氨酸磷酸化位点和3个酪氨酸磷酸化位点,蛋白激酶结构域在53～331位氨基酸处,蛋白激酶ATP结合域在59～82位氨基酸处,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性域在173～185位氨基酸处,4个EF-hand钙结合域分别在357～385、393～421、429～457、465～493位氨基酸处。进化分析结果表明,克隆的CDPK基因与团藻、衣藻、盐藻Dunaliella tertiolecta的CDPK亲缘关系最近。为进一步研究CDPK基因的功能及探究盐藻耐盐机制的信号转导途径奠定了分子基础。; 张晓琳柴晓杰张婷余祝君薛飞; 关键词：盐藻 CDNA全长生物信息学分析

盐藻小G蛋白基因(DsRab)的克隆及在高盐胁迫下的表达分析被引量：5: 2013年; 采用RT-PCR和RACE技术扩增了杜氏盐藻小G蛋白基因cDNA全长序列(GenBank Accession No.JN989548),命名为DsRab,对其进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR方法检测盐胁迫下该基因的表达情况。结果表明,DsRab基因的cDNA全长为1 299 bp,开放阅读框(ORF)为612 bp,编码203个氨基酸,5'非编码区78 bp,3'非编码区609 bp;保守性结构域分析可知编码的小G蛋白有4个GTP/GDP保守结构域,1个效应区、1个羧基端的半胱氨酸结构域和5个Rab亚家族共有的结构域;二级结构预测表明该蛋白有32.02%的α-螺旋,23.65%的伸展片段,44.33%的自由卷曲,三维建模成功;比对分析发现DsRab蛋白与多种生物的Ypt/Rab的氨基酸序列具有较高的同源性。荧光定量PCR结果表明,盐藻在高盐(3.0 mol/L)胁迫下,DsRab基因表达量显著上调,1 h后表达量达到最大值,为正常培养下对照组(0 h)的4.9倍,差异极显著(P<0.01)。; 余祝君柴晓杰张晓琳张婷薛飞; 关键词：杜氏盐藻 RACE技术生物信息学荧光定量PCR

盐藻丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因DsSTPK的克隆和表达分析: 盐藻(Dunaliella salina)是一种低等单细胞真核生物,属于绿藻门、真绿藻纲、团藻目、盐藻科、盐藻属,是已知最为耐盐的真核生物之一,是研究植物高盐适应的模式生物。多年以来许多学者从盐藻适应高盐环境的渗透调节、...; 薛飞; 关键词：盐藻分子机制基因克隆; 文献传递

大豆胰蛋白酶抑制剂基因KSTI3在盐藻中的稳定表达: 应用PCR技术扩增Nos基因、CaMV35S启动子片段和氯霉素抗性基因Cat,并与胰蛋白酶抑制剂基因KSTI3连接,构建真核表达载体pMDCKN-Cat。DNA序列分析结果表明:表达载体中的胰蛋白酶抑制剂KSTI3基因、...; 柴晓杰徐文琦张婷薛飞陈慧黠; 关键词：盐藻真核表达载体; 文献传递

盐藻新基因DsSTPK的克隆及生物信息学分析被引量：12: 2012年; 采用RT-PCR和RACE技术克隆了杜氏盐藻DsSTPK的1种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因(GenBank accession No.JN625213),命名为DsSTPK,并对其进行了生物信息学分析.结果表明,盐藻DsSTPK基因的cDNA全长为3 129 bp,可阅读框为2 184 bp,编码727个氨基酸.该蛋白为亲水性蛋白,无信号肽,无跨膜区域,为非跨膜蛋白,且定位于细胞质基质,二级结构的主要元件为无规卷曲和α螺旋,三维建模成功,在167～190位有1个蛋白激酶的ATP结合区、293～305位1个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性区,存在多个潜在的磷酸化位点.进一步的进化分析表明,其与衣藻、团藻亲缘关系最近.这些研究结果为进一步阐明DsSTPK的功能及作用机制奠定了基础.; 薛飞柴晓杰余祝君张晓琳张婷; 关键词：杜氏盐藻全长CDNA 生物信息学分析

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薛飞