张枫
- 作品数：7 被引量：6H指数：2
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- TK-1和TIMP-1基因共表达抑制大鼠球囊拉伤后颈动脉内膜增生的实验研究
- 目的： 将介导人的TK-1和TIMP-1基因共表达重组腺病毒载体转染大鼠颈总动脉球囊拉伤后血管内膜增生模型，观察并比较单基因（Ad-hTK-1或Ad-hTIMP-1）载体或双基因共表达载体（Ad-hTK-1-hTIMP...
- 张枫
- 关键词：颈总动脉重组腺病毒载体
- 人组织激肽释放酶1和基质金属蛋白酶组织抑制物1基因共表达抑制大鼠颈动脉球囊拉伤后内膜增生
- 余惠珍张枫朱鹏立
- 人组织激肽释放酶1和基质金属蛋白酶组织抑制物1基因共表达抑制大鼠颈动脉球囊拉伤后内膜增生被引量：3
- 2016年
- 目的将介导人组织激肽释放酶1（hTK．1）和人基质金属蛋白酶组织抑制物1（hTIMP—1）基因共表达的重组腺病毒载体转染大鼠颈动脉球囊损伤模型，探讨其对颈动脉球囊损伤后血管内膜增生的影响及可能的机制。方法将46只雄性Sprague—Dawley大鼠按照体重编号后，采用随机数字表法随机分为假手术组（6只）、单纯拉伤组（8只）、对照病毒组（8只）、hTK-1组（8只）、hTIMP-1组（8只）和双基因组（8只）。除假手术组外，其余各组均构建大鼠颈动脉球囊损伤模型，并分别在大鼠球囊损伤处注射生理盐水、对照病毒、hTK-1重组腺病毒、hTIMP-1重组腺病毒、hTK-1和hTIMP-1-基因共表达重组腺病毒。14d后，处死大鼠并取材。苏木精-伊红（HE）染色后比较内膜增生程度；采用共聚焦免疫荧光观察hTK-1和hTIMP．1基因的表达；采用Westernblot检测hTK-1、hTIMP-1、基质金属蛋白酶2（MMP．2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达水平；采用免疫组织化学法检测内膜增殖细胞核抗原（PCNA）的表达水平。结果（1）单纯拉伤组、对照病毒组与假手术组比较，颈动脉内膜面积、内膜与中膜面积比值均较大，MMP-2、MMP-9和PCNA表达水平均较高（P均〈0．01）。对照病毒组与单纯拉伤组比较，颈动脉内膜面积、内膜与中膜面积比值、MMP-2、MMP-9和PCNA表达水平差异均无统计学意义（P均〉0．05）。（2）对照病毒组、hTK-1组、hTIMP-1组和双基因组的内膜面积分别为（0．160±0．010）、（0．110±0．015）、（0．121±0．016）和（0．081±0．008）mm^2，其中hTK-1组与hTIMP-1组间差异无统计学意义（P〉0．05），其余各组间差异均有统计学意义（P均〈0．01）；内膜与中膜面积比值分别为2．035±0．117、1．443±0．097、1．522±0．078和0．972±0．072，其中hTK-1组与hTIMP-1组间差异无统计学意义（P〉0．05），其余各组�
- 余惠珍张枫朱鹏立潘玮黄舒洁向红
- 关键词：血管内膜增生基质金属蛋白酶类
- 组织激肽释放酶改善大鼠心肌重塑的实验研究被引量：1
- 2014年
- 目的探讨重组腺病毒介导的人组织激肽释放酶(h TK1)基因过表达对大鼠心肌梗死后心肌结构、心肌胶原纤维以及新生血管的影响。方法结扎雄性Sprague-Dawley大鼠的左冠状动脉前降支,建立急性心肌梗死模型。将含h TK1基因的重组腺病毒(Ad-h TK1)和对照病毒(1×1010PFU)注射到心肌梗死部位及其周边区域。4周后处死大鼠,取出心脏、称量、切片;通过荧光显微镜观察心肌组织的绿色荧光表达;Western blot测定h TK1蛋白表达;HE染色观察心肌组织结构,天然猩红染色观察胶原含量、分布,免疫组化法检测新生血管密度。结果仅在Ad-h TK1组大鼠的心肌既有绿色荧光,又有h TK1蛋白表达。假手术组大鼠的心脏质量、左室质量、心肌胶原分布显著低于心梗模型组,新生血管密度明显高于模型组。但与对照病毒组相比,Ad-h TK1组大鼠的心脏质量、左室质量、左室质量指数和心肌胶原纤维含量明显降低(P<0.05),心肌结构和新生血管密度明显改善(P<0.05)。结论重组腺病毒介导的组织激肽释放酶基因过表达可改善心肌结构,增加梗死周围心肌的新生血管形成,改善梗死后心肌重构。
- 余惠珍朱鹏立黄舒洁向红潘玮张枫林帆
- 关键词：重组腺病毒心肌梗死心室重构
- 白藜芦醇对内皮细胞CD40分子和炎症因子IL-6和MCP-1的表达影响
- 目的：白藜芦醇具有抗炎和免疫调节的作用,本研究探讨白藜芦醇对肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞炎症因子IL-6、MCP-1和CD40分子影响。方法：用Ⅰ型胶原酶灌注消化法原代培养人脐静脉内皮细胞,以白藜芦醇...
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- 关键词：白藜芦醇CD40IL-6MCP-1脐静脉内皮细胞
- 含人组织激肽释放酶1和基质金属蛋白酶组织抑制物1基因共表达载体对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响被引量：3
- 2014年
- 背景和目的前期研究表明人组织激肽释放酶1（hTK1）基因过表达具有部分抑制血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和改善血管再狭窄的作用,但联合基质金属蛋白酶组织抑制物1（TIMP1）对VSMC增殖是否具有协同效应,目前尚不明了。本研究构建含双基因hTK1和hTIMP1的重组腺病毒载体,并观察其在大鼠VSMC中的表达,以及对VSMC生长增殖影响。方法采用限制性内切酶BglⅡ和SalⅠ,酶切含启动子CMV和hTIMP1基因片段的重组穿梭质粒,经PCR、连接、热激、转化等亚克隆至pDC316-hTK1质粒中,构建含双基因hTK1和hTIMP1的重组穿梭质粒。将骨架质粒和穿梭质粒于293A细胞包装重组腺病毒载体。感染大鼠VSMC后,采用RealtimePCR法、Western blot法检测目的基因转录、蛋白表达。细胞计数法和四甲基偶氮唑盐法（MTT）测定细胞增殖。结果经PCR、酶切和测序法证实,含双基因（hTK1和hTIMP1）的重组病毒穿梭质构建正确。在293A细胞中成功包装出重组腺病毒载体Ad-hTK1-hTIMP1。感染VSMC后,双基因（hTK1和hTIMP1）的转录水平表达呈现随感染复数（50~150 MOI）和时间（1~3d）依赖性地增加,目的蛋白（hTK1和hTIMP1）亦呈现浓度依赖性地高表达。与单基因载体（Ad-hTK1或Ad-hTIMP1）相比较,双基因载体可明显抑制血小板源性生长因子（PDGF）诱导的大鼠VSMC增殖（P〈0.01）,其峰值抑制率为45.7%。结论首次成功构建并包装重组腺病毒双基因载体Ad-hTK1-hTIMP1。感染细胞后,其目的基因和蛋白均呈现独立高表达,并具有协同抑制VSMC增殖的效应,为血管增殖性疾病的多基因干预治疗实验提供一个新工具。
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- 关键词：重组腺病毒载体血管平滑肌细胞细胞增殖
- TK1和TIMP1基因共表达载体的构建及其在大鼠血管平滑肌细胞中的表达被引量：1
- 2013年
- 目的构建含人组织激肽释放酶1(hTK1)和基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP1)基因的重组腺病毒载体,并观察其在大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)中的表达。方法选择相对应酶切位点,酶切含人TIMP1基因片段的原始质粒和腺病毒穿梭质粒pDC316,经连接、热激、转化等亚克隆而构建成重组穿梭质粒。之后,应用限制性内切酶BglⅡ/SalⅠ,酶切含启动子和hTIMP1基因片段,再通过回收片段以及连接、热激等步骤亚克隆至pDC316-hTK1载体中,构建含双基因(hTK1和hTIMP1)的重组病毒穿梭质粒。利用AdMax腺病毒Cre/loxP重组酶系统,将该质粒和骨架病毒质粒于293A细胞中同源重组包装产生双基因的重组腺病毒载体。采用Western blot测定在VSMCs中的表达。结果经PCR、双酶切和测序证实,重组病毒穿梭质粒pDC316-hTIMP1-EGFP和pDC316-hTK1-hTIMP1构建正确。在293A细胞里成功包装产生含双基因的重组腺病毒载体Ad5-hTK1-hTIMP1感染VSMCs后,hTK1和hTIMP1蛋白呈独立高表达,表达水平呈浓度依赖性增加。结论首次成功构建并包装了含双基因(hTK1和hTIMP1)的重组腺病毒载体,目的蛋白在VSMCs中呈现独立高表达。
- 余惠珍向红黄舒洁朱鹏立潘玮张枫
