孙瑾
- 作品数：7 被引量：13H指数：2
- 供职机构：郑州大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：广东省医学科学技术研究基金佛山市医学类科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 神经纤毛蛋白质1、存活素双基因联合沉默抑制鼻咽癌细胞生长增殖的研究
- 2023年
- 目的构建同时表达神经纤毛蛋白质1(NRP-1)和存活素(Survivin)双基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,通过体内外实验,观察其对鼻咽癌细胞CNE-2Z生长增殖的影响。方法构建同时表达NRP-1和Survivin双基因的质粒(Plasmid-1),并构建单独表达NRP-1和Survivin基因质粒(分别为Plasmid-2、Plasmid-3)。转染入鼻咽癌CNE-2Z细胞株,于荧光显微镜观察质粒转染及表达情况;以噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力;定量聚合酶链反应(PCR)及免疫印迹法(Western blot)在mRNA水平和蛋白水平上检测目的基因抑制作用。建立稳定转染裸鼠移植瘤模型,体内裸鼠成瘤实验观察质粒对肿瘤的抑制效果。原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测移植瘤细胞凋亡率。多组间比较采用单因素方差分析。结果通过测序证实重组shRNA真核表达载体构建成功。各重组质粒表达载体成功转染CNE-2Z细胞,可见大量的癌细胞表达绿色荧光。MTT显示细胞增殖受到抑制,且双基因干扰质粒对细胞增殖的抑制作用明显强于单基因干扰质粒,差异有统计学意义(0.209±0.021比0.392±0.013、0.384±0.014,F=354.121,P<0.05)。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)证实双基因联合沉默组和单基因沉默组均能有效抑制目的基因mRNA表达,双基因组NRP-1 mRNA(0.20±0.06)表达明显低于NRP-1单基因组(0.27±0.05),差异有统计学意义(F=198.437,P<0.05);双基因组Survivin mRNA表达(0.13±0.02)明显低于Survivin单基因组(0.17±0.01),差异有统计学意义(F=245.647,P<0.05)。Western blot检测结果双基因组对NRP-1和Survivin蛋白的表达抑制率分别为67.41%和79.24%,与单基因组比较均有统计学意义(F=129.354、216.411,P<0.05)。体内抑瘤实验证实,与NRP-1单基因干扰组[(0.628±0.013)cm3]、Survivin单基因干扰组[(0.601±0.301)cm3]比较,双基因干扰组[(0.205±0.002)cm3]瘤体积生长明显受到抑制,差异有统计学意义(F=49.214,P<0.05),抑瘤率为81.71%。TUNEL实验表明�
- 孙瑾宋英曹华桑建中
- 关键词：存活素短发夹RNA基因沉默
- shRNA沉默NRP-1基因抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的体内外研究被引量：4
- 2015年
- 目的 构建靶向神经纤毛蛋白质1（Neuropilin-1,NRP-1）的短发卡RNA （shRNA）表达载体,观察NRP-1对人鼻咽癌细胞系CNE-2Z细胞生长增殖的影响.通过体内裸鼠成瘤实验观察最优质粒对肿瘤的抑制效果.方法 根据NRP-1 mRNA序列设计并构建3个靶向NPR-1基因,并含荧光素标记的shRNA真核表达载体（pSilencer-shRNA1、pSilencer-shRNA2和pSilencer-shRNA3）;以脂质体Lipofectamine 2000转染的方法将shRNA表达质粒转导入CNE-2Z细胞及裸鼠瘤体内,于激光共聚焦荧光显微镜观察shRNA转染表达情况;以四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖活性;实时定量PCR（RT-PCR）检测NRP-1基因在mRNA水平表达的抑制作用;Western印迹法在蛋白水平上检测对目的基因的封闭效果.体内裸鼠成瘤实验观察质粒对肿瘤的抑制效果.结果 质粒成功转染CNE-2Z细胞及瘤体,可见大量的癌细胞表达绿色荧光.MTT实验证明NRP-1 shRNA抑制CNE-2Z细胞的生长增殖;RT-PCR结果表明NP-1的mRNA表达降低;Western印迹法结果验证目的基因蛋白同时表达下调;体内裸鼠成瘤实验证实转染6周后,转染组瘤体积生长较阴性对照组、空白对照组明显受到抑制[（0.599 ±0.002）比（1.141 ±0.013）、（1.165 ±0.308）cm^3,均P＜0.05],抑瘤率为48.6％.结论 表达shRNA的NRP-1基因特异的真核表达质粒能有效转染体内、外鼻咽癌细胞,沉默NRP-1基因能有效抑制鼻咽癌细胞生长增殖.为鼻咽癌基因治疗奠定了良好的实验基础。
- 孙瑾王亮娄卫华曹华田秀芬桑建中
- 关键词：NEUROPILIN-1
- 鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中以CD34标记微血管密度的测定被引量：6
- 2013年
- 目的探讨鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中测定以CD34标记微血管密度的临床意义,为鼻腔鼻窦鳞癌的早期诊断和抗血管治疗提供新的依据。方法检测41例鼻腔鼻窦鳞癌、20例鼻腔内翻性乳头状瘤以及10例鼻息肉患者中CD34的表达,并在此基础上进行微血管密度(MVD)监测。结果鼻腔鼻窦鳞癌、鼻内翻性乳头状瘤和鼻息肉组织间质血管内皮细胞均表达CD34,MVD在鼻腔鼻窦鳞癌、鼻内翻性乳头状瘤和鼻息肉中测量值分别为(40.32±12.16)、(25.26±6.76)、(12.58±5.17)个/HP,两两比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论以CD34为标记进行微血管密度的测定,可以反映鼻腔鼻窦鳞状细胞癌诱导血管生成的能力较鼻内翻性乳头状瘤和鼻息肉强,从而在一定程度上反映肿瘤的生物学行为。
- 唐智孙瑾王继群李玉兰陈勇明涂智峰
- 关键词：微血管密度血管化
- SIGLEC-15对喉鳞状细胞癌的作用及机制研究被引量：1
- 2022年
- 目的探讨唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素15(sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin 15,SIGLEC-15)对喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)的作用及机制研究。方法应用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)、癌细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE)和基因表达谱动态分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis 2,GEPIA2)数据库进行生物信息学分析;应用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)、流式细胞术、Transwell法检测其增殖、凋亡、细胞周期、转移及侵袭的变化;应用基因芯片法检测上调及下调的基因,对差异基因进行富集分析;应用蛋白免疫印迹法(WB)和实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qPCR)检测蛋白表达;裸鼠体内成瘤实验检测SIGLEC-15对喉癌移植瘤生长的影响。采用t检验、Wilcoxon秩和检验、Log-rank检验进行统计学分析。结果SIGLEC-15在LSCC中高表达且与生存期密切相关(HR=1.1,P=0.010)。构建低表达SIGLEC-15的细胞模型,即TU686SIGLEC-15-组;与TU686SIGLEC-15+组相比其增殖活性显著降低(48 h:1.32±0.23比2.56±0.37),迁移[(1036.52±51.22)个比(1819.62±180.24)个]和侵袭[(469.21±112.25)个比(961.45±102.03)个]能力降低,差异有统计学意义(t值分别为6.59、7.22和7.85,P值均<0.05)。早期凋亡增加[(23.27±1.12)%比(5.64±1.61)%,t=11.32,P<0.05],细胞周期G0/G1被阻滞[(59.32±3.65)%比(35.46±3.57)%,t=9.85,P<0.05]。敲低SIGLEC-15导致864个基因上调,357个基因下调,细胞周期、凋亡及JAK/STAT信号通路发生显著变化,p-JAK2、p-STAT3、Caspase-3、Bad、Bcl-2、Cyclin d1蛋白分子表达明显变化。裸鼠成瘤结果表明TU686SIGLEC-15-细胞组裸鼠移植瘤增长速度缓慢,种瘤后8周,肿瘤重量分别为(0.382±0.054)g和(1.277±0.126)g,而且SIGLEC-15敲低组移植瘤组织中SIGLEC-15表达更低[(11.29±2.17)比(36.25±7.56)],差异均有统计学意义(t值为8.44和9.28,P值均<0.05)。结�
- 李松华孙瑾陈文明
- 关键词：喉肿瘤JAK2-STAT3
- 鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中血管内皮生长因子的表达及其与微血管和微淋巴管密度的关系被引量：1
- 2013年
- 目的:研究鼻腔鼻窦鳞状细胞癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)表达的临床病理学意义,同时探讨VEGF与微血管密度(MVD)和微淋巴管密度(MLVD)的关系。方法:采用免疫组织化学法,检测41例鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中VEGF的表达,同时标记CD34和D2-40,分别检测鼻腔鼻窦鳞状细胞癌组织中MVD和MLVD。结果:41例鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中VEGF表达的阳性率为82.9%(34/41),VEGF的表达与患者性别无关(P>0.05),而与肿瘤的侵犯范围、组织学分级和淋巴结转移相关(P<0.05);VEGF表达阳性组的平均MVD高于阴性组(P<0.05),而平均MLVD阳性组和阴性组之间无统计学差异(P>0.05)。结论:VEGF可能通过促进鼻腔鼻窦鳞状细胞癌的血管形成而参与癌细胞的浸润转移,没有参与鼻腔鼻窦鳞状细胞癌微淋巴管的生成。
- 唐智孙瑾王继群李玉兰陈勇明涂智峰
- 关键词：血管内皮生长因子微血管密度微淋巴管密度
- 头颈部癌肉瘤14例临床分析被引量：1
- 2021年
- 目的探讨头颈部癌肉瘤的病理学特点、治疗及预后。方法回顾性分析2010年1月至2020年5月郑州大学第一附属医院收治的14例头颈部癌肉瘤患者的临床资料,其中男11例,女3例,年龄30~72岁。总结病理学特点、治疗以及随访情况。应用Kaplan-Meier法估计14例患者累积生存率。结果所有患者病理组织学检查见恶性上皮和间叶成分同时存在,13例免疫组织化学染色显示恶性的上皮区域,细胞角蛋白、上皮膜抗原有不同程度的阳性表达,在恶性的间叶组织区域,波形蛋白呈阳性。在治疗上14例患者单纯手术治疗5例,手术后辅助放疗3例,手术后辅助放化疗6例。随访时间为2~81个月,中位随访时间为22.5个月。除1例随访21个月后失访外,其余13例患者中有4例术后复发,复发率为4/13;8例死亡,死亡率8/13,5例无瘤生存。Kaplan-Meier法计算得到14例头颈部癌肉瘤患者1、3、5年累积生存率分别为64.3%、57.1%、42.9%。结论头颈部癌肉瘤临床罕见,病理组织学和免疫组织化学检查是确诊的重要依据,手术是治疗的首选方法。头颈部癌肉瘤预后差,对于癌肉瘤患者应长期随访。
- 王军玲刘丽金汝佳桑建中曹华孙瑾张智风陈磊郭相岑
- 关键词：头颈部肿瘤癌肉瘤预后
- 喉神经内分泌肿瘤临床诊疗分析
- 2023年
- 目的探讨喉神经内分泌肿瘤(LNEN)患者的临床特点、治疗方法及预后。方法回顾性分析2015年8月至2022年4月在郑州大学第一附属医院就诊并经病理证实的19例LNEN患者的临床病例资料。结果19例患者中,男17例,女2例,年龄46~74岁,中位年龄62岁。神经内分泌瘤G11例,神经内分泌瘤G28例,小细胞神经内分泌癌10例。采用放化疗6例,手术联合放和/或化疗13例,其中11例患者接受开放性手术,2例接受经口微创CO_(2)激光手术。随访时间5~68个月,中位随访时间为22.5个月。患者中手术联合放化疗13例,其中7例无瘤生存至今,最长随访时间68个月;3例死亡;2例远处转移;1例失访。6例未接受手术治疗,其中4例死亡,2例随访治疗中。结论LNEN恶性程度高,早期易扩散转移,预后较差。精准的肿瘤临床分期及病理学分型是决定其治疗和预后的重要因素。以手术治疗为主,联合化疗和放疗的综合性治疗是首选方案。
- 孙瑾桑建中曹华
- 关键词：诊疗
