杜勇
- 作品数：33 被引量：107H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 丙型肝炎病毒准种在NS2区的变异状况初探被引量：1
- 2001年
- 探讨HCV准种在NS2区的基因结构特征及变异状况。利用逆转录 巢式PCR从 1份HCV慢性携带者的阳性血清及 1份丙肝患者的血清中获得HCVNS2全长cDNA ,将其克隆于T载体 ,各随机挑取 5个阳性克隆进行序列测定。结果显示克隆到HCVNS2全长基因 ,所测克隆在核苷酸水平和氨基酸水平互不相同。该慢性携带者HCVNS2区序列以完整读码框架 (ORF)为主 ,一个于HCV多聚蛋白第 835位氨基酸的位置出现终止信号 ,而该丙型肝炎患者以NS2N端发现终止信号的序列为主 ,其中三个于第 835位氨基酸的位置出现终止信号 ,一个于第 887位氨基酸的位置出现终止信号 ,仅一个克隆的序列为完整ORF。对ORF完整的序列进行比较 ,发现丙型肝炎患者氨基酸变异主要集中于N端 ,蛋白二级结构模拟显示丙肝患者NS2与慢性携带者的优势二级结构类似。研究表明从我们选择的两例感染者的HCVNS2序列看 ,不同临床类型的HCV病人体内的HCV准种在NS2区存在差异 ,这种差异可能与病毒存在于机体的状态有一定的一致性。
- 冷彦陈秀珠杜勇毛春生杜桂鑫王海涛
- 关键词：丙型肝炎病毒准种
- 抗HCV解旋酶人源性单链噬菌体抗体的筛选
- 2001年
- 目的 从人源性单链噬菌体抗体库中筛选出针对HCV解旋酶的单链抗体并测定其序列。方法 以解旋酶蛋白为抗原 ,经过五轮的吸附 洗脱 扩增 ,从噬菌体抗体库中筛选出特异性的单克隆抗体。用ELISA、交叉反应性ELISA、竞争抑制ELISA实验鉴定其特异性后将此抗体基因克隆进PBluescript质粒中测定其序列。结果 经过淘筛解旋酶蛋白对抗体库中的噬菌体进行了特异性富集。经鉴定此抗体为特异的抗HCV解旋酶的单克隆抗体 ,将其测序可见其基因为人源性的单链抗体基因。结论 所得的人源性单链抗体免疫性小 ,穿透性强 ,可以大批量生产 ,是诊断和导向治疗的理想载体 ,并为进一步的表位研究。
- 李燕杰陈玉龙杜勇王海涛
- 关键词：丙型肝炎病毒解旋酶单链抗体
- 黑龙江省苇河林区莱姆病自然疫源地媒介蜱的调查被引量：1
- 1992年
- 1989年4～7月间,我们对黑龙江苇河林区莱姆病的媒介蜱作了调查。全沟硬蜱为当地优势蜱种,也是发现的唯一莱姆病媒介,4月初开始活动,5月中旬达活动高峰,7月底近乎绝迹。其伯氏疏螺旋体感染率为29.1％,但5月以后的感染率明显高于4月份的感染率。
- 杜勇唐士元吴晓明张启恩王中元王建华
- 关键词：菜姆病全沟硬蜱伯氏疏螺旋体
- 应用噬菌体随机肽库研究丙型肝炎病毒核心蛋白B细胞抗原表位被引量：21
- 1999年
- 目的探索利用特异多克隆抗体结合噬菌体递呈（ｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙ）随机肽库，进行病原体蛋白质的Ｂ细胞抗原表位研究。方法采取特异抗原→特异多克隆抗体→相应抗原表位的技术路线。所选研究对象为丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白。实验分三步：（１）抗ＨＣＶ核心蛋白多克隆抗体的制备。用活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ耦联重组的ＨＣＶ核心蛋白，亲和层析纯化丙型肝炎病人血清中特异的抗核心蛋白多克隆抗体。（２）随机肽库的生物淘洗（ｂｉｏｐａｎｎｉｎｇ）。以纯化的多克隆抗体作为筛选分子，生物淘洗噬菌体递呈的随机七肽库。（３）阳性噬菌体克隆的鉴定。将筛选的噬菌体克隆进行ＥＬＩＳＡ检测、ＤＮＡ测序以及竞争抑制试验等，最后分析所获资料。结果七肽氨基酸序列分析表明，ＨＣＶ核心蛋白存在着至少３个Ｂ细胞抗原位点，其中１９～２５ａａ间（ＰＱＤＶＫＦＰ）的线性表位是该蛋白的优势表位，证实了本研究策略的可行性。结论本技术路线可以有效地进行ＨＣＶ核心蛋白的Ｂ细胞抗原表位研究。由此推论，此方法也可移植于其它病原微生物抗原或自身抗原的表位研究，继而为基于抗原表位水平的特异诊断试剂的研制。
- 杜勇王海涛
- 关键词：丙型肝炎病毒抗原决定簇
- 丙型肝炎病毒E1蛋白的模拟表位研究
- 2001年
- 目的研究ＨＣＶ Ｅ１蛋白的Ｂ－细胞表位。方法将携带ＨＣＶ Ｅ１基因的重组质粒ｐＱＥ－３０－ ＨＣＶｅ１１８在Ｅ．ｃｏｌｉ Ｍ１５中进行大量诱导、表达；对表达的Ｅ１蛋白进行分离、纯化；再以纯化的蛋白捕获ＨＣＶ感染者血清中能与 ＨＣＶ Ｅ１蛋白特异反应的 ＩｇＧ，以此 ＩｇＧ作为筛选分子，对随机十二肽库进行淘洗，经 ＥＬＩＳＡ筛选噬菌体阳性克隆并测序。结果ＨＣＶ Ｅ１蛋白获得了高纯度的纯化，这种蛋白可特异地与部分丙型肝炎患者血清发生反应。在获得的 １０个模拟表位中， ６、 ２和２个递呈肽分别与 ＨＣＶ Ｅ１蛋白的３２０～３３６ａａ、 ２５１～２６３ａａ和２２５～２４８位ａａ具有最大同源性。结论在Ｅ１蛋白中存在多个Ｂ－细胞表位，３２０－３３６位极可能为ＨＣＶ Ｅ１蛋白的优势表位。
- 曹凤史宣玲杜勇侯利华季阳王海涛
- 关键词：丙型肝炎病毒模拟表位
- 黑龙江省苇河林区莱姆病调查报告被引量：3
- 1991年
- 莱姆病(Lyme disease)是由伯氏疏螺旋体(Borreliaburgdorferi)所引起的人畜共患蜱媒传染病。其早期临床表现为慢性游走性红斑(ECM),中晚期可累及心脏、神经、运动系统。1986年,艾氏在黑龙江省海林县首次发现了国内的莱姆病患者,并证实东北林区存在着莱姆病疫源地,全沟硬蜱为主要媒介。1988年,新疆等地也发现了莱姆病。 为进一步了解莱姆病在疫区人群中的感染、发病水平,1989年4～9月间,我们在黑龙江省苇河林区对当地人群中蜱咬及ECM发病情况、人群血清特异抗体水平及动态变化作了调查。
- 杜勇
- 关键词：莱姆病流行病学
- HCV包膜蛋白E2的B细胞抗原模拟表位的筛选、重组表达与抗原性鉴定被引量：1
- 2002年
- 目的 采用蛋白质 /多肽递呈技术对HCV包膜蛋白E2进行模拟表位研究。方法 通过使用E2蛋白结合血清中的抗 E2 ,筛选M1 3噬菌体构建的随机肽库 ,寻找E2区蛋白的模拟表位 ;用大肠杆菌硫氧还蛋白作为骨架 ,在其活性部位以“内融合”形式重组表达该模拟表位 ,用HCV感染者血清验证重组蛋白的抗原性。结果 寻找到一个E2区蛋白的模拟表位 ,可能为E2蛋白的构象性表位。结论 本实验为研究HCV外膜蛋白E2抗原表位水平的特异诊断试剂的研制。
- 史宣玲曹凤季阳杜勇侯利华王海涛
- 关键词：包膜蛋白E2抗原表位随机肽库丙型肝炎
- 伯氏疏螺旋体在全沟硬蜱体内的分布与经卵传递被引量：6
- 1990年
- 本实验首次证实全沟硬蜱可经卵传递伯氏疏螺旋体,2只卵巢感染螺旋体的雌蜱的子代感染率分别为59%和29%。伯氏疏螺旋体主要分布于全沟硬蜱的中肠内,饥饿和饱血蜱的中肠感染率相近,分别为30.9%和29.0%:而两者的全身感染与中肠感染之比则分别为2.9%和15.0%。
- 杜勇唐士元吴晓明张启恩
- 关键词：伯氏疏螺旋体全沟硬蜱莱姆病
- HIV-1p24蛋白在大肠肝菌中的高效可溶性表达、一步纯化及抗原性分析被引量：6
- 2000年
- 合成引物扩增HIV 1p2 4基因 ,并将其克隆到 pQE 30质粒中 ,使其在大肠杆菌E .coliM 15中以IPTG诱导高效表达 ,经SDS PAGE分析 ,该表达产物约占菌体总蛋白 2 0 % ,并且以可溶蛋白的形式存在于细菌裂解液上清之中。经镍离子柱亲和层析一步纯化 ,洗脱产物中 p2 4蛋白纯度达95 %。ELISA分析表明 ,该蛋白可与HIV感染者血清发生特异性免疫反应。以此蛋白交联Sepharose 4B ,亲和层析纯化HIV感染者血清中的抗体 ,用所得抗体与HIV确认试剂反应 ,发现该纯化抗体仅与确认试剂中的 p2 4蛋白反应。上述结果表明在大肠杆菌中已经高效表达了可溶性HIV 1p2 4蛋白 。
- 童贻刚杜勇徐静李敬云鲁晏希鲍作义王海涛
- 关键词：HIV-1大肠杆菌诊断试剂
- 丙型肝炎病毒NS4区基因的克隆、序列分析及其表达
- 1997年
- 用RT－PCR法从一名抗-HCV阳性献血员血清中扩增到约900bp的DNA片段，经EcoRI酶切后插入pET17Xb表达质粒。SDS－PAGE表明重组质粒在约65kD处有融合蛋白表达，表达蛋白含量约为24％。对其插入片段进行序列分析：核着酸长度为945bp，A：T：G：C比例为18．6：21.9:30.5：29.0，G/C含量占59％，与其它一些HCV殊比较，核着酸同源性Ⅰ型为77．1％．Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ型均＜70％．Ⅱ型各株均＞90％；氨基酸序列比较的同源性Ⅰ型为857％，Ⅲ、Ⅳ、ⅤⅥ型各株均＞70％，Ⅱ型各株均＞93％。NS4基因的克隆和表达为其基因和产物作用的进一步研究奠定了基础。
- 陈庄杜勇潘文胜王学王海涛
- 关键词：丙型肝炎病毒基因克隆蛋白表达
