李春梅
- 作品数：35 被引量：190H指数：10
- 供职机构：湖南中医药大学更多>>
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- 基于激光解析/离子化-飞行时间质谱技术的中药阿胶蛋白质组分析被引量：27
- 2007年
- 目的:应用激光解析/离子化-飞行时间质谱技术对传统中药阿胶蛋白/肽成分进行蛋白质组初步分析,建立阿胶蛋白质质量指纹图。方法:实验于2004-06/2005-03在湖南中医药大学蛋白质组学实验室完成。采用饱和硫酸胺沉淀,透析脱盐冻干法获得阿胶水溶性蛋白/肽,采用Ciphergen BiosystemsInc.ProteinChipRBiology System(美国PBSⅡ+)及配套的NP10芯片、激光解析/离子化-飞行时间质谱技术,分析阿胶Mr1500～13000区间蛋白质、肽分布及其相对分子质量。结果:Mr2000～4000区间显示4个相对分子质量峰,可能是2种肽;Mr4000～5000区间显示8个相对分子质量峰,可能为2种肽;Mr5000～5500区间显示16个相对分子质量峰,约为3种肽;Mr5500￣6200区间无峰;Mr8100～8200区间显示5个相对分子质量峰,可能为1种肽;Mr11200～11400区间显示5个相对分子质量峰,可能为1种蛋白质。不同质量浓度稳定获得的有意义蛋白/肽共计9个。不同相对分子质量肽之间差分别提示可能为丙氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸残基相对分子质量。结论:通过分析,可以形成阿胶蛋白质/肽成分质量指纹图,可作为阿胶数字化质控标准;并为进一步分离、纯化及验证阿胶功能相关活性蛋白质/肽组分提供可靠信息。
- 王若光尤昭玲刘小丽刘惠萍秦明春李春梅胡维新
- 关键词：阿胶蛋白质蛋白质组
- 黄芪丹参复方成分对一氧化氮合成阻滞孕鼠胎盘滋养细胞单核细胞趋化蛋白mRNA表达的影响被引量：10
- 2005年
- 目的研究黄芪丹参复方成分提高胎盘血供的分子机制,为临床有效防治胎盘血供不足所致妊娠并发症提供思路。方法提取分离黄芪丹参复方有效成分,运用一氧化氮合酶(NO S)阻滞剂L-精氨酸甲酯(L-NAM E)制备一氧化氮合成阻滞大鼠模型,核酸原位杂交法检测胎盘局部滋养细胞单核细胞趋化蛋白-1(M CP-1)mRNA表达的变化。结果一氧化氮合成阻滞模型组滋养细胞M CP-1 mRNA表达染色明显增强,空白组、黄芪丹参复方成分治疗组及硝酸甘油对照组均能减弱M CP-1 mRNA的表达,与模型组比较差异显著(P<0.01)。结论黄芪丹参复方成分降低母胎界面妊娠免疫反应,阻抑胎盘免疫病理损伤,可能与抑制M CP-1 mRNA表达及母胎界面炎性细胞游走、浸润有关,是其能够提高胎盘血液供应的机制之一。
- 王若光尤昭玲陈学东李春梅贺福元刘小丽刘惠萍
- 关键词：一氧化氮滋养细胞丹参胎盘
- 功能失调性子宫出血中西医结合研究的关键与剖析被引量：18
- 2006年
- 目的探讨中西医结合对功能失调性子宫出血研究的关键与思路。方法分析功能失调性子宫出血中医认识的特色,功能失调性子宫出血临床证候特征以及方药作用规律,归纳功能失调性子宫出血病变的现代分子病理学特征。结果功能失调性子宫出血中医药证治具有一定规律性,基于现代分子生物学等技术,对功能失调性子宫出血证候实质及方药作用规律研究可能获取重要突破。结论功能失调性子宫出血是体现中医妇科学“调经”、“血证”等证治特色的重要疾病,应优先开展系统性研究,从而促进中西医结合在妇产科领域的发展。
- 王若光尤昭玲李春梅曾润清
- 关键词：功能失调性子宫出血证候方药蛋白质组学病理学
- 中药土鳖虫基于SELDI-TOF技术的蛋白质组分析
- 目的：对传统中药土鳖虫蛋白肽成分进行蛋白质组初步分析,建立阿胶蛋白质质量指纹图。方法：采用饱和硫酸胺沉淀,透析脱盐冻干法获得阿胶水溶性蛋白肽,采用Ciphergen BiosystemsInc.ProteinChip o...
- 李春梅王若光尤昭玲刘小丽刘惠萍熊德慧胡维新
- 关键词：蛋白质组
- 文献传递
- 黄芪丹参复方成分对一氧化氮合成阻滞孕鼠模型血浆IL-1、IL-10变化的影响
- 2005年
- 目的探讨黄芪丹参复方成分提高胎盘血供的分子机制,为临床有效防治胎盘血供不足所致妊娠并发症提供思路。方法提取分离黄芪、丹参复方成分,运用NOS(一氧化氮合酶)阻滞剂L—精氨酸甲酯(L—NAME)建立一氧化氮合成阻滞大鼠模型,ELISA法检测妊娠18 d大鼠血浆IL—1I、L—10水平,以及胎盘超微形态学变化,大鼠血压、尿蛋白变化,以及仔鼠重、肝重、脑重、胎盘重等。结果一氧化氮合成阻滞模型组IL—1含量明显高于空白组(P<0.01),经黄芪丹参注射液治疗后,血浆IL—1水平比模型组降低(P<0.05);模型组IL—10含量较空白组低(P<0.01),中药组血浆IL—10水平高于模型组(P<0.05);胎盘形态学、血压、尿蛋白以及仔重、仔肝重、脑重等均有显著差异(P<0.05,P<0.01)。结论黄芪丹参复方成分可能对妊娠早期母—胎界面免疫平衡具有调控作用,通过促进局部生理抑制性免疫反应增强和杀伤、排斥免疫反应减弱,从而有利于母胎循环构建,维持胎盘血液供应。
- 喻丽雅王若光尤昭玲李春梅曾润清余建
- 关键词：妊娠高血压一氧化氮丹参
- 以蛋白质芯片为中药蛋白质/肽相互作用载体分析羚羊角的生物学特征被引量：6
- 2009年
- 目的对传统中药羚羊角水溶液中蛋白质/肽成分进行蛋白质组分析。方法采用饱和硫酸胺沉淀,透析脱盐冻干法获得经煎煮或冷浸的羚羊角蛋白质/肽,美国Ciphergen Biosystems Inc.ProteinChip○R Biology System(PBSⅡ+)及配套的NP10芯片,激光解析/离子化-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS,Surface enhancedlaser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry)技术,分析羚羊角水溶液中1500～13000Da间蛋白质/肽分布及其分子量。结果共计得出25个蛋白质/肽分子量峰,分子量部分差值与某些氨基酸残基分子量相近。并且在煎煮和冷浸两种方法中显示出部分蛋白质/肽分子量相近,说明可能属同一肽段。为筛选羚羊角的活性效应成分提供了有价值的线索。结论通过分析,可以形成羚羊角水提液或水煎液蛋白质/肽成分质量指纹图(PMF),并作为羚羊角数字化质控标准,为分离、纯化及验证羚羊角功能相关活性蛋白质/肽成分打下基础。
- 张烨王若光王陆颖刘小丽刘惠萍李春梅尤昭玲胡维新
- 关键词：羚羊角蛋白质蛋白质组
- 黄芪丹参复方成分对妊高征模型孕鼠胎盘滋养细胞eNOS及VEGF mRNA表达的影响研究被引量：11
- 2005年
- 目的 研究黄芪丹参复方成分提高胎盘血供的分子机制,为临床有效防治胎盘血供不足所致妊娠并发症提供思路。方法 提取分离黄芪、丹参有效复方成分,运用一氧化氮合酶(NOS)阻滞剂L-精氨酸甲酯(L-NAME)制作一氧化氮合成阻滞大鼠模型,黄芪丹参复方成分妊娠同步干预,核酸原位杂交技术检测妊娠18 d胎盘滋养细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达变化。结果 中药治疗组、对照组、空白组eNOS mRNA表达明显高于模型组(P<0.01)。一氧化氮合成阻滞模型VEGF mRNA表达与空白组、中药治疗组、硝酸甘油治疗对照组相比均明显降低(P<0.01)。结论 黄芪丹参复方成分可能提高胎盘滋养细胞NO合成与释放入循环,促进胎盘血管网络形成,从而维持妊娠期胎盘循环的高流速、低阻力状态,达到有效防治妊娠高血压综合征及胎儿宫内生长迟缓等胎盘血供不足类疾病的目的。
- 王若光尤昭玲刘小丽贺福元李杰陈学东李春梅
- 关键词：胎盘滋养细胞丹参
- 滋养层细胞原代体外培养体系的建立被引量：7
- 2006年
- 目的 改善体外分离、培养人早孕绒毛细胞滋养层细胞（cytotrophoblast CTB）的方法，并对其进行鉴定，探讨CTB的一些生物学特性。方法 取人工流产6～8周妊娠绒毛，机械法分离，复合酶消化，差速贴壁法纯化细胞后继续培养。倒置显微镜观察其大体形态及体外转化，HE染色观察其胞核情况，免疫细胞化学观察细胞的细胞角蛋白18（cytokeratin CK18）、波形蛋白（vimentin Vim）和人胎盘催乳素（human placental lactogenh PL）的表达。流式细胞仪测定其细胞周期。结果分离培养的CTB呈不规则多角形片状，单层铺展生长。所有的细胞都表达CK18，Vim只在部分细胞表达，hPL免疫反应阳性物质在胞浆表达。细胞周期显示约有58％的细胞处于G0／G1期。结论 成功分离培养了人早孕绒毛CTB，方法简便易行，获得的细胞形态单一、生长稳定，为进一步研究CTB在妊娠生理和妊娠免疫耐受中的作用提供了实验基础。
- 刘惠萍王若光李春梅李宾玲曾润清秦明春易鹏飞
- 关键词：滋养层细胞免疫细胞化学细胞培养生物学特性
- 黄芩苷对TNF-α诱导下人脐静脉血管内皮细胞影响的初步研究被引量：7
- 2014年
- 目的研究TNF-α和黄芩苷对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)活力的影响及黄芩苷对体外TNF-α诱导培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响。以期从血管内皮细胞的角度探讨黄芩清热安胎的机理。方法选取不同浓度的TNF-α作用于HUVEC,四甲基偶氮唑盐(3-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT)比色实验分析TNF-α对HUVEC细胞活力的影响。选取不同浓度的黄芩苷作用于HUVEC,培养24 h后,MTT比色实验分析黄芩苷对HUVEC细胞活力的影响。选取TNF-α作用浓度10ng/ml造模及原液1000倍稀释液的黄芩苷溶液作用于HUVEC,MTT比色实验和流式细胞术分析黄芩苷对HUVEC凋亡的影响。结果 TNF-α作用后的HUVEC活性(A值)均低于于空白对照组,并且随着TNF-α浓度越大,A值越小。10、50ng/ml浓度TNF-α作用后HUVEC与空白对照组比较差异有显著性,P<0.05。黄芩苷作用后的HUVEC活性(A值)高于于空白对照组。黄芩苷作用后的HUVEC活性(A值)高于凋亡模型组,差异具有显著性,P<0.05。流式细胞术示黄芩苷作用后的HUVEC凋亡率低于凋亡模型组。结论 TNF-α明显抑制细胞增殖分裂的过程,诱导细胞凋亡。黄芩苷对HUVEC的生长增殖具有一定的促进作用。而黄芩苷对TNF-α诱导培养的HUVEC凋亡有抑制作用。
- 秦明春王若光尤昭玲李春梅贺兰匡继林刘小丽
- 关键词：黄芩苷流式细胞术人脐静脉血管内皮细胞
- 人脐静脉内皮细胞的体外分离培养及鉴定被引量：18
- 2007年
- 目的探讨人脐静脉内皮细胞的原代培养方法,提高体外分离培养血管内皮细胞的成功率。建立血管内皮细胞培养模型,为体外研究血管内皮细胞提供实验基础。方法取2根脐带(至少20 cm)冲净淤血,采用加工穿刺针固定脐静脉灌注消化液,一根用0.2%胶原酶Ⅱ,另一根用0.1%胶原酶Ⅰ和0.25%胰酶等比混合消化液,比较两种酶的消化效果。收集细胞并用含有10 ng/mL的VEGF的培养基中培养,观察细胞的生长及传代。并在倒置显微镜下观察细胞的形态学特点,同时用免疫组织化学的方法对所得细胞进行鉴定。用流式细胞术观察细胞周期。结果两种消化酶方法均获得了相当数量的人脐静脉内皮细胞,胶原酶Ⅱ的消化效果稍优于混合消化酶,且比较理想的消化时间均为13 min,细胞接种后4～5 h开始贴壁生长,1周左右可生长成单层,光镜下呈多角形,"铺路石"样排列,免疫组织化学法可见内皮细胞胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应。细胞周期显示约有50.6%的细胞处于G0/G1期。结论胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅰ与胰酶等比混合消化液灌注法是获得脐静脉内皮细胞的一种可取方法,而胶原酶是分离培养脐静脉内皮细胞的首选消化液,成功率高,可靠性大,可成功构建体外研究血管内皮细胞的模型。
- 秦明春王若光秦莉花刘小丽李春梅刘惠萍叶赞
- 关键词：人脐静脉内皮细胞细胞培养流式细胞术细胞周期
