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水稻病程相关蛋白质在逆境胁迫下的表达研究被引量：6: 2013年; 植物病程相关(PR)基因一般在病原物侵染过程中受诱导发生转录上调.目前有证据提示植物PR基因在非生物逆境胁迫下也发生转录变化,但其蛋白质的表达变化情况还鲜有报道.为了解水稻PR蛋白质在逆境胁迫下的表达特征,本文采用免疫印迹技术(Western blotting,WB)调查了8个PR蛋白质在冷、热、旱、淹和盐等5种胁迫下的表达谱.结果表明:在冷胁迫下PR8表达上调,在热胁迫下PR1a、PR3、PR5和PR16表达下调;在旱胁迫下PR1a、PR2和PR8表达上调,而PR5和PR16表达下调,在淹胁迫下PR1、PR2和PR15表达上调,PR1a、PR3、PR5和PR8表达下调;在盐胁迫下PR2和PR3表达上调,而PR1a、PR5、PR8和PR16表达下调.另外,对这些PR基因的上游启动子区进行分析,发现存在与胁迫响应相关的调控元件,其中脱落酸反应元件(ABRE)、TC-rich repeats和HSE的出现频率较高.这些蛋白质表达数据进一步佐证了PR蛋白在逆境胁迫反应中发挥着重要且不尽相同的作用.; 高庆华曾祥然贾霖牛东东李雪姣关明俐贾盟兰金苹窦世娟李莉云刘丽娟刘国振; 关键词：水稻免疫印迹逆境胁迫启动子

水稻几丁质酶基因的转录与表达特征被引量：7: 2014年; 几丁质酶与植物的生长发育、抗逆和防御反应相关。水稻PR3家族几丁质酶编码基因有19个成员,本文分析其转录特征,了解到有些基因属于组成型转录,有些基因属于组织特异型转录,分析几丁质酶蛋白质的结构域,并对其进行聚类和亚家族分类。利用免疫印迹技术分析几丁质酶蛋白质的表达谱,发现CHIT5的表达量在水稻叶片生长过程中下调,而CHIT6、CHIT14、CHITC1和CHITC2的表达量上调。在水稻与白叶枯病菌(Xoo)的不亲和反应中,CHIT1、CHIT2、CHIT5、CHIT6、CHIT10、CHIT15和CHIT16的表达量上调,CHIT14、CHITC1和CHITC2的表达下调。进一步比较几丁质酶蛋白质在水稻-Xoo不同互作反应中的表达,发现其在亲和及不亲和反应中的表达模式类似,但一般在亲和反应中强度变化较大。此外,CHIT6蛋白质在对照反应中的表达量上调,提示CHIT6的表达受创伤的诱导。本文比较系统地揭示了水稻PR3家族几丁质酶编码基因的转录和蛋白质表达特征,为其功能解析提供了线索。; 范伟李雪姣关明俐缪刘杨史佳楠窦世娟刘丽娟李莉云刘国振; 关键词：水稻几丁质酶聚类分析白叶枯病菌转录免疫印迹

病程相关蛋白质在水稻与白叶枯病菌互作过程中的表达被引量：1: 2013年; 【目的】了解病程相关(pathogenesis-related,PR)蛋白质在植物防卫体系中的表达模式进而探讨水稻抗病的分子机理。【方法】选取10个前期工作中鉴定的差异转录PR基因,利用免疫印迹(Western blotting,WB)技术检测它们在水稻正常生长和与白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae Xoo)互作过程中的表达丰度变化。【结果】发现随着水稻的生长,Os12g43380、Os12g36830、Os12g36860、Os12g36840、Os02g41670、Os05g35290和Os12g33610的表达逐步增加,一般在开花期达到最高,成熟期有所降低。在白叶枯病抗性基因Xa21介导的水稻-Xoo非亲和互作过程中,检测到Os01g51570、Os01g71680和Os12g36850的表达量上调,Os12g36830、Os12g36840、Os02g41670和Os05g35290的表达量下调,并且发现,在亲和互作和非亲和互作反应中PR蛋白质的变化模式相似。对PR基因上游启动子区进行分析,发现存在与抗病相关的顺式作用元件,其中,ARE、HSE、MBS、TC-rich repeats等元件在抗病相关的PR基因上游出现频率较高。【结论】鉴定了在水稻-Xoo互作过程中发生丰度变化的7个PR蛋白质。; 关明俐窦世娟李雪姣贾霖史佳楠曾祥然贾盟郭美岑刘丽娟李莉云刘国振; 关键词：水稻白叶枯病抗性反应

基因组原位杂交中封阻DNA制备方法研究被引量：4: 2010年; 在基因组原位杂交中,适当的封阻可以大大提高基因组原位杂交的效率。本研究采用煮沸法、超声波剪切法对大白菜基因组DNA进行剪切,研究了大白菜封阻DNA的制备方法。结果表明:珠沸法效率高,操作简单,当煮沸70 min DNA片段大小主要集中在200～500 bp,适于在基因组原位杂交中作为封阻。研究结果为基因组原位杂交的应用奠定了基础。; 顾爱侠李雪姣冯大领王彦华陈雪平申书兴; 关键词：基因组原位杂交

8个WRKY转录因子在水稻叶片生长和抗病过程中的表达分析被引量：3: 2014年; WRKY是植物体内最大的转录因子家族之一,其成员在植物生长发育和抗逆过程中发挥重要作用。为了解水稻WRKY的功能,本研究利用蛋白质免疫印迹(w estern blotting,WB)技术,检测了8个WRKY转录因子在水稻叶片生长和Xa21介导的抗白叶枯病过程中的表达丰度变化。结果表明:OsWRKY12、43、55和86在苗期表达量较低,随叶片的生长表达逐步增加;OsWRKY50和84在苗期叶片中的表达量相对较高,成熟期下降;未检测到OsWRKY40/64和52在叶片中的表达。在Xa21介导的白叶枯病抗性反应中,OsWRKY40/64、50和52受白叶枯病菌诱导表达,OsWRKY84受侵染后表达量上调,OsWRKY12、43、55和86在抗病过程中没有检测到表达丰度的变化。进一步比较这些转录因子在抗、感和对照(Mock)反应中的表达,发现抗、感反应间蛋白质的表达变化是相似的。研究结果提示:OsWRKY12、43、55和86可能在叶片正常生长中发挥作用;OsWRKY40/64和52可能在水稻-白叶枯病菌互作过程中发挥作用;OsWRKY50和84则在叶片生长和抗白叶枯病过程中都有一定的功能。; 史佳楠李莉云徐文静关明俐李雪姣牛东东兰金苹窦世娟刘丽娟刘国振; 关键词：WRKY 水稻免疫印迹白叶枯病转录因子

一种鉴定结球甘蓝—大白菜异附加系的方法: 本发明公开了一种鉴定结球甘蓝—大白菜异附加系的方法。该方法包括(1)根据已发表的甘蓝遗传图谱，选用了位于大白菜10个连锁群的207个SSR标记，引物序列由上海生工生物技术有限公司合成。(2)提取不同结球甘蓝和大白菜品种的...; 申书兴李雪姣顾爱侠陈雪平王彦华轩淑欣李晓峰罗双霞; 文献传递

转基因水稻中GUS蛋白质的检测及其表达特征被引量：10: 2014年; 【目的】建立转基因水稻中GUS蛋白质的免疫学检测方法,并了解花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子驱动的GUS蛋白质在转基因水稻中的表达特征。【方法】以细菌基因组DNA为模板,PCR扩增GUS基因后克隆到表达载体pET30a中,测序验证的重组子转入大肠杆菌表达菌BL21中,IPTG诱导获得重组表达的GUS蛋白质,用HIS-tag beads纯化后作为免疫原免疫小鼠制备GUS蛋白质特异的抗体,通过免疫印迹分析筛选高特异性的单克隆抗体,用Broadford法对重组的GUS蛋白质进行定量,对不同浓度的GUS蛋白质进行免疫印迹分析,绘制检测GUS蛋白质的标准曲线,通过与标准曲线的比较对水稻叶片中GUS蛋白质进行定量分析。提取不同时期、不同部位的水稻总蛋白质,包括苗期的地上部、地下部,分蘖期的茎、茎节、叶鞘、叶枕、叶片上部、叶片中部和叶片下部,孕穗期的茎、穗轴、叶鞘、叶枕、叶片、幼穗(长度分别为1、2、10和20 cm),开花期的茎、穗轴、叶鞘、叶片、穗子,成熟期的茎、叶片、授粉后不同时期的种子(分别为授粉后10、20、30和40 d)、乳熟期的胚、胚乳和颖壳、成熟种子的全种子、胚、胚乳和颖壳以及不同时期的叶片和根部材料等。SDS-PAGE分离后用抗体检测其GUS蛋白质的丰度。【结果】筛选获得了高特异性的抗GUS单克隆抗体(编号为#27),用该抗体检测转基因水稻中及重组的GUS蛋白质均呈现特异条带,没有可见的背景信号,用本研究建立的免疫印迹方法对重组GUS蛋白质的检测下限约为4 ng,可检出转基因水稻单粒大米2.5%样品中(约0.6 mg)的GUS蛋白质。在不同时期的转基因水稻叶片中GUS蛋白质的表达丰度基本稳定,而在水稻根部的GUS丰度随生长急剧减少,5叶期根中的表达量不到3叶期的三分之一,到6叶期检测不到GUS蛋白质。在水稻苗期叶片中,GUS蛋白质约占鲜重的0.02‰。另外,除分蘖期以后的根部之; 牛东东郝育杰荣瑞娟韦汉福兰金苹史佳楠魏健李雪姣杨烁奚文辉武鹏程刘丽娟吴琳刘斯奇尹长城刘国振; 关键词：水稻转基因植物免疫印迹

水稻病程相关PR1家族蛋白质在叶片生长及与白叶枯病菌互作反应中的表达研究: 研究背景:植物受到病原菌侵染时大量表达的一类蛋白，称为病程相关蛋白(Pathogenesis-related，PR)。目前，几乎在所有植物中都有PR基因的报道，其广泛存在提示着其重要性，有大量的实验证据表明PR基因在植物...; 李雪姣; 关键词：水稻白叶枯病抗病机理; 文献传递

芸薹属作物EST-SNP的发掘与分析被引量：9: 2010年; 芸薹属作物是十字花科中重要的蔬菜和油用作物,经济价值和食用价值比较高。本研究通过生物信息学手段,从3个芸薹属物种EST序列中获得了大量的SNP和Indel资源,对SNP与EST的数量及拼接结果之间的关系、SNP碱基置换的偏好性、Indel碱基数量与发生频率之间的关系进行了分析。分析结果对深入研究芸薹属基因组特点具有一定的参考价值,为进一步通过试验验证预测的SNP位点、开发该作物高通量SNP分子标记奠定了基础。; 李雪姣张耿顾爱侠轩淑欣王彦华赵建军; 关键词：芸薹属分子标记

一种鉴定结球甘蓝—大白菜异附加系的方法: 本发明公开了一种鉴定结球甘蓝—大白菜异附加系的方法。该方法包括(1)根据已发表的甘蓝遗传图谱，选用了位于大白菜10个连锁群的207个SSR标记，引物序列由上海生工生物技术有限公司合成。(2)提取不同结球甘蓝和大白菜品种的...; 申书兴李雪姣顾爱侠陈雪平王彦华轩淑欣李晓峰罗双霞

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