成光杰
- 作品数：9 被引量：22H指数：3
- 供职机构：湖南医科大学分子生物学研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 两种质粒转化方法的比较被引量：9
- 1996年
- 本文对一种快速质粒转化方法与传统质粒转化方法进行比较，发现前者每微克超螺旋质粒ＤＮＡ能获得１．３４×１０４～２．３６×１０５个转化子，且整个过程快速简便稳定，能满足一般的质粒克隆转化要求。
- 谭文斌成光杰罗建新谢慎思
- 关键词：质粒生物技术
- 见于我国人群的一例St^a血型糖蛋白被引量：3
- 1993年
- 在我国人群中筛查出一例疑似St^a血型糖蛋白(GP)变种。先证者为黎族男青年,属杂合子。家系调查表明,其遗传变异来自母亲。現借助限制性核酸內切酶图谱及一系列序列重叠的寡核苷酸探针,完成了其基因结构的鉴定,确证为見于我国的首例St^aGP变种。在其(δ-α)杂化基因的交叉点,δGP基因断裂于26号氨基酸残基附近,而αGP基因断裂则位于59号氨基酸残基附近。
- 卢义钦卢维敏成光杰王力飞
- 关键词：糖蛋白变种红细胞膜
- 人干细胞因子基因5′旁侧序列的克隆和功能研究被引量：4
- 2000年
- 人干细胞因子 ( human stem cell factor,h SCF)在多种哺乳动物干细胞的增殖、分化和移居中发挥重要作用 .利用改进的 PCR体系 ,从人类基因组 DNA中扩增出自 h SCF基因编码起始位点( + 1 81 )至 5′旁侧 - 1 1 90位点共 1 372 bp的片段 ,将其克隆至 p GEM- T载体中 ,经序列分析证明无误 .为探寻此片段中对转录调控起作用的具体区域 ,用基因缺失技术从 - 1 62 ( Bst X )位点向上游分别延伸至 - 2 73( Pst )、- 339( Sma )、- 381 ( Sac )、- 44 0 ( Eco R )、- 570 ( H inc )、-853( Bgl )及 - 1 1 90 ( Xho )等位点 ,共获 7个不同长度的 h SCF基因 5′旁侧序列片段 ,随后将这7个片段分别克隆入荧光素酶 ( luc)报告基因载体 p GL2 - Promoter.经阳离子脂质体包埋技术介导转染 He La细胞 ,培养 48h后检测 Luc活性 .结果表明 :h SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853区域对luc表达有明显的增强作用 ,而 - 339～ - 2 73区域则显示有抑制作用 .分别以包含这两个区域的片段为探针进行竞争性凝胶阻滞实验 ,结果均出现一个或多个特异性滞留区带 ,说明这两个区域存在转录因子的结合位点 .实验结果表明 ,h SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853区域富含 AT,是一典型基质结合区 ,而 - 339～ - 2 73区域为一新的沉默子 。
- 谭文斌聂怡玲郭小珊谭运年成光杰陈汉春朱定尔
- 关键词：人干细胞因子基因基因表达转录调控
- 重组人干细胞因子在大肠杆菌中的表达及活性鉴定被引量：6
- 1999年
- 采用ＰＣＲ方法从重组载体ｐＫＫＳＣＦ扩增出人干细胞因子（ＳＣＦ）基因ｃＤＮＡ片段，经亚克隆构建成表达载体ｐＥＴ１１ｄＳＣＦ，经限制性酶谱分析鉴定证实．继用ＩＰＴＧ诱导重组ｐＥＴ１１ｄＳＣＦ在大肠杆菌ＨＭＳ１７４（ＤＥ３）中表达，经初步纯化获得重组人ＳＣＦ蛋白质，经检测具有生理活性，对脐带血ＣＦＵ－ＣＭ和ＨＰＰ－ＣＦＣ增殖有明显刺激作用，为进一步的生物工程研究奠定了基础．
- 谭文斌成光杰李卫民李卫民朱定尔
- 关键词：干细胞因子基因表达生物工程
- 迎接人类基因治疗的时代到来被引量：1
- 1996年
- 遗传性疾病及肿瘤严重威胁人类的健康，本世纪７０年代以来分子生物学和重组ＤＮＡ技术的突飞猛进的发展，给人类基因治疗带来了曙光，一个崭新的基因治疗时代已经来临，我们必需做好充分的思想准备。本文简单介绍了基因治疗的方法、发展历史与最新进展，讨论了基因治疗目前存在的问题，探讨了发展对策。
- 成光杰朱定尔
- 关键词：基因疗法遗传疾病肿瘤
- 定量RTPCR中人干细胞因子的RNACRS的构建被引量：2
- 2000年
- 一种适用于定量RT PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术 ,构建人干细胞因子 (hSCF)基因的RNA竞争性参考标准 (RNA CRS)的新方法 :用RT PCR技术 ,从HepG2细胞中扩增出全长人hSCFcDNA ,并克隆入质粒pGEM T获重组的pGEMSCF载体 ,经ExonucleaseⅢ和S1核酸酶适当处理 ,以导致hSCFcDNA中一小片段缺失 ,由此获得重组 pGEMSCF模拟体 (mimic) ,经体外转录得到hSCFRNA CRS .测序表明 :该RNA CRS与hSCFmRNA比较 ,缺失了从第 4 99位至 60 8位共 110个核苷酸 ,但二者RT PCR反应可用同一对扩增引物 ,反应动力学极为相似 .这种hSCFRNA CRS可作为一种较理想的竞争性参考标准 ,适用于定量RT PCR中 ,以对重组hSCF在真核细胞中的表达水平进行准确的定量分析 .此方法亦可推广应用于其他真核基因的表达水平及
- 谭文斌聂怡玲罗赛群郭小珊成光杰陈汉春朱定尔public.cs.hn.cn
- 关键词：基因表达定量RT-PCR
- DNA足纹步移作图法
- 2001年
- 一种以PCR介导的、可对任意长度靶DNA片段上的核蛋白结合位点进行DNA足纹作图分析的新方法 .原理是 :采用被随机降解靶DNA分子作为模板 ,用标记的跨越整个模板的足够多条特异性引物进行单链扩增 .首先 ,利用某种化学试剂或酶如DNaseⅠ对已与蛋白质结合或未结合的双链靶DNA进行随机降解 ,在一定条件下使每一个DNA分子恰好只有一个位点被切割 .然后 ,这些被随机降解DNA分子即可作为模板 ,用同位素标记的跨越整个模板的足够多条特异性引物 (正向或反向 )进行单链扩增 .最后 ,扩增的单链产物通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影形成DNA片段梯队 ,而被蛋白质保护的位点则在DNA片段梯队中形成位置缺口 ,从而确定DNA与蛋白质相结合的精确位点 .该方法被应用对人干细胞因子基因 5′旁侧 - 1190～ - 2
- 谭文斌朱敏聂怡玲罗赛群成光杰胡维新彭兴华
- 关键词：聚合酶链式反应人干细胞因子基因
- 限制-修饰系统的克隆研究被引量：2
- 1992年
- 迄今为止,已有72种限制性核酸内切酶基因或(和)117种限制性核酸甲基化酶基因成功地克隆入大肠杆菌。本文综述了微生物体内限制-修饰系统基因克隆及获得这些克隆的方法;同时讨论了宿主细胞限制系统对克隆的影响。
- 成光杰强伯勤卢义钦
- 关键词：克隆
