周美娟
- 作品数：4 被引量：34H指数：4
- 供职机构：西南科技大学生命科学与工程学院更多>>
- 发文基金：四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 慈竹C3H基因克隆及其生物信息学分析被引量：10
- 2012年
- 香豆酸-3-羟化酶(C3H)是调控植物木质素生物合成的关键酶,本文以慈竹为材料,利用RT-PCR技术克隆慈竹C3H基因,并对其进行生物信息学分析,为通过基因工程手段降低工业用竹木质素含量奠定基础。结果表明,该cDNA序列全长为1 581 bp,编码区为1 539 bp,编码512个氨基酸,蛋白分子量为58.33KD,等电点为9.09;氨基酸序列和结构分析显示C3H有一个保守区域,即P450结构域。系统进化分析表明,该基因与毛竹和水稻的C3H基因具有很高的同源性。慈竹与毛竹和水稻C3H基因编码蛋白为亲水性蛋白,这三种编码蛋白很可能定位在内质网(膜)上,其编码蛋白的二级结构及三级结构都含有丰富的α-螺旋和无规卷曲,β-转角和延伸链的含量较少,都含有2个相对保守的无序化区域。该基因已在GenBank上注册,基因序列登录号为JF693629,可能与慈竹木质素的生物合成有关。
- 周美娟胡尚连曹颖卢学琴任鹏吴晓宇李晓瑞
- 关键词：慈竹克隆生物信息学分析
- 农杆菌介导慈竹4CL基因遗传转化梁山慈竹被引量：10
- 2012年
- 以梁山慈竹2种类型成熟胚的愈伤组织为材料,采用农杆菌遗传介导的方法,将已构建好的具有降低木质素含量的PBI121-4CL-RNAi表达载体导入愈伤组织,探讨愈伤组织预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间和温度对遗传转化的影响。研究结果表明,淡黄色、颗粒状、疏松易碎的胚性愈伤组织是较好的遗传转化材料。以在愈伤组织培养基上预培养8天的淡黄色、颗粒状、疏松易碎的胚性愈伤组织为转化受体,在菌液浓度为OD600=0.05的EHA105中侵染20min后,在25℃、黑暗条件下共培养2天(共培养基表面加一层无菌滤纸),在含有卡那霉素为55mg.L-1的抗性筛选培养基上筛选30天,抗性愈伤组织率为90%,经PCR检测,慈竹4CL基因已导入梁山慈竹愈伤组织中。抗性愈伤组织在芽诱导培养基上诱导30天,可获得丛生芽,待丛生芽长至3～5cm后,在生根培养基上经过20～30天的诱导,可产生1～8条根,获得再生植株。经PCR检测,慈竹4CL基因已导入梁山慈竹再生植株中,获得了转基因植株,转化效率为9%。RT-PCR检测结果表明,转4CL基因的梁山慈竹愈伤组织和植株的内源4CL基因的表达受到抑制,且表达量比对照明显降低。
- 李晓瑞胡尚连曹颖卢学琴任鹏吴晓宇周美娟
- 关键词：梁山慈竹愈伤组织根癌农杆菌介导法
- 慈竹木质素合成关键基因C4H克隆及组织表达分析被引量：4
- 2014年
- 研究以慈竹为材料,利用RACE技术克隆慈竹C4H基因,并对其进行生物信息学分析和组织表达分析,为通过基因工程手段降低工业用竹木质素含量奠定基础。结果表明,该cDNA序列全长为1 573bp,编码区为1 524 bp,编码507个氨基酸;蛋白分子量为58.13 kD,该基因已在GenBank上注册,基因序列登录号为JN571418。氨基酸序列和结构分析显示C4H有一个保守区域,即P450结构域。系统进化分析表明,该基因与绿竹和燕麦的C4H基因具有很高的同源性,分别达到98.42%和90.14%。慈竹、绿竹和燕麦的C4H基因编码蛋白三级结构相似,均含有丰富的α-螺旋和无规卷曲,β-转角和延伸链较少。RT-PCR分析结果表明,慈竹C4H基因在笋和茎的稍幼嫩部位表达量较弱,在笋和茎的其它部位的表达量较强,该基因可能与慈竹木质素的生物合成有关。
- 卢学琴周美娟胡尚连曹颖任鹏
- 关键词：慈竹克隆
- 慈竹CCoAOMT基因的克隆及生物信息学分析被引量：12
- 2012年
- 咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶是木质素生物合成过程中的关键酶之一。该研究以慈竹嫩茎为材料,采用RT-PCR及RACE方法,克隆CCoAOMT基因,并对其进行生物信息学分析。结果表明:1个慈竹CCoAOMT基因cDNA全长序列被成功克隆,该序列全长为1 080 bp,含有1个777 bp的读码框,编码了1个包含258个氨基酸的蛋白质,分子质量约为28.861 ku,等电点为5.33,二级结构中α-螺旋占42.25%,β-转角占8.91%,延伸链占15.89%、无规则卷曲占32.95%。对氨基酸多序列比对发现,慈竹与绿竹的CCoAOMT1基因亲缘关系最近,但慈竹CCoAOMT基因编码的氨基酸与绿竹相比,在第10位点上发生了缺失,5个位点发生了变异。慈竹、绿竹、毛竹、玉米CCoAOMT基因编码的氨基酸中都含有1个相对保守的无序化区域。NaC-CoAOMT1基因组织表达结果表明,其在未展开叶、笋上部和中部、茎的上部和中部的表达量较高。笔者将克隆并获得的慈竹木质素合成酶CCoAOMT基因全长序列(GenBank注册号为JF742462)命名为NaCCoAOMT1,分析认为其可能与慈竹木质素生物合成有关。
- 吴晓宇胡尚连曹颖卢学琴任鹏周美娟李晓瑞
- 关键词：慈竹CCOAOMT基因克隆生物信息学分析
