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张维锋: 作品数：34 被引量：181H指数：7; 供职机构：山西省农业科学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金山西省回国留学人员科研经费资助项目山西省科技攻关计划项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学化学工程更多>>

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马铃薯纺锤块茎类病毒山西分离物侵染性克隆的构建被引量：6: 2012年; 马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viriod,PSTVd)侵染马铃薯会严重影响薯块的产量和品质。根据PSTVd的同源序列设计引物,以山西省马铃薯感病块茎中提取的总RNA为模板,经RT-PCR方法扩增出全长cDNA片段,将其克隆到质粒pBS-T载体上,进行序列分析。结果表明,该类病毒全长359 nt,能通过分子内序列互补形成致密的二级结构。以该序列作为种子序列进行Blast搜索,该序列与PSTVd荷兰分离物(GenBank登陆号:AY372400.1)的序列一致性为100%。将该序列与东北株系、河北株系及已公布的弱株系(GenBank登陆号:M14814.1)、强株系(GenBank登陆号:U23058.1)、中间株系(GenBank登陆号:AY937179.1)比对,有12个核苷酸具有多态性,其中有5个发生在致病区。将线性化的质粒pBS-PSTVd及其PSTVd的体外转录产物接种番茄矮红宝的无毒苗,20 d后接种株轻微显症,RT-PCR检测均呈阳性。将RT-PCR产物测序,其结果与接种的PSTVd原序列完全一致,证实构建的PSTVd山西分离物的克隆具有侵染性。; 白云凤闫建俊张耀张忠梁冯瑞云张维锋; 关键词：马铃薯纺锤块茎类病毒体外转录侵染性克隆

一种马铃薯高效无标记转基因技术的建立被引量：7: 2007年; 用农杆菌介导法转化马铃薯栽培品种紫花白的叶盘,通过1/4 MS培养基预培养、热激处理、低pH、高糖培养基共培养,之后利用PCR直接检测转化体,结果表明遗传转化效率可达5.1%,建立了马铃薯无标记转基因技术.该技术受基因型的限制小,用于其它3个不同的栽培品种东北白、晋薯7号和早大白,遗传转化效率亦达到了4.1%－8.3%.利用这项无标记转基因技术,在载体构建时就剔除了标记基因,遗传转化后直接分化培养,不必对转化细胞进行抗性筛选,缩短了遗传转化周期,省去了费时费力的标记基因剔除步骤,亦为重复转化聚合多个优良基因提供了便利.; 白云凤张维锋白冬梅王国英王茅雁; 关键词：马铃薯根癌农杆菌无标记

靶向番茄SlACS2基因CRISPR-Cas9sgRNA的设计和分析被引量：2: 2017年; 番茄为呼吸跃变型果实,伴随呼吸跃变产生大量乙烯,即系统II乙烯,易使番茄果实过熟,导致腐烂变质。SlACS2是番茄系统II乙烯合成的限速酶,通过CRISPR-Cas9基因组编辑系统修饰该基因,调控系统Ⅱ乙烯过量表达,将迟滞番茄过熟。本研究基于RNA-seq建立了SlACS2基因的数字表达谱,表明该基因呈果实特异性表达,在植株的根、茎、叶等部位不表达。SlACS2位于番茄1号染色体,含4个外显子和3个内含子。利用在线工具CRISPRdirect和CRISPR-P发现第1、2、3外显子分别具有18、9和11条sgRNA。其中,sgRNA1-14和sgRNA3-8及二者的近PAM的12 nt种子序列在番茄基因组是唯一序列,GC含量高于40%,不存在TTTT终止序列。BLAST结果表明,sgRNA1-14和sgRNA3-8与GenBank公布的8条SlACS2同源序列高度一致,位于该基因的保守区,而与SlACS4和SlACS6的同源序列存在多个SNP,预示这2条sgRNA可用于番茄不同品种SlACS2基因的靶向编辑,并可规避对SlACS家族其他同源基因的脱靶效应。; 白云凤张爱萍闫建俊贺飞燕张维锋冯瑞云刘江娜张西英; 关键词：番茄

合成生物学研究进展及应用前景被引量：2: 2011年; 化学合成基因组控制的细菌细胞的诞生,使合成生物学这一新兴学科再次引起了人们的高度关注。简要介绍了合成生物学的概念和主要研究进展,展望了合成生物学在环境治理、能源开发、人类疾病治疗等方面的巨大潜力,同时指出其面临的科学技术难题以及在生物安全等方面的问题。; 闫建俊白云凤张忠梁冯瑞云张维锋; 关键词：合成生物学

双链RNA和植物对病毒的抗性被引量：1: 2006年; 双链RNA能诱导转录后的基因沉默,是生物抵御病毒入侵、维持自身基因稳定的一种自我保护机制.把源自病毒的基因构建成反向重复结构转入植物体内,其转录出的RNA会通过分子内序列互补形成双链,将入侵病毒的同源序列降解,使转基因植株获得对病毒的高抗性.RNA干扰型抗病毒转基因植株中,转病毒基因的mRNA不存在或存在量很少,也不会翻译成有功能的病毒蛋白,因此不存在病毒RNA重组、异源包装及协生作用的潜在风险,具有较高的生物安全性.双链RNA抗病毒转基因正在成为一种高效、安全的植物抗病毒策略.; 白云凤王小琦白冬梅郭志华张维锋; 关键词：双链RNA 基因沉默抗病毒基因工程

利用人工诱导育性逆转配制蓖麻杂交种的方法: 利用人工诱导育性逆转配制蓖麻杂交种的方法,属蓖麻杂种优势利用的领域。本发明解决了雌株蓖麻自交纯化和繁衍后代的技术难题,主要利用人工诱导育性逆转产生的雄花,使雌株蓖麻自交繁育雌性系,与优良自交系搭配杂交组合,配制杂交种。本...; 郭志强王宏伟张维锋李红玉刘建军曹越; 文献传递

籽粒苋C4关键酶丙酮酸磷酸双激酶基因的原核表达及酶活性测定被引量：4: 2017年; 为了进一步探究籽粒苋丙酮酸磷酸双激酶(AhPPDK)蛋白的作用机制,构建了AhPPDK基因的原核表达载体,通过碱裂解提取质粒,经限制性内切酶酶切,采用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物,选择正确表达的阳性重组子,将测序正确的重组质粒p EASY-E1-AhPPDK转化菌株Transetta(DE3);利用IPTG诱导蛋白表达。SDS-PAGE凝胶电泳分析表明,重组AhPPDK能在大肠杆菌Transset(DE3)中高效表达,表达的重组蛋白质分子量约为108 k Da,与预期分子量相符,且为可溶性蛋白。利用紫外分光光度法测量结果表明,原核表达的AhPPDK具有酶活性,且上清粗酶液活性高于沉淀粗酶液。研究结果可为进一步探明AhPPDK蛋白的作用机制和转基因利用奠定基础。; 贺飞燕闫建俊白云凤冯瑞云张维锋; 关键词：籽粒苋原核表达酶活测定

籽粒苋AhNAD-ME的序列特征与表达被引量：2: 2014年; NAD(P)-苹果酸酶催化苹果酸氧化脱羧,产生丙酮酸和CO2,伴随NAD(P)的还原。在C4植物中,苹果酸酶参与了C4光合作用。本研究对克隆的双子叶C4植物籽粒苋NAD-苹果酸酶基因(AhNAD-ME)编码的氨基酸序列进行了生物信息学分析,结果表明,AhNAD-ME具有苹果酸酶的完整功能域,包括苹果酸N端结构域和苹果酸酶的NAD结合结构域;进化树表明,该序列属于NAD-ME的α亚基,该亚基定位于线粒体基质中。半定量RT-PCR分析表明,该基因主要在叶片和茎中表达,表达量随光照时间延长而增加。将AhNAD-ME基因重组到原核表达载体pEASY-E1中,电击法转化到大肠杆菌Transette(DE3)菌株中,IPTG诱导其高效表达,表达的融合蛋白的分子量与预期相符,主要以包涵体形式存在。; 白云凤聂江婷张忠梁李平张维锋闫建俊冯瑞云张耀; 关键词：籽粒苋原核表达

蓖麻拟三系配套技术的研究被引量：20: 1999年; 在研究雌株蓖麻遗传规律的基础上,利用其人工诱导条件下可发生育性逆转的特性,创建了核遗传型模拟三系配套的杂种优势利用技术体系,育成了雌株率达100%的蓖麻雌性系8937F及其保雌系,并培育出高产杂交种汾蓖5号、6号等投入大面积生产试种.; 张维锋梁一刚; 关键词：杂交种蓖麻育种

一种提高马铃薯对PVX病毒和PVY病毒双抗性的基因的构建方法: 本发明涉及一种基因的构建方法，具体为一种提高马铃薯对PVX病毒和PVY病毒双抗性的基因的构建方法，解决现有提高马铃薯对两种病毒的双抗性的方法存在的多种问题，包括以下步骤，将PVX外壳蛋白基因全序列cp上的保守基因片段与具...; 白云凤张维锋王国英; 文献传递

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