以Remazol brilliant blue R染色牛颈韧带弹性蛋白粉,制成染色弹性蛋白。底物稳定性好,在较宽pH范围内染料不易洗脱。以弹性蛋白-RBB为底物,建立了一种能在较宽pH范围内测定制革蛋白酶的弹性蛋白水解活力方法。确定酶活测定条件:反应时间为30min,温度为40℃,基于5mg底物量,待测酶液中弹性蛋白酶活在90～160U/mL范围内,水解液的吸光度与酶的浓度呈良好的线性关系。方法重线性较好。几种常用制革蛋白酶在不同pH下测定的结果表明,一些细菌蛋白酶显示出较高的弹性蛋白酶活力,最适作用pH值在9左右。
以活性染料Remazol brilliant blue R(RBB)对皮粉进行染色,制备了在较宽的pH范围内稳定的热变性染色皮粉。研究了反应时间、底物和蛋白酶浓度等因素对酶催化染色皮粉水解速度的影响,建立了一种基于变性皮粉-RBB底物的蛋白酶活力检测方法。用建立的方法,对几种常用的制革蛋白酶进行酶活力测定,并与常用的基于酪素底物的福林法和LVU法进行对比,结果表明:对于大部分蛋白酶,2种底物检测结果有较大差异。
