吴东
- 作品数：12 被引量：17H指数：3
- 供职机构：中国科学院武汉病毒研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中国科学院知识创新工程重要方向项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 棉铃虫单核衣壳核多角体病毒3个bro基因的原核表达与抗体制备被引量：3
- 2003年
- 根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(HaSNPV)基因组全序列,设计引物,用PCR的方法扩增得到bro-a、bro-b和bro-c三个全长基因。将这三个基因的片段分别克隆至原核表达载体pProExHTb,经IPTG诱导,在E.coli DH50菌株中得到了目的基因的高效表达。表达的目的蛋白大小分别为32kDa、64kDa和58kDa,经SDS-PAGE分离纯化,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体。抗体经1∶2500倍稀释后用于WestemBlot分析,获得特异性显色信号,所制备的三种抗体适合用作bro基因的功能的进一步研究。
- 陈明明吴东袁丽陈新文胡志红
- 关键词：克隆抗体
- 中国棉铃虫病毒几丁质酶基因
- 本发明通过克隆和序列测定获得中国棉铃虫病毒几丁质酶基因,它位于HaSNPV基因组的96.1kb－97.8kb处,编码区全长为1713bp,编码一个大小为570个氨基酸的蛋白质产物,它具有真核穿膜信号肽、催化活性区及内质网...
- 吴东彭辉银孙修炼陈新文张双民胡志红
- 文献传递
- 表达GP64的重组HaSNPV的构建研究被引量：1
- 2005年
- 杆状病毒的出芽病毒具有两类不同的膜融合蛋白, 组 I类型的杆状病毒利用的是膜融合蛋白GP64, 而组 II类型的杆状病毒利用的是膜融合蛋白F。本文以组II类型的HaSNPV为研究对象, 研究组I类病毒的GP64能否在组 II类病毒中正确表达和包装。利用 Bac to Bac系统, 构建了带有 AcMNPV膜融合蛋白 GP64 和增强型绿色荧光蛋白的重组病毒HaSNPVgp64+ egfp+, 同时构建了仅带有增强型绿色荧光蛋白的对照重组病毒 HaSNPVegfp+, 通过对HaSNPVgp64+egfp+感染的HzAM1细胞及所产生的子代BV的Western blot检测, 证明GP64可在HzAM1中表达, 并被包装入子代BV。
- 王舒王华林邓菲吴东龙钢袁丽胡志红
- 关键词：杆状病毒GP64F蛋白
- 杆状病毒的分子生物学及分子进化研究
- 陈新文胡志红孙修炼王华林王汉中彭辉银金锋李枚JustM.VlakBasilM.Arif刘明富梁布锋王录明邓菲吴东罗保君刘岚卢玉蓉张双民
- 首次报道了棉铃虫病毒HaSNPV基因组131403bp和HzSNPV基因组的全序列97%同源性揭示了两者可能为同一种病毒的不同变种。发明了“基因对比排列图”（GeneParityPlot）研究方法，首次揭示了NPV基因组...
- 关键词：
- 关键词：杆状病毒分子生物学分子进化
- 几丁质酶在农林病虫害生物防治的应用及研究进展
- 几丁质酶是细菌、病毒、真菌等微生物、高等植物和昆虫体内普遍合成的一种水解酶类,其作用是水解有机体内几丁质。几丁质既是真菌细胞壁的主要组成成分,又是昆虫外骨骼和中肠围食膜的重要组成部分。因此,它将作为防治真菌病害和害虫的潜...
- 彭辉银张双民吴东王华林陈新文胡志红
- 关键词：几丁质酶几丁质生物防治
- 文献传递
- 含外源类蜗牛毒素基因的AcMNPV的虫体感染性研究被引量：2
- 2004年
- 类蜗牛毒素基因(conotoxinlike,ctl)是在一些杆状病毒基因组中存在的与蜗牛毒素类似的一类基因,其功能尚不清楚。本文利用苜蓿银纹夜蛾核多角病毒(AcMNPV)bacmid表达系统构建了含油桐尺蠖核多角体病毒(BusuNPV)ctl基因的重组病毒AcBac-ph-ctl。在细胞水平上对ctl基因的RT-PCR分析表明,该基因转录出mRNA。在甜菜夜蛾体内进行了生物活性测定,结果表明AcBac-ph-ctl与对照野生型AcMNPV的LC50,ST50无显著性差异,表明在此系统中,外源的CTL无杀虫增效性能。
- 卢玉蓉冯枞棣吴东孙修炼邓菲袁丽J.M.Vlak胡志红1
- 关键词：ACMNPVBACMIDLC50
- 棉铃虫单核衣壳核多角体病毒几丁质酶基因的克隆与表达被引量：4
- 2002年
- 根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒 (HaSNPV)几丁质酶基因的序列 ,设计引物 ,引入适当的酶切位点 ,利用PCR扩增出不含N末端信号肽以及C末端内质网定位肽的几丁质酶基因片段。将该基因片断克隆至原核表达载体 pProEXHTb ,经IPTG诱导 ,在大肠杆菌DH5α中获得了高效表达 ,表达产物的大小为 6 0kD ,含量占菌体总蛋白量的 4 0 %。利用来源于AcMNPV几丁质酶的抗体对表达蛋白进行检测 ,获得特异性的显色信号 。
- 吴东王华林邓菲陈新文彭辉银胡志红
- 关键词：棉铃虫几丁质酶克隆
- 杆状病毒分子生物学及分子进化研究
- 陈新文胡志红孙修炼王华林王汉中彭辉银金锋李枚JustM.VlakBasilM.Arif刘明富梁布峰王录明邓菲吴东罗保君刘岚卢玉蓉张双民
- 该成果针对国际上单粒包埋核多角体病毒（SNPV）分子生物学研究的空白， 选择中国特有的杆状病毒-油桐尺蠖单核衣壳核型多角体病毒（BsSNPV）及具有重大应用前景的棉铃虫核型多角体病毒（HaSNPV）进行了研究，对杆状病毒...
- 关键词：
- 关键词：杆状病毒球状病毒分子生物学分子进化
- 人巨细胞病毒pp65基因重组蛋白在昆虫细胞中的表达与分析被引量：2
- 2004年
- 目的为了制备人巨细胞病毒(HCMV)pp65基因疫苗,应用BacToBac系统对HCMVpp65基因进行表达,并对重组蛋白质的特异性及生物活性进行确定。方法通过脂质体法用HCMVpp65基因重组病毒感染Sf9昆虫细胞,并在感染的不同时期收集细胞,用特异性的HCMVpp65MAb对重组蛋白进行Westernblot,并选择HCMVIgG阳性及阴性的孕妇血清与重组蛋白进行免疫印迹反应。结果重组Bacmid大分子DNA直接转染昆虫细胞可得到100%的阳性重组病毒,病毒滴度为3×107pfu/ml,重组病毒组在感染后48h开始出现一相对分子质量为65000大小的特异带,感染后72h量明显增加,持续至感染后96h,在野生型AcNPV感染细胞及正常昆虫细胞的空白对照中未见该蛋白带。Westernblot显示目的蛋白条带与HCMVpp65MAb发生特异反应。6例阳性血清中有5例与重组pp65发生特异性反应,而阴性对照组未见特异性反应带。结论HCMVpp65基因可在Sf9昆虫细胞中有效表达,且所表达的重组蛋白pp65与人体中感染的野生型HCMVpp65具有相同的抗原性。因此有望为疫苗的制备打下基础。
- 邱红玉胡志红刘岚吴东王华林邓菲孙永玉
- 关键词：重组蛋白质类巨细胞病毒属免疫印迹法
- 表达多角体和几丁质酶融合蛋白的重组棉铃虫单核衣壳核多角体病毒及其制备方法
- 本发明公开了一种表达多角体和几丁质酶融合蛋白的重组棉铃虫单核衣壳核多角体病毒及其制备方法：利用PCR技术扩增HaSNPV多角体基因和几丁质酶基因，克隆至载体pUC19构建融合基因；将融合基因插入真核载体pHaWHL5，获...
- 吴东陈新文胡志红
- 文献传递
