李耀林
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：南华大学医学院病原生物学研究所更多>>
- 发文基金：湖南省教育厅重点项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Daxx-C抗体的制备及其在HPV16阳性宫颈癌细胞中的初步应用
- 目的：研制Daxx-C抗体，观察Daxx在人乳头瘤病毒16型(HPV16)阳性宫颈癌组织中的分布，分析Daxx与ATRX在Caski细胞中的定位和共定位，为进一步探讨Daxx在HPV16所致宫颈癌进程中的作用及其机制奠定...
- 李耀林
- 关键词：人乳头瘤病毒宫颈癌
- 文献传递
- Daxx-C抗血清的制备与纯化及初步应用被引量：1
- 2013年
- 将含有Daxx-C端的融合蛋白6His-DM626—740纯化物免疫小鼠,分析抗血清效价并将其纯化,为进一步分析Daxx在人乳头瘤病毒16型(HPV16)阳性宫颈癌组织中的分布奠定基础。将6His-DM626—740纯化物以皮下多点注射和腹腔注射方式免疫接种4只8周龄雌性BALB/c小鼠,初次免疫3周后,加强免疫1次,以后每周加强免疫1次;共免疫4次。每次免疫前及末次免疫后7 d取血,ELISA测定抗体效价。饱和硫酸铵盐析沉淀法初步纯化抗血清,并用Western blot检测之。培养Caski细胞,利用间接免疫荧光试验观察Daxx在细胞中的分布与定位。纯化物免疫小鼠后,制备的Daxx-C多克隆抗体效价为1∶6 400。纯化的抗血清能够与IPTG诱导表达的6His-DM626—740及其纯化物发生结合反应。在Caski细胞,显绿色信号的Daxx主要分布于胞浆,少数分布于胞核且在核膜附近荧光较强,呈区域性聚集。6His-DM626—740纯化物具有良好的免疫原性;纯化的抗血清可用来检测细胞中的Daxx。
- 王蓉李耀林何爱桃唐双阳万艳平
- 关键词：DAXX抗血清纯化
- 人乳头瘤病毒E2蛋白在细胞周期检测点中的作用研究进展被引量：2
- 2012年
- 人乳头瘤病毒(HPV)E2蛋白一直被认为是E6/E7的转录抑制因子与肿瘤抑制因子。近年研究发现,在HPV所致细胞转化过程中,E2蛋白与细胞有丝分裂检测点相互作用,影响Cdc20、Skp2和APC/C等活性,涉及纺锤体组装检测点,关系到细胞基因的稳定性。由于E2蛋白可能在HPV致癌中具有推动作用,因而有望成为防治高危型HPVs所致肿瘤的一个新靶点。
- 李耀林唐双阳万艳平
- 关键词：人乳头瘤病毒E2蛋白
- Daxx-C626-740原核细胞表达载体的构建与诱导表达
- 2013年
- 目的为了研制Daxx-C抗体并观察其在宫颈癌细胞中的应用效果,构建原核表达载体pET28a/DM626-740,将其在大肠杆菌中进行诱导表达,纯化表达产物,鉴定其抗原性。方法用PRIMER5.0软件设计Daxx-C基因片段(氨基酸626-740)特异性引物,引入BamHI和SalI酶切位点,PCR扩增目的基因。将PCR产物连入载体pMD18-T,构建pMD18-T/DM626-740;然后,将BamHI和SalI酶切产物连入载体pET28a,经酶切鉴定及DNA序列分析后,构建原核表达载体pET28a/DM626-740。将其转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,利用Ni琼脂糖凝胶层析柱纯化表达产物,Western-blot检测表达物与纯产物。结果双酶切和DNA测序结果显示,PCR正确扩增了Daxx-C基因片段并成功连入载体pET28a,构建了原核表达载体pET28a/DM626-740;该质粒在E.coli中诱导表达分子量约19kDa目的蛋白,且该蛋白能被抗Daxx抗体检出。结论构建的原核表达载体pET28a/DM626-740能在E.coli中表达目的的蛋白6His-DM626-740,并具有良好的抗原性。
- 李耀林周艺何爱桃唐双阳王蓉万艳平
- 关键词：DAXX纯化抗原性
