和祯泉
- 作品数：17 被引量：19H指数：2
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- 大鼠中脑导水管周围灰质向下丘脑orexin神经元的纤维投射被引量：1
- 2016年
- 目的:明确中脑导水管周围灰质(PAG)神经元调节下丘脑orexin神经元的解剖学基础。方法:首先采用逆行示踪技术,将霍乱毒素B亚单位(CTb)作为逆行示踪剂注射到下丘脑orexin神经元胞体分布的区域,免疫组织化学方法染色观察PAG内CTb逆行标记细胞的分布特点;接着采用顺行示踪技术和免疫组化相结合的方法,将生物素化葡聚糖胺(BDA)作为顺行示踪剂注射到PAG,观察下丘脑内BDA标记的神经纤维与orexin神经元的重叠分布特点;最后运用免疫电镜技术观察BDA标记轴突终末与orexin神经元之间的突触联系。结果:CTb注射到单侧下丘脑orexin神经元区域后,在PAG观察到大量CTb标记神经元,注射点同侧标记细胞数明显占优,其中PAG外侧区(lPAG)和腹外侧区(vlPAG)可见大量CTb逆标神经元,背外侧区(dlPAG)和背内侧区(dm PAG)可见少量标记神经元;注射点对侧lPAG及vlPAG区域也观察到少量CTb标记神经元。BDA注射到单侧lPAG后,下丘脑内双侧均可观察到BDA标记的神经纤维,但注射点同侧标记神经纤维数量明显占优。BDA标记纤维与orexin神经元胞体在穹窿背侧接近不定带(ZI)的区域(本文中将此区域称作"穹窿上区")形成显著的重叠分布。透射电镜下观察到BDA标记的轴突终末与orexin神经元之间形成突触联系,且多为非对称性类型。结论:lPAG投射到下丘脑的神经纤维在穹窿上区与orexin神经元形成优势重叠分布、并与orexin神经元的胞体或树突形成以非对称性为主的突触联系,提示orexin神经元可能在lPAG的直接支配下发挥其调节觉醒状态、摄食行为等功能。
- 韩怀钦张博闻顾金海赵奇和祯泉任双来何仲义牛建国
- 关键词：OREXIN下丘脑突触联系
- 一种siRNA靶向抑制Zwilch的研究方法及其应用
- 本发明公开了一种siRNA靶向抑制Zwilch的研究方法及其应用，构建靶向Zwilch基因的siRNA感染U87MG细胞，采用荧光显微镜、Western blotting观测感染效率及Zwilch蛋白表达的抑制效果。si...
- 顾金海牛建国文玉军孙亚敏王鹏和祯泉杨勇
- 文献传递
- 大鼠下丘脑室旁核与orexin神经元的纤维联系及其在癫痫中的活性研究被引量：2
- 2019年
- 目的:观察大鼠下丘脑室旁核(PVN)神经元和下丘脑orexin神经元在癫痫发作后的活性变化,以及相互之间的纤维联系。方法:制作匹罗卡品癫痫大鼠模型,免疫组织化学方法检测PVN内神经元和orexin神经元表达c-Fos情况;BDA顺行神经示踪实验观察PVN内神经元的纤维向orexin神经元分布区域的投射情况;CTb逆行神经示踪实验观察orexin神经元向PVN的投射情况。结果:PVN内神经元和orexin神经元在癫痫大鼠中的活性明显提高;PVN神经元向orexin集中分布的区域有大量的神经纤维投射;orexin神经元也可以投射到PVN。结论:PVN神经元和orexin神经元参与癫痫发作,PVN与orexin神经元之间存在相互神经纤维联系,可能在癫痫发作及伴发功能性障碍中发挥着重要的作用。
- 和祯泉张燕丁娜马康左娣黄卓群孙涛牛建国
- 关键词：癫痫下丘脑室旁核OREXIN
- G蛋白偶联雌激素受体1对颞叶癫痫大鼠发作易感性的影响
- 2021年
- 目的探讨G蛋白偶联雌激素受体1(GPER1)特异性激动剂G1、拮抗剂G15对癫痫大鼠发作易感性的影响。方法将60只大鼠按随机数字表法分为对照组、G1处理组、G15处理组,每组20只。后2组大鼠分别腹腔注射GPER1特异激动剂G1(10μg)、拮抗剂G15(40μg),连续注射12 d。3组大鼠均制备氯化锂-匹罗卡品癫痫模型。观察大鼠腹腔注射匹罗卡品后1 h内的行为学表现,每隔5分钟采用Racine分级评估癫痫发作严重程度,比较3组大鼠癫痫发作(Racine分级Ⅳ级)的潜伏期和不同时间点癫痫发作级别。使用脑电监测系统监测大鼠脑电图,记录匹罗卡品注射前10 min到注射后2 h的脑电数据,采用傅立叶变换(FFT)进行脑电的时频分析。比较3组大鼠脑电能量值的分布和癫痫持续状态20 min内θ、α波能量值的变化。结果(1)与对照组、G1处理组比较,G15处理组大鼠的癫痫发作潜伏期明显缩短,差异均有统计学意义(P<0.05)。注射匹罗卡品后15 min、20 min,G1处理组大鼠癫痫发作分级较对照组低,差异均有统计学意义(P<0.05)。注射匹罗卡品后15~35 min,G15处理组大鼠癫痫发作分级较对照组高,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组比较,G1处理组大鼠癫痫发作时脑电波幅较小,而G15处理组大鼠癫痫发作时间较早,且脑电波幅大、频率高。与对照组比较,G1处理组大鼠的脑电能量值变化不明显,而G15处理组大鼠在2 h内呈现出更高的脑电能量值。与对照组和G1处理组比较,G15处理组大鼠在癫痫持续状态20 min内θ、α波能量值明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论GPER1的活性水平与癫痫发作易感性有关,特异性抑制GPER1活性可增强癫痫易感性,增大癫痫过程中特定频率波段的能量值。
- 左娣文玉军任晓璠丁娜路光远马琳和祯泉牛建国
- 关键词：癫痫匹罗卡品G1
- Orexin A减轻谷氨酸诱导的HT22神经元损伤
- 2019年
- 目的探讨Orexin A对谷氨酸诱导小鼠海马神经元细胞系(HT22)细胞损伤的保护作用。方法培养HT22细胞,建立谷氨酸诱导HT22细胞损伤模型,CCK-8法检测Orexin A对谷氨酸诱导HT22细胞的存活率的影响,流式细胞技术检测Orexin A对谷氨酸诱导HT22细胞的凋亡的影响,蛋白印迹法检测ERK1/2磷酸化水平。结果确定30 mmol·L^-1谷氨酸浓度为本实验谷氨酸诱导HT22神经元损伤模型的实验条件;在实验浓度范围内,Orexin A本身对HT22细胞存活率无明显影响;与模型组细胞相比,100 nmol·L^-1和1000 nmol·L^-1 Orexin A干预组的细胞存活率上升(P<0.05);Orexin A干预组细胞凋亡比例相对减少(P<0.05),而Orexin OX1受体拮抗剂(SB-334867)干预组细胞凋亡比例无改变(P>0.05)。Orexin A干预组ERK1/2磷酸化水平与模型组差异无统计学意义(P>0.05);与Orexin A干预组比较,SB-334867干预组ERK1/2磷酸化水平增加(P<0.05)。结论Orexin A对谷氨酸诱导的HT22神经元损伤具有保护作用。
- 和祯泉马康张春张瑞丁娜左娣孙涛牛建国
- 关键词：OREXIN谷氨酸小鼠
- 胶质瘤细胞与血管内皮细胞的信号Crosstalk对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响被引量：1
- 2021年
- 目的探讨胶质瘤细胞与血管内皮细胞之间的信号Crosstalk及其对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法将人脑微血管内皮细胞(HBMEC)分4组培养:对照组为HBMEC常规培养,血管内皮生长因子(VEGF)组为HBMEC在含VEGF_(165)(50 ng/mL)的内皮细胞培养基(ECM)中培养,U87MG共培养组为HBMEC与胶质瘤细胞U87MG共培养,U251共培养组为HBMEC与胶质瘤细胞U251共培养,然后采用ELISA检测胶质瘤细胞及组织因子VEGF对血管内皮细胞分泌CXCL8的影响。将人脑胶质瘤细胞U87MG或U251分4组培养:对照组为U87MG或U251常规培养,U87MG/U251+HBMEC组为U87MG或U251与HBMEC共培养,U87MG/U251+HBMEC+rhCXCL8组为U87MG或U251与HBMEC在含Akt通路的激动剂rhCXCL8(50 ng/mL)的DMEM中共培养,U87MG/U251+HBMEC+LY294002组为U87MG或U251与HBMEC在含Akt通路的抑制剂LY294002(1μmol/L)的DMEM中共培养,分别采用Western blotting、CCK-8、Transwell侵袭实验检测血管内皮细胞及其分泌CXCL8对胶质瘤细胞的增殖、侵袭以及Akt蛋白表达的影响。结果与对照组比较,VEGF组、U87MG共培养组、U251共培养组中HBMEC培养体系的CXCL8分泌量升高(P<0.05),胶质瘤细胞及其分泌VEGF可促进血管内皮细胞分泌CXCL8。与对照组比较,U87MG/U251+HBMEC组细胞P-Akt蛋白表达增高(P<0.05),增殖及侵袭能力增高(P<0.05);给予CXCL8激活使P-Akt蛋白表达、增殖及侵袭进一步升高(P<0.01);给予LY294002抑制则P-Akt的表达降低(P<0.01),血管内皮细胞可通过分泌CXCL8激活胶质瘤细胞Akt信号通路,并促进其增殖和侵袭。结论胶质瘤细胞与血管内皮细胞之间存在VEGF-CXCL8-Akt信号Crosstalk机制,在胶质瘤增殖和侵袭中发挥重要作用。
- 顾金海路宁顾珈榕文玉军强媛媛和祯泉杨勇王峰孙涛牛建国
- 关键词：胶质瘤血管内皮细胞CROSSTALKCXCL8AKT
- 一种穗花杉双黄酮在制备治疗胶质瘤药物中的应用
- 本发明公开了一种穗花杉双黄酮在制备治疗胶质瘤药物中的应用，用穗花杉双黄酮对胶质母细胞瘤JAK2‑STAT3通路活化及肿瘤细胞凋亡和增殖的的影响。用0μM、50μM、100μM、150μM、200μM穗花杉双黄酮处理胶质母...
- 顾金海牛建国文玉军孙涛王峰和祯泉强媛媛王鹏杨勇
- 文献传递
- 基于CRISPR/Cas9技术AEG-1基因敲除神经细胞系的构建及AEG-1基因敲除介导的神经细胞周期阻滞和细胞凋亡抑制被引量：2
- 2018年
- 星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)是近年来研究较多的癌基因,但在神经系统疾病方面研究尚少。AEG-1与神经退行性疾病有关,然而其具体作用机制尚不明确。本研究通过设计靶向AEG-1 sgRNA序列并合成相应寡核苷酸,将其克隆到GV392质粒中,构建sgRNA/Cas9二合一表达载体,并进行慢病毒包装纯化。用慢病毒感染小鼠海马神经元HT22细胞,进行药物筛选和sgRNA活性鉴定,建立稳定的AEG-1基因敲除的细胞系;并进一步观察神经元HT22细胞的增殖与凋亡能力。结果显示,成功构建了3种靶向AEG-1基因的sgRNA/Cas9二合一表达载体。所设计的sgRNA的插入序列和开放阅读框架完全正确,成功建立了AEG-1基因敲除的稳转神经细胞系。进一步研究表明,AEG-1敲除后的神经HT22细胞与正常神经HT22细胞相比,细胞突起数目减少,细胞周期阻滞,细胞凋亡率减少。以上结果为后续进一步研究AEG-1与神经系统疾病关系奠定了基础。
- 王斌刘昆梅郭乐张春和祯泉丁娜杨华孙之鹏王晓
- 关键词：细胞凋亡
- 大鼠颞叶癫痫点燃后海马星形细胞上调基因-1 mRNA和蛋白水平的表达变化被引量：2
- 2016年
- 目的颞叶癫痫反复发作,对颞叶癫痫发病机制深入研究尤其重要。文中旨在探讨颞叶癫痫脑损伤后星形细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)mRNA和蛋白水平的表达变化。方法雄性SD大鼠60只,随机数字表法分为对照组、癫痫组,每组30只。癫痫组一侧海马注射海人酸制备癫痫大鼠模型,对照组注射相同体积等渗盐水。通过RT-PCR、Western blot以及免疫组化等技术检测AEG-1mRNA和蛋白分子水平变化。结果在海人酸致痫大鼠模型中,AEG-1 mRNA较对照组明显升高[(1.508±0.090)vs(1.000±0.150),P<0.05];AEG-1蛋白的表达亦明显增加[(1.048±0.080)vs(0.749±0.550),P<0.05];免疫组化结果表明,癫痫组大鼠海马CA1、CA3、DG区AEG-1表达均高于对照组。结论 AEG-1与颞叶癫痫有高度相关性,AEG-1mRNA和蛋白水平表达变化说明AEG-1可能参与了癫痫发作过程。
- 左娣刘昆梅张瑞和祯泉丁娜马琳张春
- 关键词：海人酸癫痫海马
- Orexin A预处理对过氧化氢损伤PC12细胞的保护作用
- 2019年
- 目的观察食欲素(Orexin)A预处理对过氧化氢(H2O2)损伤PC12细胞存活率及凋亡的影响。方法将PC12细胞分为对照组、H2O2组和Orexin A+H2O2组,分别通过噻唑蓝(MTT)、倒置显微镜进行形态观察、流式细胞术对细胞存活率、凋亡细胞形态、细胞凋亡率进行分析。结果 Orexin A+H2O2组细胞存活率显著高于H2O2组,细胞早期凋亡率及晚期凋亡率均显著低于H2O2组(P<0.05)。结论 Orexin A能提高H2O2细胞存活率、降低细胞凋亡,发挥神经保护作用。
- 左娣王峰和祯泉马琳丁娜任晓璠张春牛建国
- 关键词：过氧化氢PC12细胞
