王晓娟
- 作品数：7 被引量：27H指数：3
- 供职机构：南华大学医学院肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金衡阳市科技局资助项目湖南省研究生科研创新项目更多>>
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- PIG11与热休克蛋白60的相互作用介导肝癌HepG2细胞凋亡
- 2010年
- 为了探讨候选肝癌抑癌蛋白PIG11(p53-induced gene11,PIG11)诱导细胞凋亡的机制,首次在HepG2细胞株中鉴定了11个PIG11结合蛋白,热休克蛋白60(heat shock protein60,Hsp60)为其中之一.采用免疫共沉淀联合Western blot技术对Hsp60进行了验证.用Western blot检测其蛋白质表达,结果显示:pLXSN-PIG11-HepG2细胞中Hsp60蛋白表达较pLXSN-HepG2、HepG2细胞组下调(n=3,P<0.01).选取与Hsp60关系密切的Bax蛋白进行研究,Western blot结果显示PIG11高表达可引起胞浆Bax向线粒体转位.以上结果表明,PIG11蛋白能与HepG2细胞中的Hsp60结合,促进Hsp60-Bax的分离,引起Bax从胞液到线粒体转位,激活线粒体凋亡途径,这可能是其诱导HepG2细胞凋亡的主要机制之一.
- 刘小敏胡蓉梁晓秋王晓娟王燕张杨
- 关键词：HSP60HEPG2BAX
- PIG11高表达诱导HepG2细胞凋亡及其机制的初步探讨
- 2011年
- 目的利用已建立的稳定高表达PIG11蛋白的HepG2细胞株,探讨PIG11蛋白表达对HepG2细胞凋亡的影响,以及线粒体膜电位改变和Cyt C释放在凋亡过程中的作用。阐明PIG11诱导细胞凋亡的分子机制。方法 PI染色,流式检测细胞的凋亡情况。用Rh123标记,流式测定线粒体膜电位。Western Blot检测胞浆和线粒体中Cyt C的含量变化。结果流式细胞仪检测Rh123荧光强度,结果显示:pLXSN-PIG11-HepG2细胞荧光强度(5.4±0.15)低于HepG2细胞(14.7±0.56)和pLXSN-HepG2细胞(13.2±0.53)(P<0.01)。表明PIG11高表达诱导细胞凋亡过程中存在线粒体膜电位去极化。用CsA(10μmol/L)抑制各组细胞的线粒体通透性转移孔后,流式凋亡检测结果显示pLXSN-PIG11-HepG2细胞凋亡率明显降低。Western Blot检测发现存在线粒体Cyt C向胞浆释放。结论 PIG11高表达可诱导HepG2细胞凋亡,PIG11诱导细胞凋亡机制可能由线粒体膜电位改变及Cyt C向胞浆释放而介导。
- 郭彩霞王晓娟王燕梁晓秋
- 关键词：PIG11凋亡线粒体HEPG2细胞
- 新抑癌基因PIG11高表达HepG2细胞株的建立被引量：4
- 2007年
- 目的构建人PIG11逆转录病毒载体,建立高表达PIG11基因的HepG2细胞,为进一步研究PIG11基因在肝癌细胞中的功能提供一个理想的试验平台。方法将已有的pcDNA3.1/NT-GFP-PIG11质粒用PCR法扩增出PIG11片段,构建含人PIG11 cDNA的重组质粒pLXSN-PIG11。重组载体经PCR鉴定和DNA测序分析。将该重组质粒用lipofectamineTM2000转染包装细胞PA317,获得pLXSN-PIG11逆转录病毒。用病毒感染HepG2细胞,获得PIG11高表达的HepG2细胞株。结果获得384 bp人PIG11基因,测序证明PIG11cDNA编码序列与Genbank中报道的一致,转染PA317细胞后用病毒上清感染HepG2细胞,经RT-PCR检测发现HepG2细胞中PIG11 mRNA表达明显升高。结论成功构建了高表达PIG11基因的HepG2细胞株,为进一步研究其生物学行为奠定了基础。
- 吴艳王晓娟刘小敏曾春亚梁晓秋
- 关键词：逆转录病毒载体HEPG2细胞株
- 三氧化二砷诱导人肝癌HepG_2细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究被引量：8
- 2008年
- 目的研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,以及诱导细胞凋亡和对周期分布的影响。方法采用MTT法、DNA ladder检测、流式细胞术等方法检测As2O3对人肝癌HepG2细胞的生长抑制,诱导细胞凋亡以及对细胞周期分布的影响。结果MTT法显示:As2O3对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,且具有剂量和时间依赖性。12μmol/L As2O3作用HepG2细胞24、48、72 h后,DNA ladder检测,48、72 h均出现凋亡典型的DNA ladder条带;流式细胞仪分析显示:As2O3处理HepG2细胞24、48、72 h后,凋亡率分别为(9.74±1.22)%、(21.89±2.14)%、(42.72±0.83)%,均显著高于对照组细胞的凋亡率(0.98±0.11)%(P(0.01)。同时,流式细胞仪分析显示,As2O3对HepG2细胞有明显的S期和G2期阻滞作用。结论As2O3对人肝癌HepG2细胞S期和G1期阻滞并诱导细胞凋亡可能是其抗肿瘤的机制之一。
- 王晓娟刘小敏曾春亚张杨梁晓秋
- 关键词：三氧化二砷肝癌细胞周期
- HepG2细胞中PIG11相互作用蛋白质的初步分离与鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的探讨人肝细胞癌细胞系(HepG2)并初步鉴定候选肝癌抑癌蛋白肿瘤蛋白P53下游靶基因11号(PIG11)相互作用蛋白,确定PIG11的作用方式。方法课题组前期利用质粒pLXSN构建逆转录病毒载体,转染细胞后建立起PIG11高表达HepG2细胞株。将HepG2分为HepG2对照组,空载体HepG2组和PIG11高表达HepG2组分别培养,流式细胞术检测细胞凋亡。采用免疫共沉淀富集HepG2细胞中PIG11结合蛋白,切取PIG11结合蛋白条带,胶内酶解后进行电喷雾串联质谱得到肽序列标签,通过数据库查询蛋白。结果PIG11蛋白高表达组凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。串联质谱后数据库查询鉴定出11个蛋白,分别是热休克蛋白家族中的HSP60,KH型剪接调节蛋白(KSRP)、脑酸溶性蛋白BASP1、蛋白水解诱导因子(PIF/DCD)、Y染色体RNA结合蛋白、碳酸酐酶、白蛋白以及骨架蛋白中的波形蛋白、α、β-微管蛋白、肌动蛋白。结论PIG11蛋白高表达对HepG2具有诱导凋亡作用;初步鉴定出11个PIG11结合蛋白,为进一步阐明PIG11蛋白的作用机制提供线索。
- 胡蓉王晓娟王燕梁晓秋
- 关键词：PIG11HEPG2免疫共沉淀电喷雾串联质谱
- PIG11基因沉默与HepG2细胞凋亡关系的研究被引量：3
- 2010年
- 目的:构建人PIG11的miRNA表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR,建立PIG11蛋白稳定低表达的HepG2细胞株,联合PIG11蛋白稳定高表达HepG2细胞株,探讨PIG11基因表达对HepG2细胞凋亡的影响。方法:构建miRNA干扰载体,通过脂质体转染HepG2细胞,建立PIG11蛋白稳定低表达的HepG2细胞,与前期已建立的PIG11蛋白稳定高表达的HepG2细胞模型作对比,利用PI染色流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,蛋白质印迹法检测Caspase-3蛋白、Caspase-9蛋白的表达情况。结果:成功构建人PIG11的miRNA表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR,转染后获得PIG11基因沉默的HepG2细胞株。PI染色流式细胞仪检测结果显示,HepG2细胞、miR-PIG11-HepG2细胞、miR-HepG2细胞、pLXSN-PIG11-HepG2细胞和pLXSN-HepG2细胞的凋亡率分别为(5.72±0.81)%、(1.34±0.71)%、(5.10±0.40)%、(34.83±2.29)%和(5.34±0.60)%。PIG11高表达的pLXSN-PIG-11-HepG2细胞组凋亡率比其他组增高(P<0.01),PIG11低表达的miR-PIG11-HepG2细胞组凋亡率降低(P<0.01)。蛋白质印迹法检测结果显示,PIG11高表达的HepG2细胞Caspase-3及Caspase-9蛋白表达均上调(P<0.01),PIG11低表达的HepG2细胞Caspase-3及Caspase-9蛋白的表达下调(P<0.01)。结论:构建人PIG11的干扰载体成功获得PIG11蛋白稳定低表达的HepG2细胞株,PI染色流式细胞仪检测及Caspase-3的检测证实PIG11对HepG2细胞凋亡起负调控作用,Caspase-9检测显示PIG11诱导HepG2细胞凋亡可能通过线粒体途径。
- 王燕胡蓉梁晓秋王晓娟郭彩霞
- 关键词：PIG11转染细胞凋亡流式细胞术
- 活性氧改变在PIG11高表达诱导人肝癌HepG_2细胞凋亡中的作用被引量：14
- 2009年
- 目的:探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)改变在PIG11蛋白高表达诱导人肝癌HepG2细胞凋亡中的作用。方法:本研究采用2’,7’-二氯氢化荧光素二脂(2’,7’-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)荧光探针标记PIG11蛋白高表达肝癌细胞株pLXSN-PIG11-HepG2细胞内ROS,用N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcystine,NAC)清除细胞内ROS后,FCM检测细胞内ROS水平的变化以及细胞凋亡率。结果:FCM测定结果显示,pLXSN-PIG11-HepG2细胞内ROS水平(15.60±0.92)明显高于pLXSN-HepG2细胞(4.90±0.70)和HepG2细胞(5.37±1.17),差异有统计学意义(P<0.01)。NAC(10 mmol/L)清除细胞内ROS后,FCM检测显示pLXSN-PIG11-HepG2细胞凋亡率较未清除前明显降低(P<0.01)。结论:PIG11高表达诱导细胞凋亡的机制可能与细胞内ROS水平升高有关。
- 刘小敏王晓娟张杨吴艳梁晓秋
- 关键词：活性氧细胞凋亡
