孙桂云
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：山东省肿瘤医院更多>>
- 发文基金：山东省卫生厅科技基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人乳腺癌MDR1基因稳定沉默细胞的筛选及其生物学特性被引量：3
- 2008年
- 目的筛选MDR1沉默的人乳腺癌细胞并比较其生物学特性。方法采用BLOCK-iT Lentiviral RNAi Expres-sion System生产表达MDR1基因shRNA的慢病毒载体,转导敏感人乳腺癌细胞MCF-7和耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADM,杀稻瘟菌素(blasticidin)筛选获得MDR1稳定沉默细胞MCF-7/RNAi和MCF-7/ADM/RNAi。定量RT-PCR检测MDR1mRNA表达,流式细胞术检测P-GP蛋白表达和功能,MTT法检测药物敏感性。结果经10 mg/L blasticidin筛选12 d获得MCF-7/RNAi和MCF-7/ADM/RNAi细胞。MCF-7、MCF-7/RNAi、MCF-7/ADM和MCF-7/ADM/RNAi细胞的MDR1mRNA相对表达水平分别为1、0.13、17.14和2.01;P-GP表达分别为(1.5±0.3)%、(1.2±0.2)%、(89.4±3.6)%和(16.3±1.9)%;细胞内Rh123的潴留分别为(92.4±3.1)%、(90.6±4.0)%、(13.6±1.6)%、(72.4±2.8)%;IC50值分别为0.90、0.92、19.61和4.04 mg/L。结论应用慢病毒载体稳定沉默MDR1基因可有效逆转人乳腺癌细胞耐药性。
- 王明玉宋丽华宋现让魏玲孙桂云王兴武谭学芬
- 关键词：乳腺癌多药耐药基因1RNA干扰慢病毒
- MDR1 RNAi表达克隆的质粒构建被引量：1
- 2007年
- 目的:构建针对多药耐药基因(MDR1)的RNA干扰(RNAi)表达克隆质粒。方法:采用Invitrogen公司的Block-i TTMU6RNAi Entry Vector Kit和BLOCK-i T Lentiviral RNAi Expres-sion System生产表达克隆质粒。针对MDR1人工设计合成一段寡核苷酸,依照试剂盒说明书分别构建MDR1entryclone质粒和表达克隆质粒。以MDR1entry clone质粒瞬时转染MCF-7/ADM细胞株,MTT法测细胞对ADM的耐药性及流式细胞仪测试P-gp表达情况。抗生素筛选表达克隆、抽提质粒电泳鉴定。结果:测序证实MDR1entry clone质粒构建正确,无任何突变.转对照质粒组和转MDR1entry clone质粒组,P-gp表达水平分别为(31.97±1.2)%和(7.88±0.5)%,IC50分别为1.27和0.4μg/mL。两组比较,P-gp表达和IC50差异均有统计学意义,P均<0.05。抗生素筛选显示转化克隆对氯霉素敏感、对氨苄青霉素具抗性,抽提质粒琼脂糖凝胶电泳显示重组质粒大小符合设计要求。结论:MDR1entry clone质粒和表达克隆质粒构建正确,为进一步阻断MDR1基因表达逆转肿瘤多药耐药奠定了基础。
- 孙桂云王明玉魏玲
- 关键词：RNA干扰基因表达质粒
