宋豪
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪淋巴细胞趋化因子XCL1的电子克隆和编码区序列RT-PCR验证被引量：5
- 2008年
- 淋巴细胞趋化因子（XCL1）是C族趋化因子的一员，可由CD8＋T细胞、NK细胞、γδT细胞、肥大细胞等多种细胞产生，其趋化性主要作用于CD8＋T细胞和NK细胞。根据猪的EST数据库中猪XCL1基因序列，设计引物采用RT—PCR的方法从猪胸腺中扩增猪XCL1全基因序列，将其连接到pMD-19T载体上并测序，得到猪XCLl基因（GenBank登录号为EU743945）。猪XCL1cDNA大小为333bp，编码由110个氨基酸残基组成的多肽。该多肽序列含Chemokine-C、Chemokine、Chemokine-CC和SCY等功能域，与羊和人的氨基酸序列相似率分别为81．6％和68．4％。预测分析其为分泌蛋白，信号肽剪切位点在21A和22V。猪XCL1基因定位于猪4号染色体（CU468871），基因结构与人XCL1的相似，都由3个外显子组成。该基因ORF翻译起始处基本符合Kozak规则，ORF起始密码子上游同一相位有终止密码子，ORF后有1个加尾信号，预测得到4个可能的启动子，可能性高达85％～98％。总之，通过电子克隆与试验验证，成功地克隆了猪新基因XCL1。
- 宋豪张德礼
- 关键词：电子克隆淋巴细胞趋化因子反转录
- 猪新基因P58^IPK的分子克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：3
- 2011年
- 目的:分子克隆出猪P58IPK新基因,制备其多克隆抗体,为下一步研究流感病毒与宿主相互作用机制提供条件。方法:根据猪EST数据库,利用生物信息学方法,电子克隆猪P58IPK新基因;采用RT-PCR方法从猪淋巴组织分子克隆P58IPK基因完整开放阅读框(ORF),全长1 518 bp,编码505个氨基酸(GenBank登录号:HQ287801),并对其进行初步生物信息学分析;构建P58IPK原核表达载体pET-P58IPK,诱导表达并纯化重组的his-P58IPK融合蛋白,后免疫兔子制备多克隆抗体。结果:成功制备P58IPK多克隆抗体,通过双向琼脂扩散实验检测抗体有活性,ELISA鉴定血清中多抗效价达到1∶20 000,Western blot与免疫荧光检测反应特异性良好。结论:成功克隆猪新基因P58IPK,并制备了其多克隆抗体。
- 温俊歌宋豪孙岩郜原徐志坤薄联锋张德礼
- 关键词：多克隆抗体WESTERNBLOT免疫荧光
- 猪CDK9基因的克隆及其过表达对SUVEC细胞周期的影响被引量：2
- 2010年
- 【目的】克隆猪细胞周期蛋白激酶9(CDK9)基因,观察该基因过表达对猪脐静脉血管内皮细胞(SU-VEC)周期的影响。【方法】采用电子克隆方法筛选得到猪CDK9基因全长序列,并对其编码的蛋白进行生物信息学分析。利用RT-PCR方法从猪脾脏中扩增出包含完整开放读码框架(ORF)的CDK9 cDNA片段,将其与真核表达载体pEGFP-C1连接,构建重组真核表达载体pEGFP-CDK9。将pEGFP-CDK9以脂质体介导法转染至SUVEC细胞,采用绿色荧光标记和Western blot检测SUVEC细胞中CDK9基因的表达,用流式细胞仪检测转染CDK9基因后SUVEC细胞周期的变化。【结果】得到猪CDK9基因全长1820bp的cDNA序列,其ORF为1119bp,编码372个氨基酸;CDK9分子质量为42.76ku,等电点为9.04;CDK9基因定位于猪的1号染色体上。酶切和测序结果证明,重组真核表达载体pEGFP-CDK9构建成功。pEGFP-CDK9转染SUVEC细胞48h后,荧光显微镜和Western blot检测到目的基因序列在SUVEC细胞中成功表达;试验组各期SUVEC细胞比例与空载体组相比,差异无统计学意义(P>0.05),细胞周期未发生显著变化。【结论】克隆了猪CDK9基因,并在SUVEC细胞中成功进行了表达。CDK9基因的过表达未引起细胞周期发生显著变化,其可能并不参与细胞周期的调控。
- 张亚杰宋豪李艳丽孙柏孙岩张德礼
- 关键词：真核表达细胞周期
