王金菊
- 作品数：7 被引量：17H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Titin基因在骨髓间充质干细胞体外分化为心肌细胞过程中的干预研究被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨结构蛋白即肌联蛋白titin基因在骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)体外分化为心肌细胞过程中的作用及其对收缩蛋白基因β-肌球蛋白重链(β-myson heavy chain,β-MHC)和肌钙蛋白(ICardiac troponinI,cTnI)基因表达的影响。方法:无菌条件下冲洗Wistar大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓腔获得细胞,并进行体外纯化、扩增,后加入5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)进行诱导,分别在诱导后1天、4天、7天、14天在倒置显微镜下观察其形态变化,同时将携带有针对大鼠titinN2B区的siRNA重组质粒pSITITIN和针对人β-actin的siRNA重组质粒pSIACTIN转染入诱导后的MSCs,转染后24h,采用RT-PCR技术检测各时间点干扰前后结构蛋白titin基因和收缩蛋白β-MHC、cTnI基因在MSCs体外心肌细胞样分化过程中的动态表达。结果:1.诱导前titin、β-MHC、cTnI基因都有弱的表达,诱导后titin、β-MHC、cTnI基因的表达增强。2.重组质粒转染诱导后的MSCs,titin基因的表达减弱。3.titin基因的表达被干扰后,β-MHC基因的表达无明显变化,而cTnI基因的表达有减弱。结论:1.MSCs是一种具有心肌源性的种子细胞2.titin基因可能是MSCs向心肌细胞分化发育过程中有重要意义的基因,对cTnI基因的表达有调控作用。
- 王金菊田杰吕铁伟张小飞李扬朱静陈沅
- 关键词：骨髓间充质干细胞RNA干扰分化TITIN
- Gcn5基因shRNA的载体构建及其对干细胞分化中组蛋白乙酰化修饰的干扰作用被引量：7
- 2006年
- 目的构建组蛋白乙酰化酶转录辅激活酶Gcn5基因表达的干扰shRNA质粒并初步检测其性质,为研究干细胞诱导分化过程中乙酰化修饰所起的调控作用奠定基础。方法选择7条组蛋白乙酰化修饰关键因子Gcn5基因片段,用带有绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因的pGenesil-1作为载体,构建相应7个shRNA质粒。脂质体共转染5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导的大鼠间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs),利用乙酰化酶特异性抗体Gcn5(H75)对转染细胞进行免疫化学检测,荧光显微镜图象分析系统,记数细胞,在同视野中记数转染阳性细胞以及干扰的阳性细胞,初步计算出其转染率和干扰效率。结果通过限制性内切酶酶切和DNA序列分析,重组质粒shRNA与设计相吻合;免疫细胞化学检测,发现转染阴性对照HK的细胞显现“饱满核”,乙酰化作用蛋白表达明显;转染shRNA质粒的细胞呈现十分明显表达减弱的“淡染核”或不表达的“空洞核”,转染率和干扰效率分别为93.7%和46.6%。结论构建的shRNA质粒能够达到干扰乙酰化作用的目的,为深入研究乙酰化作用奠定了一定的试验基础。
- 朱静王应雄张晓萍王金菊张小飞田杰
- 关键词：乙酰化修饰RNA干扰质粒间充质干细胞
- 膜片箝技术应用于心肌疾病研究的进展
- 2004年
- 心肌疾病可引起心肌细胞肥大,功能性心肌细胞数量减少,成为不可逆的改变,而导致心力衰竭。心肌疾病的发病机制极为复杂,近年来研究发现,心力衰竭时心肌细胞的钾、钠、钙等离子通道的功能表现出特征性的变化,应用膜片箝技术探寻其心肌细胞膜的离子通道功能及其特点,有望进一步深入对心肌疾病的发病机制及其治疗方法的研究,已成为当今的一个热点。现就膜片箝技术的概念、产生、原理、方法以及在国内外心肌疾病发病机制研究中的应用现状及发展趋势作一综述。
- 王金菊田杰
- 关键词：离子通道心肌疾病
- 骨髓间充质干细胞体外分化为心肌样细胞过程中结构蛋白的发育被引量：2
- 2006年
- 目的探讨体外经5-氮杂胞苷诱导后的骨髓间充质干细胞(MSCs)分化成心肌样细胞过程中肌联蛋白在心肌结构蛋白发育过程中的作用。方法构建针对Wistar大鼠TITINN2B区设计的重组质粒pSITITIN,将其分别转染入体外培养7d的新生大鼠心肌细胞和经5-aza诱导后2周的MSCs中,免疫荧光检测肌联蛋白、MHC、肌动蛋白、cTnT的表达。结果重组质粒pSITITIN转染入正常心肌细胞后,肌联蛋白的表达减弱(P<0.001);转染入经5-aza处理的MSCs后,肌联蛋白、cTnT的表达减弱,MHC、肌动蛋白的表达无明显变化。结论MSCs可以被5-aza诱导分化成心肌样细胞,但分化程度不高,尚不具备完整的收缩结构基础,肌联蛋白对心肌结构蛋白发育过程有重要的意义。
- 张小飞陈沅田杰李杨王金菊朱静刘官信
- 关键词：骨髓间充质干细胞心肌细胞RNA干扰
- 抑制结构蛋白基因对BMMSCs体外向心肌细胞分化过程中收缩蛋白基因表达的影响
- 目的: 探讨结构蛋白即肌联蛋白 titin 基因在骨髓间充质干细胞/(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs/)体外向心肌细胞分化过程中的作用及其对收缩蛋白基因肌球蛋白重链的 ...
- 王金菊
- 关键词：骨髓间充质干细胞分化TITIN基因
- 文献传递
- 5-aza诱导干细胞经乙酰化特异RNAi后心肌细胞发育相关基因检测被引量：10
- 2006年
- 目的通过组蛋白乙酰化作用相关shRNA质粒转染5氮杂胞苷(5-azacytid ine,5-aza)诱导后不同时间段间充质干细胞心肌发育基因的检测,探讨乙酰化修饰在干细胞特化心肌样细胞转录调控中的作用。方法选择7条组蛋白乙酰化修饰关键因子Gcn5基因片段,用带有绿色荧光蛋白(green fluorescence prote in,GFP)基因的pGenesil-1作为载体,构建相应7个shRNA质粒。5-aza诱导大鼠间充质干细胞(m esenchym al stem cells,MSCs)24 h、2、4、7 d,分别用重组shRNA质粒脂质体共转染后提取RNA,逆转录PCR检测Gcn5基因和心肌早期发育基因GATA4的表达。结果经特异性限制性内切酶酶切分析和DNA序列测定,质粒构建与设计符合;各个时间段对照组Gcn5和GATA4均有表达,而实验组却无相应表达。结论通过实验提示封阻干细胞染色质组蛋白乙酰化可以达到抑制干细胞特化心肌细胞转录过程的作用,这为进一步研究组蛋白末端乙酰化修饰与干细胞分化调节机制奠定实验室基础。
- 朱静邓兵王金菊田杰王应雄
- 关键词：心肌细胞乙酰化修饰
- 大鼠MSCs诱导分化为心肌样细胞时离子通道基因的表达被引量：2
- 2007年
- 目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外向心肌样细胞分化过程中L-型钙通道(α1C)和瞬间外向钾通道(kv4.3)基因的表达。方法无菌条件下冲洗Wistar大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓腔获得MSCs,体外培养传代纯化,5-氮杂胞苷(5-aza)诱导24 h,显微镜下观察诱导前后形态变化,RT-PCR鉴定α1C和kv4.3基因的表达。结果kv4.3基因诱导前有弱的表达,诱导后1、4、7和14 d表达明显逐渐增强(P<0.05);α1C基因诱导前有较强的表达,诱导后1、4、7和14 d表达却明显逐渐减弱(P<0.05)。结论α1C和kv4.3基因在维持MSCs的诱导分化过程中发挥重要作用。
- 王金菊田杰吕铁伟张小飞朱静李扬陈沅
- 关键词：骨髓间充质干细胞5-氮杂胞苷离子通道
