孙守娟
- 作品数：10 被引量：8H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属口腔医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局科研项目重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 舌鳞癌Tca8113细胞系中高、低醛脱氢酶活性细胞亚群差异表达基因cDNA文库的构建
- 目的：构建舌鳞癌Tca8113细胞系中高、低醛脱氢酶活(high/lowaldehyde dehydrogenase activity，ALDHhigh/ALDHlow)细胞差异基因cDNA文库。方法：用流式细胞仪检测A...
- 孙守娟
- 关键词：舌鳞癌TEA8113细胞抑制性消减杂交技术醛脱氢酶
- 文献传递
- 舌鳞癌干细胞相关差异表达序列标签的生物信息学分析
- 2011年
- 目的:对利用抑制消减杂交技术获得的舌鳞癌干细胞相关表达序列标签(Expressed squence tag,EST)进行电子克隆及序列分析。方法:利用互联网上的公共数据库及生物信息学分析软件对获得的舌鳞癌干细胞相关差异表达序列标签进行核酸序列和蛋白质序列分析,探索克隆差异表达基因的研究方法和策略。结果:通过电子延伸得到1个1 705 bp的cDNA序列;核酸序列分析显示,该cDNA定位在1号染色体,含有1个编码146个氨基酸的完整开放阅读框;对氨基酸序列进行结构域预测显示其存在1个与Translin超家族同源的区域;BLAST比对显示该氨基酸序列与Translin相关蛋白X(Translin associatedprotein X,TRAX)具有较高的同源性。结论:利用生物信息学技术获得了舌鳞癌相关表达序列标签的基本信息,为深入研究该表达序列标签的功能奠定基础。
- 邹波季平孙守娟漆小娟
- 关键词：肿瘤干细胞舌鳞癌表达序列标签生物信息学分析
- 舌鳞癌Tca8113细胞株干细胞相关差异表达基因的筛选及分析被引量：2
- 2012年
- 目的应用抑制消减杂交(SSH)技术筛选舌鳞癌干细胞相关差异表达基因。方法以舌鳞癌Tca8113细胞株中的醛脱氢酶(ALDH)高表达(ALDHb)r细胞与低表达(ALDHlow)细胞互为实验组和对照组,进行正反向消减杂交后建立差异表达基因文库,随机挑选差异基因克隆进行测序及生物信息学分析。结果经Blast比对分析,得到62条差异表达基因;功能聚类发现多数与细胞周期调节、细胞分化等生物行为相关;信号通路分析显示有11条基因参与的12条信号通路发生显著改变。结论应用SSH技术成功筛选出了与舌鳞癌干细胞相关的一些基因,进一步研究这些基因对探索舌鳞癌干细胞特异性表面标志物具有重要意义。
- 邹波季平孙守娟孙守娟
- 关键词：舌鳞状细胞癌肿瘤干细胞醛脱氢酶基因
- 舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株醛脱氢酶高表达亚群细胞生物学特性的研究被引量：1
- 2012年
- 目的检测醛脱氢酶(ALDH)在舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中的表达,研究ALDH高表达(ALDHhi)g亚群细胞的生物学特性。方法采用流式细胞仪检测Tca8113细胞株中ALDH的表达;分选ALDHhig与ALDHlow亚群细胞,体外培养观察其增殖、分化及在无血清培养基中的成球能力;利用抑制消减杂交(SSH)技术筛选ADLHhig亚群细胞高表达基因。结果舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中仅有1.3%的细胞高表达ADLH;分选出的ADLHhig肿瘤细胞增殖能力高于ALDHlow细胞和未分选的肿瘤细胞;随着培养时间的延长,体外培养的ALDHhig细胞比例逐渐下降至分选前水平;ALDHhig亚群细胞能够在无血清培养基中悬浮生长形成肿瘤球,且高表达干细胞相关基因。结论舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中有一小群细胞高表达ALDH,具有干细胞的生物学特性;ALDH可能是舌鳞状细胞癌干细胞的标志物之一。
- 杨晶季平邹波孙守娟漆小娟
- 关键词：舌鳞状细胞癌肿瘤干细胞醛脱氢酶抑制消减杂交
- 舌鳞癌干细胞相关差异表达cDNA文库的鉴定与分析
- 2011年
- 目的对构建的舌鳞癌干细胞相关差异表达cDNA文库进行初步鉴定及分析。方法将差异表达cDNA文库中的cDNA片段转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选,正反向文库各随机挑取120个白色克隆进行PCR鉴定并测序。将测序所得序列提交GenBank进行Blast同源性分析。利用PubMed数据库检索已报道的与干细胞相关的差异基因并进行生物信息学分析。结果 PCR鉴定显示挑取的克隆均为阳性克隆,测序获得224个EST片段。经同源性分析得到62个已知基因,其中9个已有相关文献报道与干细胞生物特性相关,可归类于细胞分化调节、低氧应答、细胞凋亡调节等。结论对前期构建的干细胞相关差异表达cDNA文库进行克隆分析得到一些干细胞相关基因。
- 邹波季平孙守娟漆小娟
- 关键词：舌鳞癌干细胞CDNA文库基因表达
- 舌鳞癌中高醛脱氢酶活性细胞相关基因的生物信息学分析
- 2013年
- 目的:构建舌鳞癌Tca8113细胞中高醛脱氢酶活性(high aldehyde dehydrogenase activity,ALDHhigh)细胞特异性表达基因cDNA文库并进行相应的生物信息学分析。方法:应用抑制性消减杂交(SSH)技术,以ALDHhigh细胞RNA为测试方、低醛脱氢酶活性(ALDHlow)细胞RNA为驱动方,构建文库;应用BLAST、Gene Set Analysis Toolkit V2等软件进行生物信息学分析。结果:随机挑选20个集落进行PCR分析,克隆片段均匀分布在200 bp～700 bp,无假阳性克隆,成功构建文库;对120个克隆测序并进行BLAST分析,得到27个差异表达基因;功能聚类发现部分与细胞增殖、生长繁殖、再生等生物行为相关。结论:成功构建的ALDHhigh细胞特异性表达基因cDNA文库,为下一步找出ALDHhigh干细胞特性相关基因提供帮助。
- 孙守娟季平邹波邓诚
- 关键词：抑制性消减杂交技术肿瘤干细胞醛脱氢酶生物信息学
- 基于舌鳞癌Tca8113细胞醛脱氢酶活性不同构建差异表达基因cDNA文库被引量：1
- 2012年
- 目的构建舌鳞癌Tca8113细胞系中高、低醛脱氢酶活性(high/low aldehyde dehydrogenase activity,ALDHhigh/ALDHlow)细胞差异表达基因cDNA文库。方法用流式细胞仪检测ALDEFLUOR染色的Tca8113细胞中干细胞标志物ALDH的表达,并收集ALDHhigh和ALDHlow细胞;用Trizol分别提取两亚群细胞的总RNA;用抑制性消减杂交(SSH)对2组RNA进行差异基因筛选和扩增,扩增产物与pMD18-T载体连接并转化大肠杆菌DH5α。文库扩增后,每库随机挑取24克隆进行酶切、测序及同源性分析。结果分选得到ALDHhigh和ALDHlow两亚群细胞,其中ALDHhigh细胞的比例为2.5%;分光光度计测得ALDHhigh和ALDHlow的RNA D(260)/D(280)的比值分别为1.93和1.92;构建了ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA双向文库,每个库约500个克隆菌落,每库随机挑选24个菌落进行PCR分析,克隆片段均匀分布在200～700 bp,无假阳性克隆。测序结果经同源性比对分析和PubMed检索,其中与肿瘤有关的基因有SLC25A13、KLHL2、NPC1、WAPL、BARD1、Notch2、EEF2K。结论成功构建ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA文库。
- 孙守娟季平邓诚李颖邹波漆小娟
- 关键词：抑制性消减杂交技术CDNA文库肿瘤干细胞醛脱氢酶
- 利用T7噬菌体展示技术构建人舌鳞癌细胞多肽文库被引量：2
- 2010年
- 目的:本研究拟构建人舌鳞癌细胞株Tca8113的T7噬菌体展示多肽文库,为进一步筛选和鉴定与舌鳞癌相关的蛋白或多肽打下基础。方法:人舌癌细胞株Tca8113,QiaGen法提取细胞mRNA,逆转录合成双链cDNA后与T7Select 10-3载体连接,体外包装并扩增得到T7噬菌体展示多肽文库。结果:构建了人舌鳞癌细胞株Tca8113的T7噬菌体展示多肽文库,原始文库重组滴度为鳞癌1.7×106 pfu,扩增后滴度为3×1010 pfu/mL。随机从文库中抽取10个克隆PCR扩增插入片断,电泳结果显示构建的文库中均有插入片段,文库插入率高达100%。所构建的文库插入片断大小在(0.4～1.0)kbp之间。结论:成功构建了人舌癌细胞株Tca8113的T7噬菌体展示多肽文库,为下一步筛选和鉴定与舌癌相关的蛋白或多肽奠定了基础。
- 王景涛季平邓诚伍明毅刘凯孙守娟邹波
- 关键词：噬菌体展示人舌鳞癌TCA8113
- 无血清培养法分选舌癌侧群细胞及其特性的鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的探索人舌鳞癌细胞株Tca8113中侧群细胞的分选方法。方法利用流式细胞仪分选传统含血清培养方法获得的人舌鳞癌细胞系Tca8113中的侧群细胞（SP）,并与无血清培养方法分离出的侧群细胞（TSC-SP）进行形态学比较和平板形成克隆实验及成瘤实验的比较,富集并验证肿瘤干细胞相关亚群。结果人舌癌细胞系Tca8113中SP细胞的含量为0.2%,而Tca8113细胞系的细胞在无血清培养基中能够成活,3~5 d后增殖并形成悬浮的肿瘤干细胞球,并随着培养时间的延长而肿瘤干细胞球体积增大和更加致密;而应用无血清悬浮法培养的Tca8113细胞系中TSC-SP细胞的含量为0.4%;SP与TSC-SP细胞在平板形成克隆实验的形成率均为100%;接种16 d后,104、105数量级的TSC-SP和SP接种裸鼠背部均出现瘤体。结论人舌鳞癌细胞系Tca8113中含极少量的SP细胞,利用无血清培养基可以达到富集肿瘤干细胞亚群的目的。
- 王景涛季平邓诚孙守娟邹波
- 关键词：人舌鳞癌无血清培养肿瘤干细胞侧群细胞流式细胞仪
- 无血清悬浮培养舌鳞癌Tca8113细胞系及肿瘤干细胞样亚群筛选被引量：1
- 2011年
- 目的:比较有血清培养基(Serum-supplemented medium,SSM)培养的细胞中和无血清培养基(Serum-free medium,SFM)培养的肿瘤干细胞球体中肿瘤干细胞样亚群的比例,以期获得较好富集肿瘤干细胞的方法。方法:SFM培养细胞,观察形成肿瘤干细胞球过程中的细胞形态;更换培养基为SSM诱导其分化;流式细胞仪检测SSM组细胞和SFM培养的肿瘤干细胞球分化前、后醛脱氢酶(Aldehyde dehydrogenase,ALDH)的表达。结果:Tca8113细胞能在SFM中存活、增殖并形成肿瘤干细胞球;SFM和SSM培养的细胞中ALDHhigh细胞比例分别为0.297 0±0.009 0和0.010 7±0.002 5,差异有统计学意义(P<0.05);诱导分化后细胞与SSM组细胞形态上无明显差异。结论:用SFM培养舌鳞癌Tca8113细胞可形成肿瘤干细胞球,而且这种细胞球富集了肿瘤干细胞。
- 孙守娟季平邹波邓诚杨晶
- 关键词：舌鳞癌TCA8113醛脱氢酶
