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小鼠肾脏特异性miR-29c表达载体的构建与鉴定被引量：1: 2015年; 目的构建载体实现miR-29c在肾脏组织的特异性表达。方法分别以质粒pc DNA 3.1(+)和小鼠基因组DNA为模板,扩增CMV增强子序列和肾脏特异性钙黏着素蛋白KSP-cadherin启动子序列;将连接成的单一片段酶切后替换p CAGGS载体上的CAG启动子构成目的载体p CMV-KSP。将GFP编码区序列或小鼠miR-29c前体及两侧序列克隆到构建的载体上观察转染后目的基因的表达。结果从相应的模板上扩增出的序列经验证后连接到了p CAGGS载体上,转染细胞后在荧光显微镜下观察到KSP启动子调控下的GFP在MDCK中表达,而在NIH-3T3细胞中仅见微弱荧光。p CMV-KSP-p CAGGS-miR-29c载体较对照载体在转染人胚肾293T细胞24 h后,成熟miR-29c的表达显著升高,其靶基因bcl-2表达相应降低。结论构建KSP启动子调控miR-29c表达的载体,为构建肾脏特异性表达miR-29c转基因小鼠,进一步研究miR-29c在肾移植后的各种病理过程中的作用奠定了基础。; 黄海燕肖漓何秀云许晓光樊文梅魏玉香马锡慧孔祥瑞韩永高钰王新颖石炳毅; 关键词：转录启动子肾移植微RNAS 钙黏着糖蛋白类

肾移植术后淋巴细胞亚群的变化与移植肾功能恢复状况分析被引量：4: 2015年; 目的分析肾移植术后淋巴细胞亚群的变化与移植肾功能恢复状况的关系。方法收集2013年9月—2014年3月收治的40例术后2周未发生感染或排斥反应的肾移植受者,术后7 d血肌酐值仍>400μmol/L的病例为延迟恢复组(n=12),其余为功能稳定组(n=28)。分别采术前、术后3、7、14 d静脉血,监测T、B淋巴细胞亚群百分比及绝对计数。结果 T、B淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK)百分比及绝对计数在功能稳定组与延迟恢复组中有不完全相同的变化趋势;CD4+/CD8+比值变化也不明显。与功能稳定组相比,延迟恢复组术后3 d外周血CD3+百分比明显下降,NK百分比明显升高(P<0.05);术后7 d CD3+和CD4+百分比及绝对计数均明显下降(P<0.05);术后14 d CD4+和CD4+/CD8+比值明显下降(P<0.05)。结论监测肾移植受者T、B淋巴细胞亚群百分比及绝对计数有助于指导免疫抑制药物的合理应用。; 高钰肖漓何秀云黄海燕樊文梅魏玉香马锡慧孔祥瑞韩永许晓光王新颖石炳毅; 关键词：肾移植 B淋巴细胞亚群 T淋巴细胞亚群免疫学

移植肾急性抗体介导排斥反应中半乳糖凝集素7的表达被引量：1: 2014年; 背景:半乳糖凝集素家族蛋白在移植免疫调节中的作用已被提出,目前尚未有半乳糖凝集素7检测对于肾移植后围手术期移植肾功能不全的辅助诊断,对肾移植受者而言,监测半乳糖凝集素7可能及早发现移植后肾功能异常,为临床治疗争取时间。目的:检测半乳糖凝集素7在移植肾急性抗体介导性排斥反应中的表达。方法:选取同种异体肾移植后行移植肾穿刺活检诊断为急性抗体介导性排斥反应的患者27例,同时选取同期移植后肾病理穿刺经诊断为正常的患者10例做对照。应用免疫组织化学染色法检测半乳糖凝集素7在组织中的表达情况、应用Western Blot法检测各组血清半乳糖凝集素7蛋白表达水平差异。结果与结论:免疫组织化学正常组光镜下半乳糖凝集素7表达于近曲小管上皮细胞表面微绒毛,肾小球、远曲小管、集合管和静脉未见其表达;急性抗体介导的体液性排斥反应组光镜下肾小动脉内膜水肿,管壁纤维素样坏死,肾小球肾小管淋巴细胞和单核细胞浸润,半乳糖凝集素7仅见于近曲小管上皮细胞表面微绒毛,同时动脉平滑肌也有表达,阳性度较高。急性抗体介导的体液性排斥反应组半乳糖凝集素7阳性细胞计数显著高于正常对照组(P<0.01)。Western Blot检测结果,急性抗体介导的体液性排斥反应组血清半乳糖凝集素7的表达高于正常对照组(P<0.05)。结果说明,移植肾穿刺病理活检安全可靠,对患者及移植肾无不良影响,半乳糖凝集素7检测对于肾移植后围手术期移植肾功能不全的辅助诊断具有重要的指导意义。; 韩永郭晖蔡明钱叶勇李州利周文强王强许晓光黄海燕肖漓王新颖石炳毅; 关键词：免疫印记

液态芯片技术检测抗人类白细胞抗原抗体抗主要组织相容性Ⅰ类相关链A位点抗体在移植肾围手术期急性抗体介导性排斥反应中的应用: 2014年; 目的探讨液态芯片技术(Luminex)检测移植肾受者围手术期发生急性抗体介导性排斥反应者抗人类白细胞抗原(HLA)抗体、抗主要组织相容性Ⅰ类相关链A位点(MICA)抗体水平与影响。方法选取我院器官移植研究所2008年1月至2013年6月肾移植术后围手术期患者106例为研究对象,采用Luminex技术检测接受同种异体肾移植手术并明确病理诊断肾围手术期急性抗体介导性排斥反应患者血清中抗HLA抗体、抗MICA抗体,并同步检测血肌酐、尿量及移植肾超声等临床指标。结果参照Banff 2007标准组织病理学诊断移植肾超急性排斥反应2例,急性抗体介导性排斥反应15例,同时应用Luminex方法检测抗HLA抗体、抗MICA抗体水平,HLA抗体检测结果15例阳性,阳性率为88%(15/17),检出PRAⅠ类和Ⅱ类阳性率分别为47%(7/15)和53%(8/15);MICA抗体2例阳性,阳性率为12%(2/17),其余89例其他病理类型检测未见抗HLA抗体、MICA抗体阳性,移植肾穿刺病理结果显示HLA抗体、抗MICA抗体阳性患者C4d沉积均为阳性。结论抗HLA抗体、抗MICA抗体可预测围手术期急性抗体介导性排斥反应发生及治疗效果,对于及时诊断及治疗排斥反应提供了一个重要指标,可影响移植肾的长期存活。; 周文强石炳毅韩永钱叶勇蔡明肖漓王强许晓光黄海燕王新颖匡国杰武洪文; 关键词：移植物排斥 HLA抗体 MICA抗体

移植肾急性排斥组织中C4d CD3 CD4 CD8 CD138表达的初步研究被引量：1: 2014年; 目的分析探讨移植肾急性排斥组织中C4d、CD3、CD4、CD8、CD138的表达。方法收集我院2010年3月至2013年10月经病理学确认为急性排斥反应移植肾穿刺标本136例,依据Banff 2007标准将研究对象分为5组,利用免疫组织化学染色计数测定各组C4d、CD3、CD4、CD8、CD138阳性表达情况并计算CD4/CD8值。结果急性抗体介导性排斥反应组C4d染色均为阳性,急性T细胞介导性排斥反应组C4d染色均为阴性;CD3、CD4、CD8阳性细胞数及CD4+/CD8+值急性T细胞介导性排斥反应组高于急性抗体介导性排斥反应组,差异有统计学意义(P<0.01),急性T细胞性排斥Ⅰ、Ⅱ级组高于疑为急性T细胞介导性排斥组,差异有统计学意义(P<0.01),急性T细胞性排斥Ⅱ级组高于急性T细胞性排斥Ⅰ级组,差异具有统计学意义(P<0.05),急性抗体介导性排斥反应Ⅰ级组与急性抗体介导性排斥反应Ⅱ级组差异无统计学意义(P>0.05);CD138阳性细胞急性抗体介导性排斥反应组大于急性T细胞介导性排斥反应组,差异有统计学意义(P<0.01),急性抗体介导性排斥反应Ⅱ级组高于急性抗体介导性排斥反应Ⅰ级组,差异具有统计学意义(P<0.05),急性T细胞介导性排斥反应3组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 C4d的表达和CD3、CD4、CD8、CD138阳性细胞数以及CD4+/CD8+值与肾移植急性排斥反应的类型及反应程度密切相关,检测C4d、CD3、CD4、CD8、CD138在移植肾急性排斥组织中表达情况,对于探讨移植肾早期急性排斥反应发生具有重要意义。; 韩永郭晖蔡明钱叶勇周文强肖漓王强许晓光黄海燕王新颖袁建徐燕杰石炳毅; 关键词：移植物排斥

急性排斥反应发生与恢复后PBMC中microRNA表达谱变化的研究: 急性排斥反应是同种异体肾脏移植后的常见并发症。排斥的强度和对治疗的反应性对移植物的长期存活有直接的影响。急性排斥反应发生时PBMC的活化状态可能会影响疾病的转归。单个核细胞被募集到移植物中是细胞性排斥反应的经典标志物。与...; 黄海燕许晓光韩永王新颖蔡明钱叶勇石炳毅; 关键词：急性排斥反应外周血单个核细胞 MICRORNA 表达谱; 文献传递

趋化性细胞因子在肾移植排斥反应中的临床应用价值被引量：3: 2014年; 目的探讨趋化性细胞因子在肾移植排斥反应中的临床应用价值。方法选取2011年1-12月在解放军第309医院全军器官移植研究所进行同种异体肾移植术的患者21例[分为急性排斥反应(AR)组(n=11)、功能稳定组(F组,n=10)]和健康志愿者10例(C组,n=10)。分别于术前1d,术后第1、7、14、28天以及排斥反应发生时应用流式微球捕获技术(CBA)检测患者血浆中单核趋化蛋白-1(MCP-1)、调节激活正常T细胞表达分泌因子(RNATES)、中性粒细胞激活蛋白-1(NAP-1/IL-8)、IFN-γ诱生单核因子(MIG)和IFN-γ诱导蛋白-10(IP-10)的表达情况;并采用Spearman相关分析趋化细胞因子与肌酐水平的相关性。结果与健康志愿组相比,肾移植患者术前MCP-1、MIG、IP-10水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);IL-8和RANTES无明显差异(P>0.05)。AR发生时,AR组患者的MCP-1、IL-8、MIG、IP-10与F组比较明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而两组RANTES差异无统计学意义(P>0.05)。趋化性细胞因子与肌酐的相关性分析发现,IL-8和MIG与肌酐均呈正相关[r分别为0.4896、0.6245(P<0.01)],MCP-1、RNATES、IP-10与肌酐无显著相关性(P>0.05)。结论趋化性细胞因子在肾移植排斥反应中发挥重要作用,肾移植术后应监测其变化情况。; 肖漓何秀云周文强樊文梅魏玉香王新颖高钰马锡慧孔祥瑞韩永许晓光黄海燕石炳毅; 关键词：炎症趋化因子类肾移植移植物排斥

Luminex检测抗HLA抗体、抗MICA抗体在移植肾围手术期急性抗体介导性排斥反应中的应用: 目的探讨Luminex 检测移植肾受者围手术期发生急性抗体介导性排斥反应抗HLA 抗体、抗MICA抗体水平与影响.方法选取我院器官移植研究所2008 年1 月至2013 年6 月30 日肾移植术后围手术期患者106 ...; 韩永石炳毅钱叶勇蔡明肖漓王强许晓光黄海燕王新颖匡国杰武洪文

应用流式细胞微球捕获技术检测肾移植受者外周血细胞因子的临床价值: 目的通过动态观察肾移植受者外周血th1/th2/th17类细胞因子表达规律,分析各类细胞因子在肾移植受者术前后、排斥反应发生前后的含量变化与临床的相关性。方法本研究观察2010年1月至2013年1月间在我所进行肾移植术的...; 肖漓马锡慧孔祥瑞王新颖石炳毅何秀云周文强樊文梅魏玉香黄海燕许晓光韩永高钰

miR-29c通过转录后调控pdgfrb在肾脏纤维化中的作用研究: 目的:肾脏纤维化是肾脏移植慢性排斥反应的重要病理表现之一。既往的研究结果证实miR-29家族分子在包括肾脏、肺脏、肝脏等多器官纤维化中发挥了重要的调节作用。本课题组的前期研究提示:miR-29c与PDGFBB及其受体PD...; 黄海燕许晓光韩永王新颖孔祥瑞肖漓石炳毅; 关键词：肾脏纤维化血小板源性生长因子受体; 文献传递

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