李俊宝
- 作品数：31 被引量：171H指数：9
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省应用基础研究计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 利用PCR法鉴定产SLT-IIe大肠杆菌被引量：30
- 1999年
- 类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体（ Ｓｈｉｇａｌｉｋｅ Ｔｏｘｉｎ Ⅱ Ｖａｒｉａｎｔ， Ｓ Ｌ ＴⅡｖ ｏｒ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ），是仔猪水肿病的主要致病因子。根据 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 基因序列，合成一对针对 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 操纵子基因保守区的寡核苷酸引物，建立了聚合酶链式反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）扩增方法。通过对产 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 毒素大肠杆菌菌株 Ｔ Ｂ１、产 Ｓ Ｌ ＴⅡ毒素大肠杆菌菌株 ９３３ Ｗ 和产 Ｓ Ｌ ＴⅠ毒素大肠杆菌菌株 Ｈ３０ 的试验，结果表明用所设计的引物建立的 Ｐ Ｃ Ｒ方法可特异性鉴定产 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 大肠杆菌。用此法对本实验室从患水肿病仔猪肠道分离的 １５ 株大肠杆菌进行了鉴定，结果可从 １５ 个菌株的 １２ 株中扩增到 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 的特异性保守序列基因片段，而其它菌株未见此保守序列的基因片段。
- 徐建生成大荣董国雄李俊宝
- 关键词：水肿病大肠杆菌PCR
- 志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位及酶活性部位的基因缺失、突变株表达产物免疫生物学特性被引量：3
- 2004年
- 重组志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位pGEX＿Ansp及其酶活性部位的基因缺失株pGEX＿Ade及突变株pGEX＿Amu转化的大肠杆菌经诱导后,表达产物经超声波裂解并滤过除菌。ICR小鼠腹腔注射三种重组质粒转化菌诱导后菌体裂解物的除菌滤液,以检验重组表达产物的毒性和免疫原性;在Vero细胞上检测重组菌表达产物对Vero细胞的半数致死量(CD50)及免疫鼠血清对SLT＿Ⅱe毒素的中和实验三方面来比较pGEX＿Ansp、pGEX＿Ade和pGEX＿Amu的生物学特性,结果表明这三种基因工程菌表达产物经腹腔注射后可以诱导机体产生一定程度的保护性抗体。在Vero细胞上,pGEX＿Ansp的表达产物可在一定程度上使Vero细胞产生细胞病变,pGEX＿Amu的表达产物可在一定程度上抑制Vero细胞单层形成时间,而pGEX＿Ade对Vero细胞的生长无影响。
- 徐建生成大荣陈雷董国雄李俊宝
- 关键词：毒性免疫原性
- 鹅曲霉菌病的诊断和防制被引量：2
- 2000年
- 芦银华董国雄李俊宝
- 关键词：鹅曲霉菌病症状
- 猪水肿病菌株毒素的抽提、鉴定和产毒量比较被引量：9
- 1998年
- 对分离自江苏、上海等地的１５株仔猪水肿病菌株进行了毒素抽提，细胞毒性和动物试验鉴定结果表明，其中１４株能产生水肿病毒素（ＳＬＴ－Ⅱｖ），说明水肿病的发生与毒素密切相关。本文比较了这些菌株的产毒量，筛选出４株高产毒素菌株。
- 朱建中董国雄李俊宝杨鹭花
- 关键词：水肿病毒素抽提
- 猪水肿病毒素B亚单位的表面表达被引量：3
- 2002年
- 用聚合酶链式反应 (PCR)技术 ,从大肠杆菌PPSLT_ⅡeB中扩增出猪水肿病素 (SLT_Ⅱe)的B亚单位基因 (slt_ⅡeB)的 2 0 4bp的编码序列。将此PCR扩增产物按预定的阅读框架克隆进质粒表达载体PZSPAX ,并转化到大肠杆菌HB10 1中 ,筛选到含有slt_ⅡeB的重组质粒PZBSPAX。将重组质粒PZBSPAX进行序列分析 ,结果表明 :重组质粒PZBSPAX中的插入序列与发表的slt_ⅡeB是一致的 ,证明PZBSPAX就是含有slt_ⅡeB的重组表达质粒。含有重组质粒PZBSPAX的大肠杆菌HB10 1命名为重组大肠杆菌PZBSPAX。通过在不同温度条件下、不同培养时间情况下、不同IPTG诱导条件下 ,利用荧光抗体染色证明重组大肠PZBSPAX可表面表达预期的融合蛋白PP_SLT_ⅡeB_SPAX ;利用SDS_PAGE、Western_blot对重组大肠杆菌PZBSPAX的表达进行了分析 ,结果表明重组大肠杆菌PZBSPAX表达的融合蛋白PP_SLT_lleB_SPAX与预期大小一致 。
- 徐建生崔治中成大荣董国雄李俊宝
- 关键词：仔猪水肿病毒素B亚单位抗原性
- 类志贺毒素II型变异体B亚单位单抗的制备和初步应用被引量：8
- 2003年
- 将表达类志贺毒素II型变异体B亚单位融合蛋白的菌株ppSLT-IIeB在含氨苄青霉素的2×YTA培养基中培养,至对数生长期时加入IPTG诱导,诱导的重组菌超声波裂解后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明其已表达融合蛋白。用谷胱苷肽活化的Sepharose4B亲和层析柱纯化融合蛋白,测定纯化蛋白的浓度,免疫BALB/C小鼠,细胞融合后经ELISA检测,得到一株阳性杂交瘤细胞,命名为7C3-1,制备的单抗腹水ELISA效价为210,Westernblet结果表明此单抗仅与融合蛋白反应,而与载体蛋白不反应。利用此单抗检测18株水肿病菌株,发现有13株产类志贺毒素II型变异体。
- 严振龙董国雄李俊宝
- 关键词：B亚单位单克隆抗体融合蛋白水肿病
- 抗鸡大肠杆菌F11菌毛单克隆抗体的研制
- 2002年
- 将充分菌毛化的大肠杆菌C1976_79(pap +)经 4‰甲醛灭活作为免疫原免疫BALB/c小鼠 ,经淋巴细胞杂交瘤技术 ,用间接ELISA筛选获得FA1、FB11两株抗FB11菌毛单抗 ,其ELISA效价分别为 18log2 和 15log2 试管凝集价分别为 8log2 和 6log2 。免疫印迹实验表明 :两株单抗均能与鸡大肠杆菌F11菌毛反应 ,识别分子量为 18kD左右的菌毛蛋白。同时对猪病原性大肠杆菌进行检测 ,结果均无交叉反应。这表明F11菌毛是不同于K88、K99、987P、F4 1及F18等粘附素的一种大肠杆菌菌毛。
- 陈雷董国雄李俊宝徐建生成大荣
- 关键词：鸡致病性大肠杆菌单克隆抗体间接ELISA大肠杆菌病
- 致仔猪水肿病大肠埃希氏菌F_(107)菌毛抗原的提取及鉴定被引量：2
- 2002年
- 将致仔猪水肿病大肠埃希氏菌 10 7/ 86菌株在TSB、TSA培养基上传代 ,使之表达F10 7菌毛 ,大量收集菌毛化的细菌 ,利用热洗脱法提取菌毛抗原。粗提菌毛抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳可见一条约 15ku的条带 ,以染色凝胶为对照 ,将未染色凝胶上的菌毛抗原条带切下 ,进行提纯。经免疫印迹反应 ,证实其条带为F10
- 严振龙王欣之姜连连董国雄李俊宝
- 关键词：仔猪水肿病大肠埃希氏菌
- 类志贺氏菌毒素型变异体基因的克隆与鉴定被引量：6
- 1999年
- 用聚合酶链式反应(PCR)技术,从大肠杆菌TB1中扩增出类志贺氏菌毒素型变异体(SLTe)的A亚单位基因(slteA)的960bp的编码序列和B亚单位基因(slteB)的207bp的编码序列.将这两个PCR扩增产物在EcoR和BamH位点分别克隆进pUC18质粒载体,并转化到大肠杆菌TG1中,再根据限制性内切酶酶切分析筛选到含有slteA的重组质粒p18slteA和含有slteB的重组质粒p18slteB.将重组质粒p18slteA和p18slteB进行序列分析,结果表明:这两个重组质粒中的插入序列与发表的slteA和slteB是一致的。
- 成大荣徐建生董国雄李俊宝
- 关键词：仔猪水肿病基因克隆变异体
- 选择优良菌株用于仔猪水肿病疫苗的改进被引量：18
- 2002年
- 传统的仔猪水肿病疫苗 (目前市场上广泛使用 ) ,只是以致水肿病大肠杆菌菌株的O抗原为基础 ,而没有考虑水肿毒素SLT_lle抗原和菌毛F18抗原 ,其免疫效果难以提高。在仔猪水肿病疫苗的改进中 ,我们除了考虑O13 9、O18、O14 1菌体抗原之外 ,还利用PCR技术、单克隆抗体技术、电镜技术筛选了含有水肿毒素SLT_lle抗原和菌毛F18抗原的菌株。本研究中获得用于新一代仔猪水肿病疫苗的三型大肠杆菌菌株 :O13 9:SLT_lle+ :F18ab+ 、O13 8:SLT_lle+ :F18ab+ 以及O14 1:SLT_lle+ :F18ac+ 。
- 徐建生成大荣黄维嘉张迎春李俊宝董国雄
- 关键词：仔猪水肿病疫苗
