秦秀林
- 作品数：30 被引量：28H指数：3
- 供职机构：广西大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金国家自然科学基金广西壮族自治区科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 高效液相色谱法分析胞内S-腺苷-L-甲硫氨酸含量及其合成酶活性的优化研究被引量：7
- 2011年
- 对重组毕赤酵母胞内S-腺苷-L-甲硫氨酸（SAM）含量以及SAM合成酶活性的高效液相色谱（HPLC）测定方法进行了优化。通过调整流动相浓度和洗脱程序,建立了保留时间适中、分离效果好的SAM定量分析方法。结果表明,SAM浓度在0.05~0.5 g.L-1时,其峰面积与浓度线性关系良好,相关系数为0.99996,平均回收率为99.3%~100.5%,相对标准偏差为0.72%~0.98%。该方法对胞内以及酶活测定液中的SAM能够进行有效分离,精密度高、稳定性好,能高效、准确地分析发酵过程菌体中SAM含量以及SAM合成酶活性。
- 姚高峰秦秀林储炬钱江潮
- 关键词：高效液相色谱
- 毕赤酵母的一种组成型启动子及其应用
- 本发明公开了毕赤酵母的一种组成型启动子及其应用。本发明提供了特异DNA分子甲和特异DNA分子乙；所述特异DNA分子甲为序列表中序列3所示的DNA分子；所述特异DNA分子乙由区段1和区段2组成；所述区段1包括所述特异DNA...
- 秦秀林冯家勋张慧杰褚莹赵西浩
- 文献传递
- 生物工程综合设计型实验教学改革的探索
- 2013年
- 生物工程专业是20世纪70年代初开始兴起的一门新兴的综合性应用学科。谊专业知识具有综合性强和应用性广的特点，在大学开设生物工程综合设计型实验课程，对原有实验内容进行重新设计，对教学方法．评价方式进行改革，可以使学生系统全面的掌握生物工程专业知识，同时提高了学生的自主性和创新性，更好地适应社会发展的需要。
- 秦秀林
- 关键词：生物工程设计性实验创新教育
- 利用间隔肽促进S-腺苷甲硫氨酸合成酶在毕赤酵母中的分泌表达被引量：2
- 2013年
- S-腺苷甲硫氨酸(SAM)是所有生物体中都存在的一种重要分子,对维持生物体功能具有重要的作用,已经被广泛地用于治疗肝脏疾病、关节炎和忧郁症等多种疾病。利用巴斯德毕赤酵母KM71构建基因工程菌K/9KM,在AOX1启动子调控下分泌表达达观链霉菌(Streptomyces spectabilis)来源SAM合成酶(MAT)。为促进MAT的分泌,在信号肽Kex2p切割位点后引入间隔肽G-Spacer(NTTEEGEPK),构建重组菌K/GM,其重组蛋白(GM)表达量达到84.7 mg/L,分泌效率提高了92%,MAT比酶活提高了58%。在重组蛋白GM的C端融合表达His-tag,构建重组蛋白GMH表达重组菌K/GMH,GMH的MAT比酶活比GM下降13%,但分泌效率无显著改变。因此,间隔肽G-Spacer对MAT的酶活及分泌有显著的促进作用,而His-tag会降低MAT的酶活力但不影响其分泌效率。所构建的MAT分泌表达基因工程菌K/GMH,在目的蛋白C端融合表达His-tag可减少分离纯化步骤和产物损失,易于酶促转化法生产SAM。
- 秦秀林钱江潮储炬
- 关键词：S-腺苷甲硫氨酸合成酶分泌表达毕赤酵母异源表达
- 哈茨木霉HP37-4纤维二糖水解酶Ⅰ基因的克隆及表达被引量：1
- 2013年
- 从哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HP37-4中克隆得到纤维二糖水解酶Ⅰ基因的全长DNA序列,并从HP37-4总RNA中通过RT-PCR扩增得到该基因全长cDNA序列。序列测定分析表明该基因含有3个外显子和2个内含子,编码含505个氨基酸的多肽。利用生物信息学方法对该蛋白质的结构进行了分析,推测了其主要功能区的位置及结构特征。将该基因cDNA序列克隆到大肠杆菌表达载体pET30a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达该基因。SDS-PAGE分析表明该基因能在大肠杆菌中过量表达,但以不溶性的包涵体形式存在,经包涵体变性和多肽复性后,纯化得到了表达的重组蛋白。
- 吴柳张政卢业飞秦秀林刘君梁冯家勋
- 关键词：哈茨木霉纤维二糖水解酶基因克隆
- GAP启动子文库及其用途
- 本发明涉及GAP启动子文库及其用途。本发明公开了GAP启动子文库中各启动子的核酸序列，含有所述核酸序列的载体和宿主细胞。本发明还公开了筛选所需的突变型启动子的方法。本发明建立了有效的筛选模型，获得了强度成梯度分布的突变型...
- 钱江潮秦秀林储炬庄英萍张嗣良肖慈英
- 文献传递
- 哈茨木霉A25-2纤维二糖水解酶Ⅰ基因的克隆及其编码催化功能域的序列在绿色木酶HP35-3中的表达被引量：1
- 2013年
- 本研究从哈茨木霉(Trichoderma harzianum)A25-2总RNA中利用RT-PCR的方法扩增到其纤维二糖水解酶Ⅰ基因的cDNA序列,并对该基因编码的氨基酸序列进行分析,得到cbhⅠ基因中编码催化功能域的序列。将催化功能域编码序列克隆到表达载体pCP-GH中,用PEG-CaCl2介导的原生质体转化方法将重组质粒转化到绿色木霉(Trichoderma viride)HP35-3中,筛选得到12个转化子。以p-NPC为底物,测定了该12个转化子的酶活力,获得比活力最高的转化子Tv/CD Hl-CBM-5,其纤维二糖水解酶活力是HP35-3的3.8倍。SDS-PAGE分析表明,绿色木霉表达了导入的含A25-2纤维二糖水解酶Ⅰ催化功能域的编码序列。
- 卢业飞吴柳秦秀林冯家勋刘君梁
- 关键词：哈茨木霉绿色木霉原生质体
- 单因素优化提高重组毕赤酵母β-呋喃果糖苷酶产量被引量：1
- 2017年
- 产生低聚果糖的β-呋喃果糖苷酶(β-fructofuranosidase,FFase)是一种具有广泛应用前景的工业酶。为了提高重组毕赤酵母生产FFase的产量,对重组毕赤酵母接种量、摇瓶装液量、甲醇添加量、山梨醇与甲醇共混4个因素进行单因素优化。研究结果表明,接种量为5%时酶活力达到8.35 U/m L,甲醇添加量为0.8%时酶活力达到6.89 U/m L,山梨醇添加量为1.5%时酶活力达到9.49 U/m L,装液量为20 m L时酶活力达到27.34 U/m L。在最优条件下诱导重组毕赤酵母,FFase酶活可达到33.46 U/m L,较优化前提高了4.86倍。该研究为进一步优化毕赤酵母FFase发酵条件和提高FFase产量奠定了一定基础。
- 赵西浩张慧杰张慧杰秦秀林
- 关键词：毕赤酵母发酵过程优化Β-呋喃果糖苷酶
- 一种纤维二糖水解酶Tccel7A及其编码基因及应用
- 本发明公开了一种纤维二糖水解酶Tccel7A及其编码基因及应用。本发明提供的蛋白，是如下（a）或（b）的蛋白质：（a）由序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（b）将序列表中序列3的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残...
- 冯家勋周青鸟秦秀林刘君梁张政
- 文献传递
- 一株青霉突变株及其在制备纤维素酶中的应用
- 本发明公开了一株青霉（Penicillium sp.）突变株及其在制备纤维素酶中的应用。本发明提供了一株草酸青霉(Penicillium oxalicum)EU2106，其保藏编号为CGMCCNo.6471。本发明还提供...
- 冯家勋农清栋刘君梁秦秀林段承杰张政黄妹平蓝健益卢业飞吕芳贤张颖黄叶萍
- 文献传递
