李国辉
- 作品数：34 被引量：71H指数：5
- 供职机构：江苏大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 家蚕二分浓核病毒DNA聚合酶基因启动子P97的研究
- 2013年
- 家蚕浓核病毒2型(BmDNV-2)已被正式命名为家蚕二分浓核病毒(BmBDV),该病毒致使家蚕罹患浓核病。BmBDV是目前已知唯一能够编码DNA聚合酶的ssDNA病毒,DNA聚合酶的表达对该病毒复制至关重要。使用双荧光素酶报告系统检测BmBDV DNA聚合酶基因启动子P97的活性以及病毒潜在的调控蛋白或宿主的互作蛋白对P97的调控作用。BmBDVDNA聚合酶翻译起始位点上游286 nt序列具有启动子活性,但其活性比病毒非结构蛋白NS1基因启动子P5的活性弱。共转染瞬时表达病毒的NS1蛋白使P97启动子活性降低,而病毒的结构蛋白VP则可提高P97启动子活性;宿主家蚕的转录因子Twist蛋白的表达能够提高P97启动子的活性,但其调控作用较小。
- 马瑛吕鹏张苗苗胡朝阳李国辉陈克平姚勤
- 关键词：DNA聚合酶活性
- 在枯草杆菌芽胞表面展示P74蛋白膜外肽段被引量：1
- 2012年
- 目的:对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)囊膜蛋白P74膜外肽段与枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)CotC与进行融合表达,制备表面展示有P74蛋白的重组芽孢,为深入研究该重组芽孢的功能提供基础。方法:将CotC基因与BmNPV P74膜外编码序列进行融合,构建表达CotC-P74融合蛋白的重组质粒pJS700-p74。通过双交换使该重组质粒中的CotC-P74表达盒整合到枯草芽胞杆菌染色体淀粉酶基因位点,并对发生同源重组后的菌株进行筛选和PCR鉴定。结果:PCR结果表明CotC-P74成功地整合到枯草芽孢杆菌基因组上,通过作者实验室制备的P74多抗对诱导后的重组芽孢衣壳总蛋白进行Western blot分析,结果在49 kDa位置处能杂交到一条特异的蛋白带。结论:P74蛋白胞外肽段成功地展示在枯草芽胞杆菌芽胞表面。
- 李国辉王鹏唐琦胡朝阳黄国平
- 关键词：家蚕核型多角体病毒枯草芽孢杆菌芽孢
- 人巨细胞病毒编码miRNA功能及其作用机制被引量：2
- 2018年
- 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是疱疹病毒β亚科中的代表成员之一,是一种具有囊膜包裹的DNA双链病毒,对免疫耐受群体和先天性感染的婴幼儿具有很高的发病率。HCMV具有潜伏感染和裂解感染两种感染状态。这两种感染过程中均有不同的miRNA表达模式。这些miRNA不仅参与胞内宿主或病毒自身基因表达调控与病毒复制,也能调节胞内物质的转运和病毒感染状态的转变等过程。本文就HCMV编码的miRNA,其生物合成机制和生物学功能进行简要综述,为深入研究其生物功能和作用机制奠定基础。
- 唐琦吴鹏李国辉
- 关键词：疱疹病毒人巨细胞病毒MIRNA
- 昆虫氨基酸转运蛋白的分类与功能
- 2021年
- 氨基酸是一类在生物体内参与蛋白质合成、细胞生长调节等生理功能的重要小分子物质,也是一些重要生理活性物质的前体。氨基酸的跨膜转运受氨基酸转运蛋白的调节,氨基酸转运蛋白通常能够转运具有相似结构的多种氨基酸。昆虫的氨基酸转运蛋白可分为8个家族,在营养吸收、物质转运、神经系统调节、信号途径调控和病毒感染等方面具有多种重要功能。本文简要综述昆虫氨基酸转运蛋白的分类和功能,为家蚕和其他昆虫的生理及病理研究提供参考。
- 胡朝阳申佳敏刘庆森李国辉陈克平姚勤
- 关键词：昆虫
- 细小病毒非结构蛋白NS1功能的研究进展被引量：5
- 2010年
- 介绍了细小病毒非结构蛋白NS1的生化特性,综述了近年来NS1蛋白与病毒复制、宿主细胞凋亡之间以及与基因表达调控之间的关系,并对NS1蛋白的进一步研究提出了建议。
- 张俊红李国辉陈慧卿黄国平姚勤
- 关键词：细小病毒非结构蛋白NS1
- 家蚕细小病毒样病毒的研究进展
- 2012年
- 家蚕细小病毒样病毒（Bombyx在mori parvo-like virus，BmPLV）是一种二分病毒，该病毒在家蚕中肠柱状细胞核内复制和包装，感染的细胞核呈现过分膨胀、细胞核孚尔根浓染等细胞病理学特征。。病毒粒子直径20-24nm，无囊膜呈球型。基因组为单链线性双分子DNA（VD1、VD2），分别独立包装在各自的衣壳中。病毒编码四个非结构蛋白NS1、NS2、NS3和pol（DNA聚合酶），一个主要结构蛋白VP及次要结构蛋白P133。其基因组末端反向重复序列可形成与BmPLV复制有关的“锅柄形”结构，以及含自身编码的DNA聚合酶的序列，推测该病毒与腺病毒复制方式相类似，依靠共价蛋白为起始物完成复制。
- 李光田郭旭丽朱守林马瑛胡朝阳李国辉陈克平姚勤
- 关键词：中肠DNA聚合酶
- 家蚕两种主要病毒的分子基础及病毒与宿主的相互作用
- 姚勤陈克平胡朝阳李国辉刘晓勇张春霞周阳申红星唐琦
- 该项目重点揭示了家蚕二分浓核病毒(Bombyx mori bidensovirus, BmBDV)基因组结构、基因表达调控策略、基因功能以及家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovir...
- 关键词：
- 关键词：家蚕基因表达分子育种技术
- 家蚕二分浓核病毒VD1-ORF4基因在两类表达系统中的表达分析
- 2015年
- [目的]为获得家蚕二分浓核病毒(Bm BDV)VD1-ORF4编码的可溶性蛋白,对该序列在两类表达系统中进行表达。[方法]在原核系统中,将靶基因克隆入载体p MAL-c2X中,使麦芽糖标签序列与靶基因5’端融合,将融合后的重组质粒转化大肠杆菌BL21,进而对其进行IPTG诱导,对诱导后的表达产物进行Western blotting分析;在真核表达系统中,以笔者实验室改造的Ac-Bacmid为分子载体,通过转座,将多角体启动子控制的VD1-ORF4表达盒定点插入到载体中,在脂质体的介导下,将整合型重组杆粒转染Sf-9细胞,将转染上清感染Sf-9细胞,并对其总蛋白进行Western blotting分析。[结果]在两类表达系统中,都只鉴定到Bm BDV VD1-ORF4部分序列的表达,其融合表达产物大小都约70 kDa。[结论]获得Bm BDV VD1-ORF4截短蛋白,为其功能研究奠定基础。
- 李国辉周倩徐五胡朝阳姚勤
- 关键词：杆状病毒
- 杆状病毒ac68基因的克隆、表达与抗体制备
- 2010年
- 目的:对苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa califorica multicapsid nucleopoly hedrovirus,AcMNPV)开放阅读框68(open reading frame,ORF68,ac68)进行原核表达,制备该蛋白的多克隆抗体,为深入研究其功能提供基础。方法:将ac68基因克隆至原核表达载体pET28a上,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达Ac68蛋白,通过His抗体检测进一步验证所表达的蛋白为带有组氨酸的融合蛋白。以纯化的Ac68蛋白作为抗原,免疫昆明小鼠制备多克隆抗体。结果:实现了ac68基因的原核表达,获得了该蛋白的多克隆抗体并在AcMNPV感染的Sf-9细胞中检测到一条大小为25kD左右的特异杂交带。结论:获得的抗体可用于Ac68蛋白功能的进一步研究。
- 李国辉陈慧卿黄国平
- 关键词：苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒原核表达抗体
- 家蚕二分浓核病毒NS1蛋白的表达及定位
- 2015年
- [目的]在Bm N细胞中表达家蚕二分浓核病毒(Bombyx mori bidensovirus,Bm BDV)非结构蛋白NS1,并分析其亚细胞定位。[方法]在病毒非结构蛋白NS1基因5'端加上kozak序列、3'端融合Flag标签序列;将重组序列克隆至昆虫细胞表达载体pIBV5/His上,转染BmN细胞,通过Western blot和免疫荧光检测NS1蛋白的表达和亚细胞定位。[结果]PCR和酶切鉴定显示重组表达载体构建正确;Western blot检测到一条大小约37 kDa的特异条带,免疫荧光分析显示表达的蛋白主要定位于细胞核中。[结论]构建的真核表达质粒能在BmN细胞中稳定表达NS1蛋白,该蛋白主要定位在细胞核中。
- 张清张晓龙李国辉姚勤胡朝阳
- 关键词：亚细胞定位
