童明
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中南大学湘雅二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用短发夹状RNA研究HBV X基因表达对三氧化二砷诱导HepG2细胞凋亡特性的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:应用shRNA(短发夹状RNA)介导的RNA干扰研究HBV X基因表达对三氧化二砷(As2O3)诱导HepG2细胞凋亡特性的影响。方法:用噻唑蓝(MTT)还原法分析经2.0μmol/L As2O3处理的HepG2细胞和表达HBVX基因的HepG2-X细胞的生长抑制率。以未处理细胞为对照,流式细胞术分析细胞凋亡比和细胞周期,采用Caspase3/cpp32活性比色试剂盒测定As2O3处理后细胞裂解物中Caspase3的活性。应用脂质体介导HBX序列特异性shRNA表达载体pXi-1、pXi-2和序列无关对照pXi-3转染HepG2-X,再次分析细胞凋亡比、细胞周期和Caspase3活性的变化。结果:MTT法表明2.0μmol/L As2O3处理36小时具有理想的细胞生长抑制率。As2O3作用后细胞凋亡比明显增高(P<0.05),G2/M期细胞增多(P<0.05)。不同HBV X基因表达水平的细胞As2O3诱导的细胞凋亡比有统计学差异(P<0.05),HepG2-X与HepG2比较,其As2O3诱导的细胞凋亡比下降,且细胞裂解物的Caspase3活性下降(P<0.05),但应用序列特异性shRNA抑制HBV X基因表达后凋亡比和Caspase3活性可再次增高,而作为对照的序列无关的shRNA则无此效应,但这种效应与细胞周期无关。结论:As2O3可诱导HepG2细胞凋亡。表达HBVX基因后As2O3诱导的HepG2细胞凋亡比和Caspas3活性下降,特异性shRNA抑制HBV X基因表达后则无此效应,但这种效应与细胞周期无关。
- 贺兴鄂雷建华杨旭孙会卿童明
- 关键词：乙型三氧化二砷HEPG2细胞细胞凋亡
- 靶向HBx基因shRNA载体稳定表达人肝癌细胞的建立
- 2009年
- 本研究采用整合有HBV DNA而HBsAg表达阴性的人肝癌细胞株MHCC97-H，应用免疫荧光法初步研究HBx表达，并从基因组中克隆HBx基因，采用RNA干扰（RNAi）技术，构建靶向该HBx基因的短发夹RNA（shRNA）真核表达载体，通过转染和筛选，研究shRNA载体在MHCC97-H细胞中稳定表达对HBx基因表达的影响，最终构建稳定表达靶向整合HBx基因的shRNA载体的人肝痛细胞模型，为进一步研究构建平台。
- 贺兴鄂孙会卿杨旭雷建华童明王文龙
- 关键词：肝炎病毒乙型基因疗法RNA干扰
- 靶向整合于MHCC97-H细胞的HBx基因shRNA表达载体的构建和鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的构建靶向整合于人肝癌MHCC97-H细胞乙型肝炎病毒x基因(HBxgene)基因的shRNA真核载体。方法依据从人肝癌细胞株MHCC97-H中克隆的HBx基因序列,设计合成X169、X220及MOCK(无关对照)3对寡核酸,经退火成互补双链并克隆至pGenesil-Ⅰ载体;经酶切、PCR和测序鉴定;将鉴定的shRNA质粒脂质体转染MHCC97-H细胞,流式细胞分析转染效率。结果酶切、PCR及测序证实pshRNA-X169/X220/MOCK质粒构建符合设计,转染48h后MHCC97-H细胞可激发绿色荧光,pshRNA-X220转染效率最低。结论成功构建靶向整合于人肝癌细胞HBVx基因特异性shRNA表达载体,并成功转染人肝癌细胞株MHCC97-H细胞,为沉默HBx基因实验性肝癌基因治疗奠定基础。
- 王文龙孙会卿杨旭贺兴鄂雷建华童明
- 关键词：RNA干扰短发夹RNA乙型肝炎病毒X基因
