李超
- 作品数：9 被引量：32H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
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- 抑制NF-κB活性诱导同种异体小鼠心脏移植耐受的早期作用
- 2010年
- 目的 研究调节性T细胞（Tr）和Th17细胞在特异性NF-κB抑制诱导同种异体小鼠心脏移植耐受的早期作用机制.方法 以BALB/c小鼠为供体,C57BL/6小鼠（对照组）和IκBα△N-Tg小鼠（实验组）分别作为受体建立同种异体腹部异位心脏移植模型;流式细胞术分别检测两组受鼠脾脏内Tr在移植前以及移植术后7 d、30 d和100 d的变化规律,以及Th17细胞在移植术后5 d时的变化;Western blot检测两组心脏移植物内IL-17在移植后3 d和5 d的表达.结果 实验组心脏移植物存活时间均大于100 d,HE染色未见心脏移植物内有明显淋巴细胞浸润;实验组Tr比例在移植后7 d和30 d时明显升高（21.23±3.95,23.17±4.11 vs 11.64±1.96,P〈O.05）,但是100 d时Tr细胞比例又下降到了移植前水平（10.79±2.48 vs 11.64±1.96,P〉0.05）,而对照组Tr在移植前后则无明显变化;与对照组相比,实验组Th17细胞及移植物内IL-17表达在移植术后5 d时均明显下降.结论 特异性受体T细胞NF-κB功能缺陷可以打破受体内Tr/Th17细胞平衡,在移植术后早期促进T细胞向Tr分化而抑制向Th17细胞分化,从而阻止急性排斥反应发生,诱导耐受.
- 李舒媛薛承彪李超李尧陈知水周平
- 关键词：NF-ΚB心脏移植小鼠TH17调节性T细胞
- 小鼠galectin-9可通过分泌形式诱导Tim-3^-T细胞凋亡
- 2010年
- 目的 构建小鼠galectin-9重组腺病毒pAd-gal-9,探讨galectin-9的真核表达定位以及galectin-9诱导T细胞凋亡与Tim-3表达的关系.方法 常规分子克隆方法 结合LR反应构建腺病毒重组质粒pAd/CMV/V5-DEST-gal-9,以Pac I线性化后,用脂质体2000体外转染293A细胞,8 d后反复冻融细胞3次收集含病毒上清,并以此上清感染293A细胞大量扩增病毒pAd-gal-9.CsCI密度梯度离心法纯化病毒,96孔板法梯度感染293A细胞测定病毒滴度,然后感染CHO细胞,用免疫组化、Western blot和流式细胞仪分析galectin-9的表达水平和定位;以新鲜培养的上清或固相化的细胞分别与外周淋巴结细胞进行培养,AnnexinV/PI法检测T细胞凋亡情况,对比凋亡细胞比例与Tim-3^＋ T细胞的比例.结果 重组腺病毒构建及表达成功,免疫组化表明galectin-9在CHO胞质表达;Westernblot证实galectin-9表达;流式分析表明胞内染色组galectin-9平均荧光强度显著高于表面染色组,病毒感染CHO表面染色组与空白对照组galectin-9平均荧光强度无明显区别;新鲜培养的上清可以明显诱导T细胞发生凋亡,显著高于Tim-3^＋ T细胞的比例.结论 重组腺病毒pAd-gal-9构建成功,体外感染pad-gal-9的CHO分泌galectin-9诱导T细胞凋亡可以不依赖Tim-3的表达.
- 何文涛袁劲徐逸周鸿敏蔡兰军郭晖李超左利群宫念樵陈忠华
- 关键词：凋亡T细胞
- 抗人肝癌组织α-L-岩藻糖苷酶抗体的制备及运用
- 2006年
- 目的:制备和纯化肝癌特异性α-L-岩藻糖苷酶(α-L-fucosidase,AFU)多克隆抗体及初步研究其在肝癌诊断中的临床作用。方法:用自行提取和纯化的人肝癌组织AFU免疫家兔,以间接ELISA检测抗血清效价和工作浓度。抗血清经阴离子交换法纯化后采用Western-blot鉴定纯化的AFU和免疫组化方法定位AFU在肝癌组织中的分布情况。结果:抗血清的效价和工作浓度经间接ELISA检测分别为1∶32000和1∶4000。抗血清经过饱和硫酸铵沉淀,阴离子交换树脂DEAE-52纯化后可在第115收集管前后出现一明显洗脱峰。Western-blot显示纯化的多克隆抗体可特异性地识别相对分子质量为55×103的AFU。免疫组化表明,AFU多表达于肝癌组织的细胞质和(或)胞膜而不表达于癌旁组织。结论:本实验制备的抗人肝癌组织AFU多克隆抗体可用于检测肝癌组织和血清中AFU的表达水平。
- 李超林菊生钱颉周鹤俊
- 关键词：肝肿瘤多克隆抗体
- 熊果酸联合供者特异性淋巴细胞输注诱导小鼠免疫耐受被引量：1
- 2011年
- 核因子kB（nuclear factor—kB，NF-kB）是T细胞活化重要信号分子。我们前期研究发现T细胞特异性NF-kB活化障碍小鼠——IkBα△N．Tg小鼠，能够永久接受异基因心脏移植物。本研究将探讨以NF-kB为干预靶点的小分子化合物——熊果酸对小鼠异基因心脏移植的影响。实验方法如下：（1）流式细胞术分选获取C57BL／6（B6）脾脏T细胞并于体外培养。
- 刘勇李尧黄霞李超薛承彪胡昕鹏杨涛周平
- 关键词：免疫耐受熊果酸核因子ΚB
- Toll样受体信号通路在小鼠皮肤移植免疫反应中的作用
- 2013年
- 目的研究树突状细胞（DC）中Toll样受体（TLR）信号通路在小鼠皮肤移植排斥反应中的作用。方法体外诱导培养得到BALB／c小鼠骨髓源性的不成熟DC，加入TLR激动剂CpG刺激细胞成熟，实验组同时加入TLR通路关键分子MyD88的抑制剂ST2825，24h后用流式细胞仪检测IX2共刺激分子CD80和CD86的表达；用荧光染料CFSE标记的C57BL／6小鼠T淋巴细胞与BALB／c小鼠的DC在CpG刺激下行混合淋巴细胞培养，实验组同时加入ST2825，培养3d后用流式细胞仪检测T淋巴细胞的增殖情况。建立BALB／c小鼠次要组织相容性抗原HY错配皮肤移植模型，供鼠均为雄性小鼠，受鼠均为雌性小鼠，在此基础之上分为对照组（供受鼠均为野生型BALB／c小鼠）、MyD88组（供受鼠均为MyDS8基因敲除的BALB／c小鼠）、DC组（供受鼠均为MyD88基因敲除的BALB／c小鼠，移植后输注供鼠来源的DC）、实验组（供受鼠均为MyD88基因敲除的BALB／c小鼠，输注经ST2825预处理的供者来源DC）。观察各组移植皮片的存活时间。结果TLR通路抑制剂ST2825可以剂量依赖性地抑制CpG刺激引起的DC共刺激分子CDS0和CD86的高表达。经Cpg刺激的IX；可以诱导同种反应性T淋巴细胞的大量增殖，ST2825可以呈剂量依赖性地抑制此反应。对照组移植物的存活时间为（22．8±2．8）d；MyD88组移植物均未发生排斥反应（存活时间超过100d）；DC组移植物存活时问为（9．7±2）d；实验组移植物亦未发生排斥反应（存活时间超过100d），较DC组显著延长（P〈0．05）。结论DC通过TLR信号通路在移植排斥反应中发挥关键作用，TLR信号通路抑制剂ST2825能够抑制DC的激活和生物学功能，其机理可能与ST2825抑制DC成熟，并间接抑制同种反应性T淋巴细胞的增殖有关。
- 李超黄霞杨涛张利民李明强周平
- 关键词：小鼠皮肤移植树突状细胞TOLL样受体
- 核因子-κB抑制剂熊果酸延长小鼠心脏移植物存活时间被引量：4
- 2011年
- 目的:研究熊果酸对同种异体小鼠心脏移植排斥反应的作用。方法:体外实验:CD3、CD28单抗刺激B6小鼠T细胞,实验组加入不同浓度的熊果酸。24h后检测P65核转位程度;48h后检测T细胞表面CD25、CD69表达情况。体内实验:熊果酸用0.5%羧甲基纤维素钠混悬。行BALB/c到B6的小鼠心脏移植。实验组使用10mg/(kg·d)、30mg/(kg·d)的熊果酸灌胃。对照组使用相同剂量的0.5%羧甲基纤维素钠灌胃。观察术后7d时移植心CD4+、CD8+T细胞浸润情况,IFN-γ、IL-4mRNA水平和移植心存活时间。结果:熊果酸剂量依赖性抑制P65核转位。25μmol/L的熊果酸可将T细胞表面的CD25下调92.4%,CD69下调89.3%。10mg/(kg·d)熊果酸可将移植心平均存活时间(MST)延长至(23.8±1.3)d[P<0.05,与对照组(7.4±0.3)d相比]。而30mg/(kg·d)的熊果酸可将MST延长至(68.5±2.8)d。熊果酸组移植心内CD4+和CD8+T细胞浸润数量显著减少(P<0.05,与对照组比较),且IFN-γmRNA水平显著下调(P<0.05,与对照组比较),而IL-4mRNA水平无明显变化。结论:熊果酸可抑制T细胞NF-κB活化。体内应用熊果酸能显著延缓同种异体移植心排斥时间,这与熊果酸抑制T细胞活化,下调Th1反应相关。
- 刘勇李尧李超黄霞薛承彪胡昕鹏杨涛周平
- 关键词：排斥反应T细胞活化
- 髓样分化因子88抑制剂ST2825对RAW264.7细胞生物学活性的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨Toll样受体信号转导分子髓样分化因子88(MyD88)抑制剂ST2825对巨噬细胞系RAW264.7细胞生物学活性的影响,为新型免疫抑制剂的研发提供新的思路。方法培养RAW264.7细胞并分为4组:空白对照组细胞不给予任何处理和刺激;脂多糖对照组细胞给予脂多糖(500ng/mL)刺激;ST2825低浓度组和高浓度组细胞分别给予浓度为10μmol/L和20μmol/L的ST2825预处理1h后再给予脂多糖刺激。36h后收集细胞,流式细胞术检测细胞表面共刺激分子CD80和CD86的表达;提取细胞RNA,实时荧光定量PCR检测IL-1、IL-6、TNF-αmRNA水平。异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-Dextran)法测定细胞吞噬功能。结果脂多糖对照组RAW264.7细胞共刺激分子CD80和CD86表达率分别为(54.2±1.6)%和(56.8±2.9)%,与空白对照组相比均明显升高(均P<0.05);ST2825低浓度组和高浓度组CD80表达率分别为(37.4±1.7)%和(26.4±1.2)%,CD86表达率分别为(43.4±2.0)%和(31.5±1.1)%,与脂多糖对照组相比均降低(均P<0.05)。经脂多糖刺激后,脂多糖对照组RAW264.7细胞IL-1、IL-6和TNF-αmRNA表达水平升高,ST2825可降低上述促炎性细胞因子的mRNA表达水平。ST2825低浓度组和高浓度组细胞吞噬FITC-Dextran的能力与正常RAW264.7细胞无差异。结论 MyD88抑制剂ST2825可抑制脂多糖对天然免疫细胞的免疫活化效应,而不影响细胞的吞噬功能,为ST2825作为免疫抑制剂用于临床奠定了实验基础。
- 李超薛承彪杨涛李尧黄霞张利民李明强周平
- 关键词：髓样分化因子88免疫抑制剂
- 肝细胞癌中XIAP mRNA及蛋白表达的意义被引量：24
- 2004年
- 目的:通过检测XIAP mRNA及蛋白在肝细胞癌中的表达程度,探讨XIAP在原发性肝细胞癌发生中的作用. 方法:应用RT-PCR技术检测正常肝细胞株L-02,肝癌细胞株SMMC7721,HepG2和30例肝癌及其相应癌旁组织中XIAP mRNA的水平,同时应用免疫组织化学方法检测了上述细胞株及组织中XIAP蛋白的表达. 结果:三株细胞株均有XIAP mRNA的表达,XIAP/β-actin 均值分别为L-02:0.418±0.045,SMMC7721:0.719±0.1369, HepG2:0.654±0.055.其中L-02细胞株的XIAP mRNA水平显著低于SMMC7721及HepG2(P<0.05),两株肝癌细胞株的XIAP mRNA表达无显著性差异(P>0.05).三株细胞亦均有XIAP蛋白的表达,其细胞爬片平均光度分别为0.158±0.016,0.291±0.022,0.238±0.011,三株细胞的XIAP蛋白水平存在显著性差异(P<0.05).肝癌组织XIAP mRNA表达较癌旁组织显著升高,XIAP/β-actin均值分别为:0.587±0.064,0.313±0.059(P<0.05).免疫组化染色显示:XIAP蛋白表达主要集中在肝细胞胞质中,其在肝癌组织中的表达显著高于癌旁组织,平均光度分别为: 0.276±0.054.0.095±0.014(P<0.05). 结论:XIAPmRNA及其蛋白在肝癌组织及肝癌细胞系中表达水平明显升高,提示他可能是促进肝细胞恶变的—个重要因素.
- 陶璐薇林菊生陈孝平周鹤俊蔡晓坤李超
- 关键词：肝细胞癌XIAPMRNA蛋白RT-PCR技术
- PNP/MeP-dR系统对肝癌细胞杀伤作用的实验研究被引量：2
- 2006年
- 目的探讨新型嘌呤核苷磷酸化酶/6-甲基嘌呤-2′-脱氧核糖核苷(PNP/MeP-dR)自杀基因系统对肝癌细胞的杀伤作用。方法构建PNP基因真核表达载体pcDNA3.0/PNP,脂质体介导法将其导入HepG2细胞,利用G418筛选获得稳定转染PNP基因的细胞株HepG2/PNP。采用台盼蓝拒染法测绘细胞生长曲线,MTT法和FCM检测细胞对MeP-dR的敏感性及旁观者效应,HPLC检测PNP酶活性。结果HepG2/PNP细胞对MeP-dR十分敏感,作用4d后MeP-dR对HepG2/PNP的IC50为4.5μmol/L,而100μmol/L的MeP-dR即可最大限度地杀死HepG2/PNP细胞。100μmol/L MeP-dR作用8d后,混合细胞中HepG2/PNP比例仅占5%即可导致所有细胞死亡。HPLC结果显示,PNP基因产物能够将MeP-dR转化为6-MP。结论PNP/MeP-dR系统对肝癌细胞的杀瘤效果明显优于传统的自杀基因系统。本研究为该系统应用于肝癌体内治疗打下基础。
- 蔡晓坤周俊立林菊生孙雪梅薛秀兰李超
- 关键词：肝肿瘤转染基因疗法HEPG2细胞
