梁继超 作品数:15 被引量:93 H指数:6 供职机构: 湖北大学 更多>> 发文基金: 湖北省高等学校优秀中青年科技创新团队计划项目 国家自然科学基金 湖北省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 更多>>
基于网络药理学和分子对接探讨泽泻三萜抗肝纤维化的作用机制 被引量:7 2022年 目的基于网络药理学和分子对接方法探究泽泻三萜成分抗肝纤维化的潜在作用机制。方法根据数据库筛选及文献调研选取以泽泻三萜中8种活性成分为研究对象,利用Swiss Target Prediction网络平台预测其作用靶点;通过GeneCards、OMIM数据库获取与肝纤维化有关的靶点,借助Cytoscape 3.7.2软件构建“活性成分-抗肝纤维化靶点”网络图,并通过度值筛选核心成分;使用String平台进行蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)分析,结合Cytoscape 3.7.2软件构建PPI网络图,通过度值、节点紧密度、节点介度筛选关键靶点;采用DAVID数据库对泽泻三萜抗肝纤维化的作用靶点进行基因本体(gene ontology,GO)功能和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析;使用AutoDock软件对核心成分与关键靶点进行分子对接;考察乙酰泽泻醇C对油酸和棕榈酸诱导的小鼠正常肝细胞(NCTC-1469)上清液一氧化氮(nitric oxide,NO)水平的影响。结果筛选出泽泻三萜中8种活性成分包括24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇B、乙酰泽泻醇B、16β-甲氧基乙酰泽泻醇B、泽泻醇C、乙酰泽泻醇C、泽泻内酯D、25-甲氧基泽泻醇F,预测得到35个抗肝纤维化靶点,4个核心成分包括乙酰泽泻醇B、16β-甲氧基乙酰泽泻醇B、泽泻醇C、乙酰泽泻醇C,4个关键靶点包括蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PRKCA)、丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)、磷酯酰肌醇-3激酶催化亚基γ(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunitγ,PIK3CG)、MAPK8;基因富集分析得到GO功能条目142个、通路69条(P<0.05);分子对接结果显示,核心成分与关键靶点均有较强的潜在结合能力;网络药理学分析显示,泽泻三萜成分主要通过作用于脂多糖反应、凋亡等生物过程及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI 江雯 叶晨 胡熳 刘钰偲 张艳 梁继超 陈勇关键词:肝纤维化 铅导致C2C12成肌细胞的氧化应激和凋亡损伤 被引量:3 2015年 通过细胞毒性实验、氧化应激检测和凋亡检测,研究醋酸铅(1ead acetate)对C2C12成肌细胞的毒性机理,结果表明,醋酸铅(10~200μmol/L)呈剂量依赖模式显著增加C2C12成肌细胞的乳酸脱氢酶(LDH)释放量、上调活性氧(ROS)、下调过氧化氢酶(CAT)活力,导致胞内DNA损伤严重,流式细胞仪检测细胞周期结果显示高剂量醋酸铅处理细胞48h后,出现凋亡峰;蛋白印迹结果显示,与正常组相比,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调、促凋亡蛋白Bax表达上调、Caspase-3酶活力上调,综上结果表明醋酸铅导致的细胞毒性可能与氧化应激和凋亡损伤相关. 王秋菊 吴逍 梁继超 刘亚云 陈勇关键词:醋酸铅 氧化应激 凋亡 MiR-22重组腺病毒的构建及对HepG2细胞葡萄糖摄取的影响 2020年 文中构建了miR-22重组腺病毒Ad-miR-22,分析了其对HepG2细胞胰岛素信号通路及葡萄糖摄取的抑制作用。通过PCR方法,扩增了miR-22的前体及侧翼序列,酶切后克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建穿梭质粒pAdT-22,经PCR及测序鉴定。穿梭质粒经PmeⅠ线性化后,直接转化含有腺病毒骨架载体的感受态细胞BJ5183,产生重组腺病毒质粒Ad-miR-22,最后经PacⅠ线性化后转染包装细胞系293A。重组腺病毒经过3轮扩增后感染HepG2细胞,通过荧光定量PCR检测miR-22表达水平。通过葡萄糖摄取实验观察Ad-miR-22对HepG2细胞葡萄糖摄取的影响。采用Western blotting检测Ad-miR-22对HepG2细胞SIRT1在蛋白质水平的表达及GSK-3β磷酸化水平的影响。采用荧光定量PCR检测miR-22对PEPCK及G6Pase等基因在mRNA水平表达的影响。结果表明,重组腺病毒Ad-miR-22感染显著增加HepG2细胞miR-22表达水平。此外,Ad-miR-22显著抑制胰岛素诱导的HepG2葡萄糖摄取,并通过下调GSK-3β磷酸化抑制胰岛素信号通路的激活。Ad-miR-22反转胰岛素对糖异生关键酶表达的抑制作用,并下调SIRT1基因在蛋白质水平的表达。综上所述,构建了miR-22的重组腺病毒,发现其显著增加糖异生,抑制HepG2细胞葡萄糖摄取,该作用可能与miR-22调节SIRT1在蛋白质水平的表达有关。 廖立红 袁文彬 陈勇 梁继超关键词:重组腺病毒 葡萄糖摄取 糖异生 基因治疗 SIRT1 厚朴酚对高脂饲料-STZ 诱导的糖尿病大鼠血糖血脂及肝脏氧化应激损伤的影响 (英文) 被引量:11 2014年 本文研究了厚朴酚对高脂饲料-链脲佐菌素诱导的2型糖尿病大鼠高血糖、高血脂、肝脏氧化应激和CYP2E1活性的影响。与糖尿病模型组相比,连续给予厚朴酚(25、50和100 mg·kg-1·d-1,灌胃)10周后,其血糖、血脂(TC、TG和LDL-C)及肝脏CYP2E1活性和MDA含量显著降低,口服糖耐量和肝脏抗氧化酶(CAT和GSH-Px)活性显著增加。研究结果不仅证明厚朴酚对高脂饲料-链脲佐菌素诱导的2型糖尿病大鼠的高血糖、高血脂、肝脏氧化应激损伤有明显治疗作用,而且厚朴酚对糖尿病大鼠肝脏CYP2E1活性的抑制作用可能是其拮抗糖尿病所致肝脏氧化损伤及胰岛素抵抗的重要机制之一。 王俊俊 赵容 梁继超 陈勇关键词:厚朴酚 抗糖尿病作用 葛根素影响自发性高血压大鼠血压的机制 被引量:12 2010年 目的:研究葛根素影响自发性高血压大鼠血压的分子机制。方法:12只成年自发性高血压大鼠(SHR)随机分为给药组和对照组,给药组灌胃葛根素(36mg.kg.d-1),对照组灌胃等量去离子水。每周测血压1次,4周后处死动物,分别检测肾脏、肝脏和血管中内皮素-1(ET-1)、一氧化氮合酶(NOS)、细胞色素P450 4A1(CYP4A1)和血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT-1)mRNA和蛋白质的表达量,检测血浆中血管紧张素Ⅱ和醛固酮含量。结果:葛根素给药4周后,可显著上调肾脏、肝脏和血管中eNOS mR-NA的表达,下调肝脏中ET-1的蛋白含量;显著上调肾脏和血管中CYP4A1 mRNA和蛋白水平,以及AT-1 mRNA水平。结论:葛根素可能主要通过上调eNOS和下调ET-1的表达,降低SHR的血压;通过激活肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)和花生四烯酸羟化代谢途径,拮抗降压作用。 吴文华 张继业 王宇 梁继超 韩凤梅 陈勇关键词:葛根素 自发性高血压大鼠 内皮素-1 肾素-血管紧张素-醛固酮系统 “一流本科教育”背景下生物制药混合式教学模式的改革探索 被引量:1 2023年 近年来生物制药产业飞速发展,对高素质、创新应用型人才需求日益迫切。在“一流本科教育”背景下,进行生物制药课程混合式教学模式的改革探索,对培养适应产业发展的专业人才具有重要意义。湖北大学生物制药课程基于专属在线课程(small private online course,SPOC)和超星平台开展混合式教学,瞄准一流课程“两性一度(高阶性、创新性和挑战度)”的要求,围绕课程目标的达成,夯实课前、课中和课后3个阶段,积极创新教学方法,并有机融入典型案例。此外,通过加强课程的形成性评价,来提升考评分辨率;通过调研学生的学习行为,并利用边际效用曲线分析小组活动特点,来指导学生如何提高学习效率;结合职业生涯规划,给予学生个性化学习指导。生物制药课程混合式教学模式的改革取得了明显成效,如学生满意度、学生创新创业能力和课程建设水平均得到提升,以期为相关课程教学改革和研究工作提供有益借鉴。 蔡文涛 雷骏雨 董衍明 梁继超 赵晶 李路军 陈勇关键词:生物技术制药 教学改革 miR-29b2c重组腺病毒的构建及对胃癌细胞增殖和迁移的影响 被引量:1 2017年 构建了miR-29b2c重组腺病毒Ad-miR-29b2c,考察了其对HGC-27、MGC-803胃癌细胞增殖及迁移的抑制作用。采用PCR从基因组扩增miR-29b2c片段,并克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建穿梭质粒pAdT-29b2c,经酶切及测序鉴定。穿梭质粒经PmeⅠ线性化后与腺病毒骨架载体共转化BJ5183感受态,产生重组腺病毒质粒Ad-miR-29b2c,再经PacⅠ线性化后转染293A细胞进行包装。重组腺病毒扩增后感染HGC-27细胞,通过MTT及细胞迁移实验观察Ad-miR-29b2c对HGC-27、MGC-803细胞增殖及迁移的影响。采用Western blotting检测Ad-miR-29b2c对HGC-27、MGC-803细胞δ-catenin蛋白表达的影响。酶切、测序及荧光定量PCR结果表明重组腺病毒构建成功,miR-29b及miR-29c在HGC-27细胞过表达。MTT实验表明Ad-miR-29b2c能显著抑制HGC-27、MGC-803细胞增殖。细胞迁移实验表明Ad-miR-29b2c能显著抑制HGC-27、MGC-803细胞迁移。此外,Ad-miR-29b2c能显著降低HGC-27、MGC-803细胞δ-catenin蛋白表达水平。综上所述,构建了miR-29b2c的重组腺病毒,并发现其可以抑制胃癌细胞HGC-27和MGC-803的增殖及迁移,该作用可能与miR-29抑制HGC-27、MGC-803细胞δ-catenin蛋白表达有关。 骆爱玲 杜春园 赵雪梅 梁继超 陈勇关键词:MIR-29 胃癌 重组腺病毒 基因治疗 基于网络药理学对刺五加总苷治疗2型糖尿病作用机制研究 被引量:10 2019年 本文以刺五加总苷中的7种主要成分为研究对象,利用网络药理学方法对刺五加总苷治疗2型糖尿病(diabetes mellitus type 2)的作用机制进行探讨。首先运用SwissTargetPrediction、GeneCard、String平台在线预测这7种成分与2型糖尿病相关的潜在靶点共35个。然后使用Cytoscape3.6.1构建"成分-靶点"网络图,并利用内置的Networkanalyzer工具进行拓扑学分析。在DAVID6.8平台上进行基因功能(gene ontology,GO)富集分析和KEGG通路富集分析,根据富集结果构建"成分-靶点-通路"网络图。并筛选出可能主要作用于2型糖尿病的成分作为核心成分,然后将核心成分与关键疾病靶蛋白进行分子对接验证,并深入分析刺五加总苷作用的潜在机制。结果经筛选,共有8条与2型糖尿病相关的重要通路。本研究表明,刺五加苷A、刺五加苷D、刺五加苷E和芝麻素在胰岛素抵抗、细胞凋亡和炎症相关通路起关键作用。刺五加总苷可能主要通过作用信号转导子和转录激活子(signal transducer and activator of transcription,STATs)、非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶(polyclonal antibody to protein tyrosine phosphatase,non receptor type,PTPN)1、PTPN2、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p38蛋白等靶点,通过多通路的方式共同作用,起到对2型糖尿病的综合治疗效果,并为今后的刺五加总苷作为抗2型糖尿病药物的开发奠定了基础。 袁文彬 韦艳美 陈勇 梁继超关键词:网络药理学 刺五加总苷 水飞蓟黄酮提取物治疗非酒精性脂肪肝病的网络药理学研究 被引量:1 2022年 基于网络药理学及分子对接探讨水飞蓟中主要黄酮类活性成分对非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver diseases,NAFLD)的治疗作用及分子机制。通过TCMSP、PubChem数据库及文献调研确定水飞蓟中9种黄酮成分为研究对象,借助SwissTargetPrediction、GeneCards、Venny 2.1.0平台预测这9种成分与NAFLD之间的潜在治疗靶点。利用String平台和Cytoscape软件对潜在靶点进行蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络分析,基于DAVID 6.8数据库对潜在靶点进行GO和KEGG通路富集分析,使用AutoDock软件模拟分子对接验证。体外实验选取"成分-靶点-通路"网络图中度值较大的组分,以L02细胞为研究对象建立脂质堆积模型并给药处理,根据油红O染色结果来衡量药物分子对脂代谢的积极作用。结果筛选得到水飞蓟主要黄酮成分治疗NAFLD的作用靶点共24个,通过KEGG富集分析筛选得到与NAFLD进程密切相关通路,包括磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)通路、2型糖尿病通路、肿瘤坏死因子(TNF)通路及胰岛素抵抗通路等。分子对接结果表明,这些核心成分均能与靶蛋白自发进行结合,其中水飞木质灵有较好的结合能力。体外实验表明,异水飞蓟宾A、异水飞蓟宾B、水飞蓟宁、水飞蓟亭能减少细胞内的脂质堆积,且异水飞蓟宾B构型效果优于A构型。综上,本研究从网络药理学角度验证水飞蓟黄酮提取物以多通路、多靶点、多过程改善NAFLD相关表型,从而为水飞蓟黄酮类活性成分治疗NAFLD提供支持。 叶晨 江雯 胡熳 张艳 刘钰偲 梁继超 陈勇关键词:水飞蓟 非酒精性脂肪肝病 网络药理学 水飞蓟宾 脉君安片的降压抵抗机制研究 被引量:4 2010年 目的:研究脉君安片对自发性高血压大鼠(SHR)细胞色素P450羟化酶和肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的影响,探讨其降压抵抗机制。方法:12只成年SHR随机分为给药组和对照组,给药组灌胃模拟脉君安片(氢氯噻嗪10mg.kg-1.d-1,葛根素36mg.kg-1.d-1,钩藤总碱122mg.kg-1.d-1),对照组灌胃等量去离子水。每周测血压1次,4wk后处死动物。用放射免疫法检测血浆中血管紧张素Ⅱ和醛固酮含量,实时荧光定量PCR测定组织中细胞色素P450 4A1(CYP4A1)和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)mRNA的表达,western blot法测定组织中细胞色素P450 4A1(CYP4A1)蛋白的表达量。结果:与对照组相比,用药4wk时给药组不仅降压效果显著,而且显著上调CYP4A1 mRNA和蛋白水平、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)mRNA水平、血浆中血管紧张素Ⅱ和醛固酮的含量。结论:脉君安片在降低血压的同时,激活了肾素-血管紧张素-醛固酮系统和花生四烯酸羟化代谢途径,对降压产生了抵抗作用。 王宇 张继业 梁继超 韩凤梅 陈勇关键词:脉君安片 自发性高血压大鼠 肾素-血管紧张素-醛固酮系统