杨玉芳
- 作品数：10 被引量：17H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划军队医药卫生科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Plunc序列启动子转基因小鼠模型的建立被引量：1
- 2004年
- 目的利用携带有鼻咽组织相对特异性启动子plunc构建的载体建立转基因动物模型。方法将plunc-EGFP质粒用XhoⅠ酶切线性化,胶回收线性化片段,稀释浓度4 μg/ml。采用显微注射法将外源基因注射入小鼠受精卵细胞内。结果产13只小鼠。PCR检测基因整合,其中阳性12只,阳性率92.30%;Southern blot检测阳性3只,阳性率23%。结论鼻咽组织相对特异性启动子plunc可有效地将外源基因整合入小鼠体内。
- 杨玉芳丁彦青张玲梁莉
- 关键词：启动子转基因小鼠动物模型鼻咽肿瘤病因
- 转基因小鼠技术在肿瘤研究中的应用与进展被引量：2
- 2004年
- 杨玉芳丁彦青
- 关键词：转基因小鼠肿瘤瘤基因抑瘤基因显微注射法精子载体法
- 人大肠癌转移相关基因片段的筛选和鉴定被引量：3
- 2004年
- 目的:初步筛选和鉴定大肠癌转移相关基因,阐述大肠癌转移的分子机制. 方法:利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),在一对来自同一亲本、转移能力不同的人大肠癌细胞株SW620和SW480间,已成功构建了人大肠癌转移促进基因和转移抑制基因的两个cDNA消减文库.从以上两个文库中随机挑取约200个菌液PCR片段,利用Differential screening(DS)方法筛选真正差异表达的cDNA片段,之后通过Northern blot对部分差异cDNA 片段的DS筛选结果进行验证.最后对筛选出的差异cDNA 片段进行测序和同源检索,分析其性质并初步探讨其在大肠癌中转移中的可能机制. 结果:约200个菌液PCR片段经过DS筛选后,共获得29 个真正差异表达cDNA片段,利用Northern blot对其中4 种cDNA片段的表达情况进行验证,结果与DS筛选一致. 然后对29个差异cDNA片段进行测序和同源性分析,得到25个差异表达基因,10个为已知基因,其中5个基因在高转移细胞株SW620中差异表达,可能有促进转移的作用, 包括热休克蛋白10(heat shock protein10,HSP10)、细胞色素氧化酶Ⅱ(cytochrome C oxidaseⅡ,COXⅡ)、有丝分裂调控蛋白dis3人同源物(mitotic control protein dis3 homolog, DIS3)、骨骼肌α1-肌动蛋白(skeletal muscle actin alphal, ACTA1)及血浆淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA);另外5个基因的表达仅见于在SW480低转移细胞株,具有潜在的转移抑制作用,包括egl nine homolog 2(EGLN2)、真核翻译起始因子4A(eukaryotic translation initiation factor 4A,EIF4A)、人细胞色素氧化酶Ⅲ的类似物(similar to cytochrome c oxidase Ⅲ,COXⅢ)、谷胱甘肽S转移酶3(glutathione S-transferase mu 3,GSTM3)及线粒体DNA (mitochondrion DNA,mtDNA).10个已知基因基本上是一些与细胞生长分化、代谢合成、转录、凋亡及信号转导等相关的基因.除DIS3和SAA外,其余基因与大肠癌转移的关系在本研究中首次被报道.此外,还筛选到15�
- 梁莉丁彦青李欣杨玉芳肖军张进华赵培冉
- 关键词：癌转移人大肠癌CDNA片段5号染色体SW480
- 大肠肿瘤组织中EB病毒的原位杂交检测被引量：2
- 2002年
- 目的探讨EB病毒感染与人大肠癌发生的关系。方法用原位分子杂交法对130例人大肠癌标本中EB病毒小分子RNA片段进行检测。结果130例标本中有6例(4.48%)癌组织呈阳性反应,其中4例为男性,4例有明显淋巴细胞浸润。结论EB病毒感染可能与我国部分大肠腺癌的发生有关,肿瘤细胞间质中大量淋巴细胞浸润可能是EB病毒感染的重要病理学特征。
- 刘换新丁彦青孙亚欧梁力杨玉芳齐宗利刘继红熊萍霞
- 关键词：结肠直肠肿瘤疱疹病毒4型原位杂交
- 应用抑制消减杂交技术克隆人大肠癌转移相关新基因
- 2004年
- 目的 克隆新的大肠癌转移相关基因,为进一步阐述大肠癌转移的分子机制提供线索。方法 利用抑制消减杂交技术,以1对来自同一亲本、转移能力不同的大肠癌细胞株SW620和SW480为研究对象,构建2种大肠癌转移促进基因和转移抑制基因的cDNA消减文库。随机挑取文库克隆进行差异筛选,对所得的差异片段进行测序和同源性分析,利用Northern Blot对新基因的表达情况进行验证。结果 两种消减文库分别含有235和232个白色克隆,90％以上的白色克隆含有插入片段。随机挑取约200个阳性克隆进行差异筛选。共获得29个差异片段。测序及同源分析发现15个为未知基因,GenBank登陆号为CD485499-CD485513。其中与5号染色体序列同源的基因有6个。结论 抑制消减杂交技术是筛选、克隆大肠癌转移相关新基因的有效手段;5号染色体上可能存在多个与大肠癌转移相关的新基因位点;筛选到的新基因片段为进一步克隆其全长、研究基因功能提供了实验基础。
- 梁莉丁彦青李欣杨玉芳肖军张进华赵培冉
- 关键词：基因大肠癌肿瘤转移抑制消减杂交
- 慢病毒载体与基因治疗被引量：2
- 2003年
- 载体是供插入目的基因并将其导入宿主细胞内表达或复制的运载工具。常用的有 SV40 衍生载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、细小病毒载体、疱疹病毒载体、痘苗病毒载体等。近几年来 ,慢病毒载体受到高度重视 ,慢病毒载体来源于人类免疫缺陷病毒 HIV- 1、HIV- 2、SIV,具有转染分裂和非分裂的 T细胞、树枝状细胞、造血干细胞及巨噬细胞 [1] ,基因疗法是一种新方法。Hawley[2 ]等的文章中指出 ,由于慢病毒载体可作用于细胞周期的 G0 / G1期 ,成为遗传性疾病治疗的有效手段。基因治疗的最初目的是传送特殊的基因至预定的靶细胞 ,并且直接表达该基因的性质 ,达到治疗效果。在治疗遗传性、代谢性、神经系统疾病、癌症及艾滋病方面有广泛的应用前景 [3 ] 。
- 杨玉芳丁彦青
- 关键词：慢病毒载体基因治疗心血管系统疾病关节炎肝脏疾病
- 一种高通量筛选结直肠癌转移相关cDNA文库的方
- 2004年
- 梁莉丁彦青李欣杨玉芳肖军张进华赵培冉
- 关键词：癌转移结直肠癌高通量筛选NORTHERN印迹抑制消减杂交技术CDNA文库
- 嗜上皮细胞特异性启动子ED-L2转基因小鼠的建立被引量：4
- 2003年
- 目的 :利用ED L2启动子构建载体 ,建立鼻咽癌转基因动物模型 .方法 :将ED L2 pEGFP质粒用XhoI酶切线性化 ,胶回收线性化片段 ,稀释浓度 4mg·L-1 ,采用显微注射法 ,将外源基因注射入小鼠受精卵细胞内 .结果 :产 1 2只小鼠 ,PCR检测基因整合 ,其中阳性 9只 ,阳性率 75 % ,SouthernBlot检测阳性 2只 ,阳性率 1 6 .6 7% .结论 :嗜上皮细胞特异性启动子ED
- 杨玉芳丁彦青石益民刘换新
- 关键词：绿色荧光蛋白转基因动物模型小鼠
- 一种高通量筛选结直肠癌转移相关cDNA文库的方法
- 目的建立一种高通量筛选结直肠癌转移相关cDNA消减文库的方法。方法利用非同位素标记的差异筛选方法(Differential Screen-ing,DS),通过改进其实验条件,对已构建的结直肠癌转移相关cDNA消减文库进行...
- 梁莉丁彦青李欣杨玉芳肖军张进华赵培冉
- 文献传递
- Tiam1基因与肿瘤转移被引量：3
- 2004年
- Tiam1基因即T细胞淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白 1 ,是普遍存在的鸟嘌呤核苷酸转换因子 ,存在于多种肿瘤细胞中 。
- 杨玉芳丁彦青
- 关键词：TIAM1基因肿瘤转移T细胞淋巴瘤肿瘤侵袭基因结构
