孙怀鑫
- 作品数：11 被引量：26H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院苏州九龙医院更多>>
- 发文基金：苏州市科技计划项目苏州市科技发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 环氧合酶-2基因敲低对足细胞凋亡及podocin蛋白表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察足细胞环氧合酶-2(COX-2)基因敲低对足细胞凋亡及podocin蛋白表达的影响,以进一步探讨足细胞凋亡的分子机制。方法将条件永生性小鼠足细胞株随机分为阴性转染组、5μL siRNA组、10μL siRNA组、15μL siRNA组。经诱导分化成熟,在siRNA干扰48 h后用半定量RT-PCR和Western bolt分别检测足细胞COX-2 mRNA及蛋白表达水平,用流式细胞仪检测足细胞凋亡水平。将10μL siRNA组分别设立足细胞正常对照组、足细胞COX-2基因敲低组和足细胞阴性转染对照组三个亚组,用Western bolt检测podocin蛋白、BAX蛋白及BCL-X1蛋白的表达水平。结果与阴性转染组比较,随着干扰浓度的增加,COX-2 mRNA及蛋白表达逐渐减少,而足细胞的凋亡率逐渐升高,15μL的siRNA组凋亡率明显增高。足细胞COX-2基因敲低组podocin蛋白表达显著低于足细胞阴性转染对照组(P<0.05)。与足细胞阴性转染对照组相比,足细胞COX-2基因敲低组BAX蛋白表达显著上调,而BCL-X1蛋白表达稍有下调。结论敲低COX-2基因表达可以导致足细胞凋亡,且随着siRNA干扰浓度的增加,足细胞凋亡率逐渐增加。在干扰浓度为10μL时,足细胞podocin蛋白的表达下调。BAX蛋白上调及BCL-X1蛋白下调参与了足细胞的凋亡。
- 张林孔维信孙怀鑫丁露露郝传明陈靖
- 关键词：足细胞细胞凋亡
- 环氧合酶2基因沉默对嘌呤霉素氨基核苷诱导足细胞凋亡的影响被引量：2
- 2014年
- 足细胞损伤是进行性肾损害的主要原因[1],足细胞环氧合酶2（cyclooxygenase-2,COX-2）的表达增强致使足细胞易于受到进一步损伤[2].特异性COX-2抑制剂对许多慢性肾脏疾病有减轻蛋白尿、延缓肾损害进展的作用,但作用机制尚未完全阐明[3-5].我们前期研究发现在嘌呤霉素氨基核苷（puromycin aminonucleoside,PAN）诱导的足细胞凋亡过程中C OX-2的表达增多,而特异性COX-2抑制剂塞来昔布则可以减轻PAN诱导的足细胞凋亡[6],推测塞来昔布抑制足细胞凋亡的作用可能是通过抑制COX-2的表达实现的.但塞来昔布抑制凋亡可能并不完全依赖对COX-2的调节.本研究应用COX-2小分子干扰RNA（small interfere RNA,siRNA）技术将足细胞COX-2基因沉默,比较正常条件永生性小鼠足细胞与PAN诱导凋亡的小鼠足细胞中COX-2的表达水平,观察足细胞Nephrin及CD2相关蛋白（CD2-associated Protein,CD2AP）的表达,进一步研究足细胞COX-2基因沉默对足细胞可能的保护作用机制,为临床上延缓慢性进行性肾损害的治疗提供新的依据.
- 孙怀鑫孔维信汪年松张林丁露露郝传明陈靖
- 关键词：嘌呤霉素氨基核苷环氧合酶2基因沉默特异性COX-2抑制剂进行性肾损害CD2相关蛋白
- 高通量血液透析治疗尿毒症合并高血压的临床价值观察被引量：5
- 2016年
- 目的 探索高通量血液透析治疗尿毒症合并高血压患者的临床价值。方法 选取我院60例尿毒症合并高血压患者,收治时间为2015年2月~2016年2月,并对此次研究患者进行抽签随机分为两组,每组30例患者,对照组采用血液透析治疗,观察组采用高通量血液透析治疗,对两组患者治疗后的ATⅡ平均数据、PTH平均值、舒张压数据、收缩压数据进行分析。结果 观察组和对照组患者,对比治疗后的ATⅡ指标、PTH指标、舒张压数据、收缩压数据差异均存在统计学意义（P〈0.05）。结论 高通量血液透析治疗尿毒症合并高血压患者效果显著。
- 孙怀鑫
- 关键词：高通量血液透析
- 环氧合酶-2基因敲低对足细胞凋亡及nephrin蛋白表达的影响被引量：3
- 2012年
- 目的观察足细胞环氧合酶-2(COX-2)基因敲低对足细胞凋亡及nephrin蛋白表达的影响。方法 (1)以条件永生性小鼠足细胞株为研究对象:分为正常对照组、5μl的siRNA组、10μl的siRNA组、15μl的siRNA组。经诱导分化成熟,在干扰48 h后用半定量RT-PCR和Western bolt分别检测COX-2 mRNA及蛋白表达水平,用流式细胞仪检测足细胞凋亡水平。(2)以10μl的siRNA组作为研究对象,分别设立足细胞正常对照组、足细胞COX-2基因敲低组和足细胞阴性转染对照组,用Western bolt检测nephrin蛋白、BAX蛋白及BCL-Xl蛋白的表达水平。结果 (1)与正常对照组比较,随着干扰浓度的增加,COX-2mRNA及蛋白表达逐渐减少,而足细胞的凋亡率逐渐升高,15μl的siRNA组凋亡率明显增高。(2)1μl COX-2 siRNA转染组nephrin蛋白表达显著低于阴性转染组(P<0.05)。(3)与阴性转染组相比,10μl COX-2 siRNA转染组Bax蛋白表达显著上调,而Bcl-xl蛋白表达稍有下调。结论敲低COX-2的基因表达可以导致足细胞凋亡,并随着干扰浓度的增加,足细胞凋亡率逐渐增加;在干扰浓度为10μl时,足细胞nephrin蛋白的表达下调;BAX蛋白上调及BCL-Xl蛋白下调参与了足细胞的凋亡。
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- 关键词：足细胞细胞凋亡
- 复方α-酮酸对老年腹膜透析患者微炎性状态的调控作用观察被引量：4
- 2018年
- 目的研究复方α-酮酸对老年腹膜透析患者微炎性状态的调控作用。方法将40例老年腹膜透析患者以随机数字表法分为观察组、对照组,两组均20例,两组均在腹膜透析基础上采取控压、纠正贫血、调节钙磷代谢等常规干预方法,观察组另给予复方α-酮酸口服,3次/天,连用3个月。比较两组干预3个月后临床疗效,分组记录超敏-C反应蛋白(Hs-CRP)表达,并比较两组营养指标前白蛋白(PA)、血清白蛋白(ALB)、血红蛋白(HGB)、主观营养评估(SGA评分)差异,设定SGA评分为因变量,Hs-CRP为自变量,观察营养状态与微炎性状态的相关性。结果观察组总有效率高于对照组,但差异无统计学意义(连续性校正χ2=2.294,P=0.130);治疗后观察组Hs-CRP与治疗前及对照组治疗后比较降低,差异有统计学意义(P<0.05),对照组治疗前后差异无统计学意义(P>0.05);观察组治疗后PA、ALB、HGB均显著上升,较治疗前及对照组治疗后差异有统计学意义(P<0.05);治疗后组间比较,观察组SGA评分与对照组比较显著较低(P<0.05),对照组治疗前后差异无统计学意义(P>0.05);将SGA评分作为因变量,设定Hs-CRP为自变量,进行线性回归性分析,Hs-CRP与SGA评分呈负相关关系(r=-0.722,P=0.000),即Hs-CRP越高,SGA评分越低,患者营养状况越差。结论老年腹膜透析患者体内存在不同程度的微炎性状态,且微炎性状态与腹膜透析患者营养不良有相关性,复方α-酮酸辅助治疗可增强肾病患者干预疗效,并对微炎性状态有良好的调控作用,因此可改善患者营养状态,可能使腹膜透析患者预后获益。
- 孙怀鑫张苏华
- 关键词：复方Α-酮酸腹膜透析
- 小鼠足细胞Tbxa2r基因敲低方法探讨
- 2015年
- 目的设计并筛选对足细胞血栓素A2受体(Tbxa2r)基因表达敲低效果最佳的siRNA序列。方法培养永生性小鼠足细胞(MPC5),取生长占培养板70%细胞用于实验。设计4条siRNA序列(Tbxa2r-mus-1150、Tbxa2r-mus-1309、Tbxa2r-mus-1677、Tbxa2r-mus-1884),经转染效率验证后转染足细胞。将细胞分为四组:干扰组(以筛选出的干扰序列转染细胞)、空白组(正常细胞样品)、模拟组(只加转染试剂的细胞样品)、阴性对照组(转染无序干扰系列的细胞样品)。Real-time PCR检测各组细胞Tbxa2r基因,Western blot法检测Tbxa2r蛋白。结果筛选出干扰效果最强的siRNA序列Tbxa2r-mus-1677,其转染24 h后对Tbxa2r基因表达干扰效果较小,而在转染48 h后足细胞Tbxa2r基因相对表达量最低。转染72 h后,细胞Tbxa2r蛋白相对表达量明显降低。结论采用Tbxa2r特异性siRNA技术成功敲低足细胞Tbxa2r基因表达,并筛选出敲低效果最佳的siRNA序列。
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- 关键词：足细胞
- 环磷酰胺冲击联合激素治疗难治性肾病综合征的临床效果体会被引量：7
- 2016年
- 目的探究环磷酰胺冲击联合激素治疗难治性肾病综合征(RNS)的临床效果。方法选取2014年5月至2015年5月我院收治的20例难治性肾病综合征患者为研究对象,采取计算机随机分组方案分为常规组和试验组,各10例。常规组采取激素进行治疗,试验组采取环磷酰胺冲击+激素进行治疗,比较两组肾病综合征患者的临床治疗效果与不良反应情况。结果经过治疗后,试验组患者的临床总缓解率为90.00%,常规组患者的临床总缓解率为70.00%,两组临床总缓解率比较,差异具有统计学意义(P<0.05);试验组患者无不良反应情况发生,常规组患者不良反应发生率为30.00%,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论对难治性肾病综合征患者采取环磷酰胺冲击+激素进行治疗可获得较为显著的治疗效果,药物安全可靠,可明显改善患者的临床症状,且不良反应发生率较低,值得在临床中推广应用。
- 孙怀鑫
- 关键词：难治性肾病综合征激素环磷酰胺
- Tbxa2r基因敲低对嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞凋亡的影响被引量：3
- 2014年
- 目的:观察足细胞血栓素A2受体(Tbxa2r)基因敲低对嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)诱导的足细胞凋亡的影响。方法:通过目标序列设计4条siRNA,评价细胞转染效率后,RT-PCR检测siRNA干扰效果,蛋白质印迹法检测Tbxa2r蛋白表达,流式细胞仪检测PAN诱导的MPC5足细胞的凋亡情况。结果:目标序列在转染24 h后几乎没有干扰效果,而在48 h时第3条siRNA(Tbxa2r-mus-1677)干扰序列作用效果最好;在干扰72 h后,Tbxa2r蛋白表达量明显降低。PAN刺激48 h后,空白组与阴性对照组MPC5足细胞没有明显的凋亡现象,阳性对照组与Tbxa2r基因敲低PAN组细胞凋亡和坏死现象明显。结论:PAN能促进Tbxa2r基因敲低的足细胞发生凋亡和坏死。
- 邓振兴孔维信张林孙怀鑫丁露露
- 关键词：足细胞血栓素A2受体细胞凋亡
- 透明细胞肾细胞癌外泌体miR-133a表达及临床意义被引量：1
- 2023年
- 目的 探讨外泌体微小RNA(miR)-133a在透明细胞肾细胞癌(ccRCC)中的表达及临床意义。方法 收集2015年9月至2019年1月在我院行根治性肾切除术的293例ccRCC患者的血清样本,另外收集200例健康体检者的血清样本作为对照组。提取血清及组织外泌体总RNA,采用TaqMan低密度芯片(TLDA)鉴定差异表达的miRNA,并通过实时荧光定量PCR(qPCR)进行验证。随访患者的总生存期(OS)和无病生存期(DFS)。结果 与健康对照组血清和癌旁正常组织比较,TLDA筛选得到3个在ccRCC患者血清外泌体和肿瘤组织中差异表达的miRNAs(miR-133a、miR-210、miR-7-1)。qPCR证实外泌体miR-133a表达在ccRCC患者中显著下调(P<0.001)。ccRCC患者外泌体miR-133a表达与肿瘤组织表达呈正相关(r=0.467,P<0.001)。受试者工作特征(ROC)曲线证实血清外泌体miR-133a诊断ccRCC曲线下面积(AUC)为0.78(95%CI:0.747~0.729)。术前血清外泌体miR-133a表达与TNM分期、Fuhrman分级有关(P<0.05),与肾功能指标无关(P>0.05)。术前血清外泌体miR-133a高表达患者的DFS和OS均长于低表达者(P<0.001)。Cox风险比例回归分析显示血清外泌体miR-133a是影响ccRCC患者OS的独立预后因素[HR=0.486(95CI:0.226~1.043);P=0.034]。结论 血清外泌体miR-133a与ccRCC的发生、发展及预后密切相关,可能是预测ccRCC患者预后的生物标志物。
- 孙怀鑫邵翔徐德宇陈彬刘倩盼刘曼李玉婷
- 关键词：外泌体预后
- 环氧合酶-2基因敲低对足细胞相关蛋白表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:观察足细胞环氧合酶-2(COX-2)基因敲低对足细胞相关蛋白表达的影响。方法:以条件永生性小鼠足细胞株为研究对象,分为足细胞正常对照组、足细胞COX-2基因敲低组和足细胞阴性转染组,用流式细胞仪检测足细胞凋亡水平,用Western bolt检测COX-2、Nephrin、Podocin、CD2相关蛋白(CD2AP)的表达水平。结果:与足细胞正常对照组及阴性转染组相比,足细胞COX-2基因敲低组COX-2蛋白表达明显降低、细胞凋亡率明显增高,而Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白表达则显著降低。结论:足细胞COX-2基因敲低可以导致足细胞凋亡,且足细胞Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白的表达下调。
- 邓振兴孔维信张林孙怀鑫丁露露郝传明陈靖
- 关键词：足细胞细胞凋亡免疫学环氧合酶2免疫学
