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刘闯
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1
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供职机构:
北京大学基础医学院生物物理学系
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发文基金:
国家科技重大专项
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
尹长城
北京大学基础医学院生物物理学系
王钊
北京大学基础医学院生物物理学系
马锐
北京生物制品研究所
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尹长城
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2009
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汉逊酵母表达乙肝表面抗原的结构研究
2009年
目的解析汉逊酵母表达重组乙肝表面抗原(HBsAg)的空间结构,给出其颗粒大小、结构对称性方面的信息。方法整合adr亚型HBsAg的基因到汉逊酵母染色体上,建立重组汉逊酵母菌。经过发酵扩菌、诱导表达、精制纯化等步骤得到纯化的HBsAg。滴加5μl浓度为80μg/mlHBsAg溶液到亲水处理的纯碳膜铜网上,用2%醋酸铀染色,放置24h后,通过透射电镜得到汉逊酵母表达HBsAg颗粒的二维电镜图像。运用EMAN软件包完成图像选择、颗粒框取、颗粒全同性处理、初始模型构建和结构精修等HBsAg重构步骤,获得HBsAg颗粒的三维结构。结果汉逊酵母表达HBsAg颗粒大小服从高斯分布(P=0.45),均值为(28.4±2.6)nm;汉逊酵母表达HBsAg是一中空的"鱼笼"状结构,蛋白亚基分布在球状结构的表面;蛋白的表面分布大小为1~2nm的孔状结构和围绕孔状结构的突起;不具备八面体对称性。结论汉逊酵母表达的HBsAg与血源性的HBsAg在大小和结构对称性方面都有显著差异。
刘闯
朱亭玉
李津
王钊
马锐
王曦
尹长城
关键词:
毕赤酵母
负染色
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