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莲房原花青素对乙醇诱导肝细胞凋亡的拮抗机制被引量：3: 2005年; 目的研究莲房原花青素(LSPC)对乙醇诱导的人胚肝细胞株L-02凋亡的拮抗作用机制。方法观察5、10、25mg/L的LSPC与200mmol/L乙醇共同作用于肝细胞L-0224h后,对细胞生存率、凋亡率的影响,对细胞凋亡通路的相关基因MAPK38、Caspase3、p53以及生长抑制DNA损伤诱导基因(growth arrest and DNA damage-in-ducible gene,GADD)GADD34、GADD45β、GADD153表达的影响。结果与乙醇组相比,5mg/L和10mg/LLSPC使细胞的生存率由73.14%上升到84.79%和90.52%,通过抑制细胞p53和Caspase3通路,并通过降低DNA损伤而降低GADD34、GADD45β、GADD153的表达(P<0.01),从而有效降低细胞的凋亡率,从11.54%分别降至8.21%和9.10%(P<0.05);抑制凋亡率的效果以LSPC5mg/L组最佳,10mg/L组效果次之,但高剂量组(25mg/L)对乙醇所致凋亡的拮抗作用不明显,对细胞生存率也无影响。乙醇和LSPC处理均不影响L-02细胞的MAPK38表达。结论适当浓度的莲房原花青素对乙醇诱导的肝细胞L-02的凋亡有拮抗作用。其抑制凋亡的作用主要是通过p53、Caspase3和GADD途径,而与MAPK途径无关。; 唐瑛李华文唐忠志石丹张江华郝巧玲吕斌; 关键词：原花青素肝细胞

莲房原花青素对乙醇诱导肝细胞DNA损伤的拮抗作用被引量：7: 2006年; [目的]研究莲房原花青素(LSPC)对乙醇诱导的人胚肝L-02细胞株DNA损伤的拮抗作用。[方法]观察5、 10、25 mg/L的LSPC与200 mmol/L乙醇共同作用于L-02肝细胞24 h后,对细胞生存率,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量,DNA损伤修复酶:[切除修复鼠缺陷交叉互补蛋白1(ERCC1)、O6- 甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)、错配修复hMSH2基因、DNA依赖的蛋白激酶复合物(DNA-PKcs)]表达水平等方面的差异进行比较。[结果]与乙醇组相比,5、10 mg/L的LSPC使细胞的生存率分别由73．14%上升到84．79％和90．52％,细胞SOD、CAT、GSH含量增加(P<0．01),MDA含量减少(P<0．01);有效降低细胞DNA损伤程度(P<0．05)。5 mg/L的 LSPC可显著增加乙醇处理细胞中ERCC1、DNA-PKcs、hMSH2的表达(P<0．01),但对MGMT的表达无影响(P>0．05), 10、25 mg/L的LSPC与乙醇组比较,所有4种DNA损伤修复酶的表达均无明显改变。[结论]适量的LSPC可拮抗乙醇诱导的L-02肝细胞的DNA损伤作用。; 唐瑛李华文唐忠志石丹张江华郝巧玲吕斌; 关键词：原花青素肝细胞株 DNA损伤

源水和氯化饮用水中有机提取物对HepG2细胞DNA损伤的诱导作用及对gadd153基因表达的影响被引量：3: 2006年; 背景与目的研究源水和氯化饮用水有机提取物对DNA的损伤作用以及对gadd153启动子和mRNA表达的影响。材料与方法应用彗星试验检测源水和氯化饮用水有机提取物对HepG2细胞的DNA损伤作用;构建含有gadd153启动子和荧光素酶报告基因的载体pGADD153-Luc,以检测荧光素酶活性(发光检测荧光素酶活性)反映gadd153启动子的活性,RT-PCR检测gadd153基因mRNA的表达。结果彗星试验显示在10、100ml/ml培养基剂量组源水和氯化饮用水有机提取物处理24h后,OTM(Olive尾距)显著高于对照组(P<0.01),并有良好的剂量反应关系(源水r=0.882,P<0.05;氯化饮用水r=0.940,P<0.05);氯化饮用水中有机提取物诱导OTM显著高于源水(P<0.05);荧光素酶表达在源水和氯化饮用水有机提取物各剂量组均显著高于对照组(P<0.01)并有良好的剂量反应关系(源水r=0.814,P<0.05;氯化饮用水r=0.921,P<0.05);相关分析表明荧光素酶活性与OTM呈正相关(源水r=0.980,P<0.01;氯化饮用水r=0.995,P<0.01);RT-PCR结果显示在100ml/ml培养基剂量组,源水和氯化饮用水中有机提取物诱导gadd153mRNA表达显著增加(P<0.05),并与OTM有良好的相关性(源水r=0.864,P<0.05;氯化饮用水r=0.897,P<0.05)。结论源水和氯化饮用水有机提取物可诱导HepG2细胞DNA损伤,导致gadd153启动子区的激活,并进一步调控下游gadd153基因mRNA的表达。; 张荣郝巧玲石丹周宜开; 关键词：荧光素酶报告基因

双酚A对人胚肝细胞DNA损伤和修复功能的影响被引量：13: 2005年; [目的]研究双酚A(BisphenolA,BPA)对人肝L-02细胞DNA损伤修复功能的影响。[方法]分别以1、10、50、100μmol/LBPA和100μmol/LBPA+30μg/LVitC处理L-02细胞,比较处理和未处理的人胚肝L-02细胞在DNA损伤程度、切除修复鼠缺陷交叉互补蛋白1(ERCC1)、尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)、错配修复hMSH2基因(hMSH2)、DNA依赖蛋白激酶复合物(DNA-PKcs)及O6-甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)表达水平的差异。每组细胞数均为1×106个/ml。[结果]BPA处理后,彗星试验显示BPA在低剂量(10μmol/L)时即具有DNA损伤作用(P<0.05),随着剂量增大,DNA损伤效应增加。100μmol/LBPA+30μg/LVitC组DNA损伤效应降低,显示抗氧化剂VitC可减缓BPA所致的DNA损伤效应,氧化损伤是BPA所致DNA损伤的方式之一。5种DNA损伤修复酶表达水平在1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L剂量组依次降低,在100μmol/L、100μmol/L+VitC组依次增加,50μmol/L组各种DNA损伤修复酶表达水平最低。BPA50μmol/L组与溶剂对照比较,5种DNA损伤修复酶均有明显降低,差异具有显著性(P<0.05)。100μmol/L组的表达水平均高于50μmol/L组,100μmol/L+VitC组均高于100μmol/L组。除DNA-PKcs与hMSH2外,其他DNA损伤修复酶在100μmol/L+VitC组与溶剂对照组比较差异均无显著性(P>0.05)。[结论]BPA对L-02细胞具有氧化损伤作用,并可导致DNA损伤,多种DNA损伤修复酶参与修复双酚A所导致的DNA损伤。VitC可减缓双酚A的DNA损伤作用。; 张江华李华文石丹江明郝巧玲周宜开吕斌; 关键词：双酚A DNA损伤修复酶

双酚A对人胚肝细胞凋亡的影响被引量：1: 2005年; [目的]研究双酚A(BPA)对人胚肝L-02细胞的凋亡的影响。[方法]以MTT来分析不同浓度BPA对人胚肝L-02细胞的细胞存活率的影响;用流式细胞术分析不同浓度BPA对细胞凋亡的影响;通过RT-PCR分析BPA引起的生长抑制、DNA损伤基因GADD45、GADD153、GADD34表达水平的变化。[结果]BPA处理后,L-02细胞的生存率随着BPA浓度的增加而下降,在≥50μmol/L,细胞的存活率显著降低(P<0.01)。随着BPA浓度升高,细胞凋亡率增加,≥50μmol/L可显著升高L-02细胞的凋亡率(P<0.01)。生长抑制DNA损伤基因GADD45、GADD153.GADD34表达水平随着BPA浓度增加表达量也增加,100μmol/LBPA组显著高于正常对照组,但在100μmol/L,BPA+VitC组三种GADD基因表达量均稍降低。[结论]BPA对L-02细胞具有细胞毒性作用,可导致细胞凋亡率升高,与细胞生长调控和DNA损伤相关的GADD45、GADD153、GADD34基因表达升高,VitC可减缓BPA对DNA的损伤作用。; 石丹李华文张江华江明郝巧玲周宜开吕斌; 关键词：双酚A 凋亡

基于GADD153启动子的环境致癌物快速筛选系统研究被引量：2: 2006年; [目的]构建快速检测环境中痕量致癌物DNA损伤效应的重组人肝细胞株。[方法]构建含生长抑制与DNA损伤基因153(GADD153)启动子和萤光素酶报告基因的重组稳定转染人肝肿瘤HepG2细胞;发光检测不同致癌物对稳定转染细胞的DNA损伤效应;同时RT-PCR检测内源性GADD153mRNA的表达;彗星试验(Cometassay)检测DNA的损伤效应。[结果]稳定转染GADD153-LUC细胞株可检出多环芳烃、芳香胺、重金属、农药等已知环境致癌物以及实际水样中的含量。检测结果与彗星试验结果相比,大多数检测下限均低于彗星试验的检测限,其中对苯并芘、氯化镉和2-氨基芴的检测灵敏度分别高于彗星试验1000、300和100倍;对Aems试验不敏感的重金属、四氯化碳、氟化钠等重组细胞株具有较高的检测灵敏性。10μmol/L的氯化镉可诱导内源性GADD153mRNA和萤光素酶活性表达增加,相关分析表明两者具有良好的相关性(r2=0.9539)。[结论]重组细胞株GADD153-LUC细胞可快速检测环境中痕量污染物的DNA损伤效应。; 张荣石丹李华文郝巧玲吕斌周宜开; 关键词：萤光素酶报告基因重组细胞环境致癌物

双酚A对人胚肝细胞L-02的毒性作用研究被引量：12: 2005年; [目的]探讨双酚A对肝细胞L- 0 2的毒性作用及可能损伤机制。[方法] 1、10、5 0、10 0 μmol/L浓度的双酚A作用肝细胞L 0 2后,检测双酚A对肝细胞L-0 2的存活率、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量变化、细胞凋亡及凋亡相关基因P5 3、caspase3mRNA表达的影响。[结果]双酚A处理后,肝细胞L 0 2的存活率随着双酚A浓度的增加而下降,在≥5 0 μmol/L浓度,细胞的存活率显著降低(P <0 .0 1)。双酚A诱导肝细胞L -0 2中的SOD含量降低(P <0 .0 1) ,GSH和MDA含量在1μmol/L明显降低(P <0 .0 5 ) ,而后随着剂量的增加升高明显(P <0 0 1)。CAT水平先随着剂量的增加而升高到10 μmol/L的(10 5 .68±9.63 )U/g蛋白,而后随着剂量的增加而显著降低(P<0 .0 1)。≥5 0 μmol/L浓度的双酚A能明显诱导肝细胞L 0 2凋亡和P5 3、caspase3mRNA的表达升高(P <0 .0 1)。凋亡率从对照组的(8.16±0 .0 7) %上升到10 0 μmol/L的(17.2 0±1.2 5 ) % ,5 0、10 0 μmol/L浓度P5 3和caspase3mRNA表达分别是对照组的(1.42±0 .2 5 )、(1.65±0 .13 )、(1.41±0 .12 )和(1.77±0 .0 6)倍。[结论]双酚A对肝细胞L 0 2具有细胞毒性和氧化损伤作用,并能诱导肝细胞L 0 2发生凋亡和P5 3。; 李华文刘燕群石丹张江华郝巧玲吕斌周宜开; 关键词：L-02 双酚A 人胚肝细胞氧化损伤作用基因P53

胆固醇MIPs的合成及其免疫吸附性能评价和应用被引量：5: 2006年; 分别采用热和紫外光辐射引发合成胆固醇的非共价型M IPs,评价了不同M IPs的吸附特性,以合成的2种M IPs为免疫吸附剂,优化吸附和洗脱条件,对血液、蛋黄、牛奶等生物样品进行免疫吸附。结果表明,M IPs可有效萃取3种生物样品中的胆固醇,其中对血清的效果最好,蛋黄的效果最差。紫外光引发M IPs对胆固醇的回收率明显高于常规的C18柱萃取法。; 吕斌江明石丹张江华梅素容朱业湘郝巧玲周宜开; 关键词：胆固醇分子印迹聚合物固相萃取生物样品

分子印迹固相萃取生物样品中的胆固醇被引量：8: 2005年; 目的研究胆固醇分子印迹聚合物(MIPs)作为固相萃取(SPE)材料,固相萃取血液、蛋黄、牛奶等样品中胆固醇的效率。方法分别采用非共价热启动和紫外聚合方法合成胆固醇MIPs,功能单体为甲基丙烯酸(MAA),交联剂乙烯二醇二甲基丙烯酸酯(ethylene glycol dimethacrylate,EDMA),引发剂偶氮二异丁腈(2,2-azobisisobutyronitrile,AIBN)。分析合成的MIP的吸附特异性后,利用两种MIPs作为固相萃取的固定相,对血液、蛋黄、牛奶等样品进行固相萃取,并与常规C18固相萃取方法进行比较。结果胆固醇MIPs对胆固醇有特异性识别和结合能力,对与胆固醇结构类似的雌二醇、雌三醇的结合能力远远小于胆固醇。紫外聚合的MIPs吸附能力和吸附特异性均明显好于热启动MIPs。两种MIPs的固相萃取效率主要与上样和洗脱的溶剂密切相关,最佳固相萃取条件为:正己烷平衡后,正己烷上样,然后用正己烷加正乙烷∶甲苯(9∶1)淋洗除去非特异性结合的胆固醇,氯仿∶乙醇∶乙酸(3∶1∶1)洗脱特异性结合的胆固醇。回收率大于70%。结论胆固醇MIPs可特异性地识别和分离胆固醇,可用于固相萃取,快速分离不同生物样品中的胆固醇。; 吕斌石丹张江华江明石云戴康; 关键词：胆固醇分子印迹聚合物固相萃取生物样品

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石丹

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