艾均文
- 作品数：12 被引量：59H指数：6
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- 发文基金：国家教育部博士点基金重庆市教委科研基金国家高技术研究发展计划更多>>
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- 家蚕P450基因CYP18A1的克隆、序列分析及转录活性被引量：13
- 2008年
- 蜕皮激素对昆虫生长、发育和繁殖有重要调控作用,尤其对蜕皮和变态过程。利用GenBank上登录的蜕皮激素C26羟基化酶候选基因CYP18A1的氨基酸序列对家蚕Bombyx mori全基因组数据库进行BLASTP比对,发现了家蚕直向同源基因(ortholog),其完全编码序列经RT-PCR检测和克隆、测序验证后,再以此为信息探针检索家蚕表达序列标签(expressed sequence tags,EST)数据库进行拼接延伸,获得了一条包括5′非翻译区在内的长度为1737bp的cDNA序列,验证结果也表明与电子克隆序列完全一致(GenBank登录号为EF421988,P450命名委员会将其命名为CYP18A1)。该基因的开放阅读框为1623bp,编码541个氨基酸,含有包括P450s特征结构域在内的所有昆虫P450基因的5个保守结构域,其推定的分子量为61.67kD,等电点为8.54。将该基因cDNA序列与家蚕基因组序列进行比对,结果表明该基因具有6个外显子,5个内含子,外显子/内含子边界符合经典的GT-AG规则。同源性分析也发现家蚕CYP18A1与其他昆虫的直向同源基因具有较高相似性。用RT-PCR方法对家蚕主要发育变态时期与组织进行检测,显示出该基因的转录表达不仅具有时空特异性,而且在表达时期上与已报道的蚕体内蜕皮激素含量变化有紧密的一致性。该研究进一步证实了CYP18A1基因与昆虫体内蜕皮激素代谢平衡相关联。
- 艾均文王根洪李艳红余泉友张学松朱勇向仲怀
- 关键词：家蚕细胞色素氧化酶克隆转录活性
- 家蚕（Bombyx mori）全基因组细胞色素P450基因结构与进化分析及CYP18A1克隆与功能研究
- 细胞色素P450酶系又称作多功能氧化酶(MFO)，是广泛存在于所有需氧生物体中的一类代谢酶系，细胞色素P450基因起源于35亿年前的一个共同祖先，是最古老和最庞大的超基因家族之一，在生命的过程中，它对内源物质的代谢与转化...
- 艾均文
- 关键词：家蚕P450酶基因结构
- 家蚕含染色质域基因Bm-msl3的克隆和转录活性检测
- 2007年
- 染色质域是从酵母到哺乳动物的真核生物中普遍存在的一个保守的基因元件,参与染色质重组和基因表达调节。根据NCB I登录的果蝇和人的MSL3序列以及家蚕的基因组与EST数据库克隆了家蚕含染色质域的基因Bm-msl3(GenBank登陆号:DQ887343)。该基因mRNA序列全长2 356 bp,在2 168 bp处有1个AAATATTA加尾信号,基因的编码区长1 665 bp,包括13个外显子。推定的蛋白质编码554个氨基酸,序列的N端含有一个保守染色质域。RT-PCR检测表明该基因在所调查的家蚕发育时期和组织中均有表达。
- 孔卫青杨金宏艾均文朱勇
- 关键词：家蚕转录活性
- 家蚕细胞色素P450 CYP337A1的原核表达被引量：1
- 2008年
- 以含有CYP337A1基因完全编码框的克隆载体质粒DNA为模板进行PCR扩增,产物经TA克隆测序鉴定后,亚克隆至原核融合表达载体PET50(b)(含有编码64.3 kD的Nus.Tag蛋白标签)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达。利用SDS-PAGE方法,以空载和未诱导菌体作对照,对细菌总蛋白进行电泳分析,结果表明:经1mmol/L IPTG诱导2h后,即能看到1条大约120 kD的蛋白质特异带,与预计大小一致。进一步利用不同时间、不同温度以及不同浓度的IPTG进行诱导结果比较,发现在诱导时间为2h,温度为32℃,IPTG浓度为0.6 mmol/L的诱导条件下,融合蛋白表达量最大。该实验为利用该基因的蛋白产物进行功能分析创造了条件。
- 董元凌艾均文柳照应张湖静李傲祥朱勇
- 关键词：家蚕细胞色素P450原核表达
- 野桑蚕多酚氧化酶的部分生化特性分析被引量：2
- 2007年
- 基于开发专一的酶抑制剂控制野桑蚕危害桑园的目的,采用硫酸铵分级沉淀及Sephadex G-100凝胶过滤等方法,纯化了野桑蚕(Bom byx mandarina)多酚氧化酶,纯化倍数为57.14倍。该酶对焦性没食子酸、邻苯二酚和L-多巴的米氏常数(Km)值分别为3.39、2.06和3.17 mmol/L,在pH 7.0、37℃时活性最高。利用硫脲、抗坏血酸等多种氧化酶抑制剂对该酶活性的抑制结果表明,所用抑制剂对其均有不同程度的抑制作用。此外,该酶对乙二胺四乙酸(EDTA)和金属离子比较敏感。
- 张永亮朱勇曾媛琴贾永红柳照应艾均文
- 关键词：野桑蚕多酚氧化酶生化性质
- 家蚕细胞色素P450基因CYP6AE2的分子克隆与序列分析被引量：11
- 2007年
- 为了在分子水平上研究家蚕(Bom byx mori)细胞色素P450基因的特性,更好地探讨该基因与家蚕抗性的相关机制,依据已有的家蚕基因组数据,通过BLASTP比对,选择与抗性相关的6家族中含有预测基因数量最多的CYP6AE亚家族的1条序列,并设计1对引物,用RT-PCR方法克隆了家蚕细胞色素P450家族基因CYP6AE2(Gen-Bank登陆号:EF415296)。该基因的ORF为1 572 bp,编码523个氨基酸,推定的蛋白质分子质量为60.2 kD,等电点为8.50。将该基因的cDNA和家蚕基因组序列比对,结果表明该基因只有1个内含子;与已知的同亚家族基因CYP6AE1(欧洲防风草结网毛虫Depressaria pastinacella)、CYP6AE12(棉铃虫Helicoverpa armigera)编码的氨基酸序列比对,同源性同为53%。
- 艾均文董元凌孔卫青杨金宏刘劲张永亮张学松柳照应朱勇
- 关键词：家蚕细胞色素P450基因基因克隆
- 桑尺蠖多酚氧化酶的纯化及其部分生物化学性质被引量：4
- 2007年
- 经硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-100凝胶过滤等步骤,使桑尺蠖Phthonandria atrineata(Butler)多酚氧化酶纯化,纯化倍数为6.28倍.该酶对焦性没食子酸、邻苯二酚和L-多巴的Km值分别为9.64 mmol/L、6.82 mmol/L和4.30 mmol/L.这种多酚氧化酶在pH=7.0,37℃时活性最高.利用多种氧化酶抑制剂对该酶活性的抑制结果表明,所用抑制剂对其均有不同程度的抑制作用.此外,该酶对EDTA和金属离子比较敏感.
- 张永亮曾媛琴贾永红柳照应艾均文朱勇
- 关键词：桑尺蠖多酚氧化酶纯化抑制剂
- 家蚕特异启动子的研究及应用进展
- 启动子是调控基因表达的"开关",相关研究不但有助阐释基因的表达调控机制,而且在动植物经济性状改良和生产重组外源蛋白等方面也极具应用价值。近年在基因组计划的推动下,有关家蚕启动子的研究取得了长足进展,国内外学者鉴定和研究了...
- 龚椿营艾均文徐汉福贾超华何行健刘勇杨勇
- 关键词：家蚕诱导型启动子
- 文献传递
- 家蚕春秋兼用限性品种“南·岳×星·辰”的选育被引量：10
- 2008年
- 采用杂交、回交与系统选育等育种方法,经春、夏、秋不同环境下定向培育及严格的后代选择,分别育成了中系限性家蚕品种南(1505)、岳(1507)和日系限性家蚕品种星(1514)、辰(1518),并根据杂交强势的原理,组配成春秋兼用四元杂交种南.岳×星.辰。实验室鉴定、农村饲养及种场繁育结果表明,该品种强健好养,产茧量高,茧丝质优良,原蚕容易饲养,综合经济性状优良。新品种春季饲养的万蚕产茧量比对照品种菁松×皓月高3.0%,虫蛹率96.20%,解舒丝长1 177.8 m,洁净95.50分;秋季饲养的万蚕产茧量比对照品种洞.庭×碧.波高6.8%,虫蛹率93.29%,解舒丝长879.7 m,洁净93.67分。新品种的幼虫均为皮斑限性,日系原蚕蛾具有米黄色花翅的特点。
- 艾均文颜新培孟繁利李章宝谈顺友仰勇
- 关键词：家蚕品种春秋兼用
- 细胞色素P450新家族的第一个基因CYP337A1的分子克隆与序列分析被引量：7
- 2008年
- 依据家蚕基因组数据,通过BLASTP比对,选择了主要与抗性相关的CYP3集团(clan)中具有完全编码框并含有P450基因特征结构域的1条序列为研究对象,用RT-PCR方法对其进行了克隆.结果表明,该基因ORF为1 467 bp,编码489个氨基酸,推定的蛋白质分子质量为56.60 KDa,等电点为8.64.只有1个内含子,外显子/内含子边界处符合GT-AG规则.与美国棉铃虫的CYP321A、邪恶按蚊的CYP6P9的相似性(identity)相对较高,分别为34%、32%,低于同一家族成员氨基酸相似性应高于40%的规定,从而被细胞色素P450委员会命名为新家族的第一个基因CYP337A1(GenBank登陆号:EF415297).
- 艾均文董元凌孔卫青杨金宏张学松柳照应张永亮朱勇
- 关键词：细胞色素P450基因克隆家蚕
