姜英华
- 作品数：9 被引量：18H指数：3
- 供职机构：广东医学院基础医学院生物化学与分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 端粒保护蛋白过表达对HeLa细胞染色体端-端融合和端粒酶活性的影响
- 2006年
- 目的观察人端粒保护蛋白1(human protection of telom eres 1,hPOT1)基因过表达对HeLa细胞染色体端-端融合和端粒酶活性的影响。方法利用先前构建的hPOT1基因真核表达重组质粒pcDNA3-hPOT1,经脂质体介导瞬时转染HeLa细胞介导hPOT1基因过表达;秋水仙碱阻滞细胞周期于分裂中期,DAPI荧光染色分析染色体端-端融合;Telom erase PCR-ELISA试剂盒检测端粒酶活性。结果pcDNA3-hPOT1重组质粒转染HeLa细胞5 d后,染色体端-端融合几率增加,对端粒酶活性无明显影响。结论提示hPOT1蛋白可导致染色体端-端融合。
- 侯敢黄迪南姜英华杨明
- 关键词：人端粒保护蛋白HELA细胞端粒酶
- siRNA介导hPOT1基因表达抑制对HeLa细胞Caspase-3的影响被引量：5
- 2006年
- 目的应用siRNA表达载体介导的RNA i技术,特异地抑制端粒保护蛋白POT1基因在HeLa细胞中的表达,并观察其对细胞Caspase-3活化的影响。方法利用作者课题组先前构建的含hPOT1基因特异性序列(hsDNA)的3种重组siRNA表达质粒(pmU6-shRNA1、pmU6-shRNA2和pmU6-shRNA3),由脂质体介导转染HeLa细胞,以RT-PCR和EM-SA法检测转染细胞中的hPOT1基因的表达抑制效果,并通过RT-PCR、W estern b lot和Caspase-3检测试剂盒分析Caspase-3表达和活化。结果3种pmU6-shRNA重组质粒转染HeLa细胞48 h后,细胞中hPOT1基因mRNA和蛋白质表达水平均降低,Caspase-3 mRNA表达水平基本无变化,Caspase-3酶原水平降低,而Caspase-3酶活性增高。结论siRNA表达载体介导的RNA i能有效地抑制HeLa细胞中hPOT1基因表达,hPOT1基因表达的抑制导致细胞Caspase-3活化。
- 侯敢黄迪南姜英华梁爱玲
- 关键词：HELA细胞株CASPASE-3
- 人pot1基因cDNA的克隆及其在HeLa细胞中的表达
- 2005年
- 目的:克隆人端粒保护蛋白(hum an protection of telom eres 1,p ot1)基因cDNA全编码区,构建成真核表达质粒并实现在H eL a细胞中的表达。方法:RT-PCR法扩增出H eL a细胞hp ot1基因cDNA编码区全序列,定向克隆至真核表达载体pcDNA 3,阳性重组质粒经插入片段测序验证;重组的pcDNA 3-hp ot1质粒瞬时转染H eL a细胞,RT-PCR和EM SA法(电泳迁移率改变分析)检测hp ot1基因的表达水平。结果:来自H ela细胞的hp ot1基因cDNA编码区全序列构建成的真核表达质粒pcDNA 3-hp ot1,经测序分析序列和ORF正确;该重组质粒转染在H eL a细胞48h后,hp ot1基因表达水平增高。结论:真核表达载体pcDNA 3-hp ot1构建成功,并实现了hp ot1在H ela细胞中的表达。
- 姜英华黄迪南祝其锋
- 关键词：克隆
- hPOT1基因过表达对HeLa细胞细胞周期和凋亡的影响被引量：2
- 2005年
- 目的观察人POT1(protectionoftelomeres1)基因过表达对HeLa细胞细胞周期和细胞凋亡的影响。方法利用本课题组构建的hPOT1基因真核表达重组质粒pcDNA3-hPOT1,经脂质体介导瞬时转染HeLa细胞;通过RT-PCR和EMSA法(电泳迁移率改变分析)检测外源基因的表达效果,流式细胞术分析细胞周期,Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡。结果pcDNA3-hPOT1重组质粒转染HeLa细胞48h后,mRNA和蛋白质分析表明,外源性hPOT1基因能在HeLa细胞中有效表达,HeLa细胞阻滞于细胞周期S期,而对凋亡无明显影响。结论hPOT1基因可能参与了高等真核细胞细胞周期调控过程,但与细胞凋亡无密切关系。
- 黄迪南姜英华侯敢
- 关键词：HELA细胞基因过表达HOECHST33342真核表达重组质粒
- 培养的人癌细胞株(系)pot1基因exon12突变筛选
- 2006年
- 目的对培养的人癌细胞株(系)中pot1(protectionoftelomeres1)基因exon12进行突变筛选。方法从27株培养的人癌细胞株(系)提取染色体组DNA,用PCR方法扩增hpot1基因exon12,PCR产物纯化后直接测序,测序结果与GenBank和NCBI数据库中pot1基因的数据比较,对培养的人癌细胞株(系)中hpot1基因exon12进行突变分析。结果测序结果显示,人宫颈癌Hela细胞株和人卵巢癌细胞株(高转移)HO8910-PM等5个来源于女性生殖系统癌细胞株中的4个,在hpot1基因exon12区有相同的置换突变(G17722→C),为错义突变,对应于cDNA的G1385→C,多肽链的Leu454→Phe;而其余23个不同来源的癌细胞株(系)均无突变。结论提示hpot1基因exon12(17722碱基)是突变热点区,并且这种突变可能具有女性生殖系统肿瘤特异性。
- 侯敢黄迪南姜英华
- 关键词：人癌细胞株DNA序列分析基因突变
- 介绍一种改进的、简便的凝胶迁移滞留试验法被引量：8
- 2004年
- 目的 :改进凝胶迁移滞留试验 (EMSA)方法 ,运用该法检测新蛋白。方法 :抽提与定量核蛋白、DNA探针标记与纯化 ,探针与蛋白质的结合、电泳及放射自显影。结果 :采用本法简便、节约、灵敏度高、图像清晰、有可比性及重复性 ,成功运用于NF-κB及POT蛋白的检测。结论 :此法在本实验组运用过 ,可靠 ,值得应用与推广。
- 龙友明郑吉顺陈垦姜英华
- 关键词：DNA探针NF-ΚB自显影
- siRNA介导的hPOT1基因表达抑制对HeLa细胞凋亡的影响被引量：3
- 2005年
- 目的 应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,特异地抑制端粒保护蛋白hPOT1基因在HeLa细胞中的表达,并观察其对细胞凋亡的影响。方法利用先前构建的含hPOT1基因特异性序列(hsRNA)的3种重组siRNA表达质粒,由脂质体介导转染HeLa细胞,以RT PCR和电泳迁移率变化分析法检测转染细胞中的hPOT1基因的表达抑制效果,并通过流式细胞术、Hoechst荧光染色和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果 不同hPOT1特异性序列的3种的重组质粒转染HeLa细胞4 8h后,细胞中hPOT1基因mRNA和蛋白质表达水平降低,细胞凋亡水平明显增加。结论 siRNA表达载体介导的RNAi能有效地抑制HeLa细胞中hPOT1基因表达。
- 黄迪南姜英华梁爱玲
- 关键词：RNA干扰凋亡
- hPOT1基因过表达对HeLa细胞染色体端-端融合和端粒酶活性的影响
- ＜正＞目的:端粒保护蛋白（human protection of telomeres 1,hPOT1）于2001年被鉴定, 是目前唯一确认的端粒单链结合蛋白,hPOT1的生物学功能和作用机制仍不是十分清楚。作者课题组先前...
- 侯敢黄迪南祝其锋姜英华杨明
- 端粒长度调控机制的研究进展被引量：1
- 2004年
- 端粒长度调控是一个复杂的机制 ,端粒酶、端粒特异性结合蛋白 (TRF1、TRF2、Pot1等 )均通过直接或间接与端粒结合发挥其对端粒长度、端粒稳定性的调节作用 ,此外还存在不常见的ALT途径。
- 姜英华黄迪南祝其锋
- 关键词：肿瘤酶学
