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刘西梅: 作品数：142 被引量：122H指数：5; 供职机构：湖北省农业科学院更多>>; 发文基金：转基因生物新品种培育专项国家科技重大专项农业部全国畜牧总站动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室开放课题更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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影响猪卵母细胞胞质内单精子注射效果的因素: 2012年; 本试验探讨了成熟培养液中不同添加物、精子的处理方法及胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)胚胎激活方法3个方面,研究了影响猪卵母细胞胞质内单精子注射效果的因素。结果表明,在体外成熟液中添加30ng/mL上表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)可以明显促进ICSI胚胎的后续发育(P<0.05);精子的超声波处理和显微操作处理两种方法对ICSI受精卵发育的影响不明显(P>0.05);电激活比较适合于ICSI胚胎的激活。; 张立苹刘西梅李莉肖红卫乔宪凤郑新民; 关键词：猪卵母细胞受精率

体细胞核移植技术生产转基因猪胚胎的研究: 2013年; 以转染绿色荧光蛋白基因的猪胎儿成纤维阳性细胞作为体细胞核移植的核供体,体外成熟卵母细胞为核移植受体构建绿色荧光蛋白转基因克隆猪胚胎,研究供核细胞的处理、注核部位及重构胚融合/激活时间对转GFP克隆胚早期发育的影响.结果显示,胎儿成纤维细胞血清饥饿与非饥饿培养10 d处理组,采用卵周间隙核移植重构胚的卵裂率(82.35%和79.07%)差异不显著(P>0.05);体外培养42～44 h卵母细胞进行胞质内和卵周间隙注核的重构胚胎,其卵裂率(81.11%和76.80%)差异不显著(P>0.05);将卵周间隙注射法构建重构胚在0～1 h,2～4 h和6～8 h进行融合/激活操作,前2组重构胚卵裂率(75.61%和83.07%)无显著差异(P>0.05),但显著高于第3组(60.00%)的卵裂率(P<0.05).; 华再东刘西梅毕延震华升郑新民; 关键词：供核细胞

小鼠胚胎冷冻保存条件研究: 2014年; 为探索在实验室条件下最佳的小鼠胚胎冷冻保存条件。对不同发育阶段小鼠胚胎按照同一个冷冻程序进行冷冻;两个不同的冷冻程序对同一个发育阶段的小鼠胚胎进行冷冻。结果表明,-7℃平衡10 min,然后以0.3℃/min的速率迅速降至-35℃,-35℃平衡5 min后投入液氮中,此冷冻程序比较适合小鼠胚胎冷冻;冷冻保存对16细胞以上的小鼠胚胎影响较小。; 张立苹曹辉刘西梅毕延震肖红卫李莉华再东华文君; 关键词：小鼠胚胎冷冻保存

sFat-1转基因猪的遗传特性及基因漂移研究被引量：2: 2012年; 采用PCR检测方法和Southern印迹杂交试验,研究了转sFat-1基因猪的遗传特性及基因漂移情况。结果表明:F1代转sFat-1基因猪能够将外源基因遗传到F2代,F2代仔猪的sFat-1基因阳性比例为32%。F1代及F2代转sFat-1基因猪均没有对同一生产场的猪群产生sFat-1基因漂移。; 华文君刘西梅程妮乔宪凤郑新民; 关键词：转基因猪基因漂移

诱导型IGF1转基因猪的构建: 郑新民乔宪凤华文君肖红卫李莉周荆荣刘西梅张立苹程妮刘中华华再东毕延震魏庆信; “诱导型IGF1转基因猪”应用于猪的育种和养猪生产。其技术原理为：通过基因重组技术，构建四环素诱导的IGF1表达载体；通过原核注射的转基因技术，将IGF1诱导表达载体导入猪的基因组，构建诱导型转IGF1基因猪；再应用在饲...; 关键词：; 关键词：转基因猪养猪育种技术

转基因鼠及基因沉默技术的研究: 郑新民刘西梅乔宪凤魏庆信谷习文华文君肖红卫王亚刚丁军涛周荆荣李莉田永祥刘中华赵永贞李聚学; 该成果中的相关技术比较成熟：其中①原核注射构建转基因鼠技术较广的应用于医学模型和功能基因验证，先后进行多种基因功能测试，构建成功转单基因小鼠8种，转双基因小鼠2种；②鼠基因沉默技术除在遗传工程小鼠上的大量工作和应用外，还...; 关键词：; 关键词：转基因鼠动物实验

通用型基因打靶载体: 本发明公开了一种通用型基因打靶载体，属于生物工程领域。该通用型基因打靶载体使用新霉素磷酸转移酶和EGFP为正选择标记，DsRed为负选择标记；正选择标记基因表达框的两侧各含有1个同向排列的LoxP位点；在LoxP位点附近...; 毕延震郑新民华再东任红艳张立苹刘西梅华文君李莉肖红卫魏庆信

转EGFP-attB基因PK15细胞核型分析方法的建立: 2013年; 以转EGFP-attB基因PK15细胞（猪肾细胞15）为试验材料,研究不同秋水仙素浓度、低渗时间对染色体标本制备的影响。结果表明,使用秋水仙素浓度为0.04~0.08μg/mL、低渗时间为15~20 min时所制备的染色体标本分裂相分散好,可以做核型分析用,为下一步做染色体荧光原位杂交检测研究转EGFPattB基因在染色体上的整合位点奠定了基础。; 肖红卫刘西梅毕延震华文君李莉张立苹华再东郑新民; 关键词：转基因核型分析

ΦC31整合酶介导猪基因组定点修饰的探讨被引量：4: 2014年; 高效与特异的基因组定点修饰是基因工程动物研究的前沿与难点.链霉菌噬菌体ΦC31整合酶能介导含attB位点的外源基因定点整合于多种真核生物基因组的假attP位点,可维持外源基因的正常结构及高效表达.本文探讨ΦC31整合酶介导外源基因在猪基因组内定点整合的分子基础.构建含attB位点的报告载体pEGFP-N1-attB,与ΦC31整合酶表达载体pCMV-INT共转染猪肾PK15细胞,G418筛选获得单克隆细胞系.实时荧光定量PCR筛选出单拷贝整合的转基因细胞系.TAIL-PCR鉴定出1个猪基因组假attP位点,位于猪1号染色体,watson链,坐标114220087-114220126,命名为pig-attP-1.测序结果显示,pEGFP-N1-attB在attB位点处断开插入到pig-attP-1.用荧光计测定细胞培养基上清EGFP含量发现,该转基因细胞系EGFP的表达水平是本底的50倍(13500 AU vs.280 AU),表明pig-attP-1是利于外源基因高效表达的"友好位点".该研究不仅为实现外源基因在猪基因组内的定点整合提供了新策略,也为创制基因工程猪、建立动物生物反应器等研究注入了新思路.; 毕延震刘西梅华再东张立苹郑新民肖红卫

猪卵巢采集月份、保存温度及时间对其卵母细胞体外成熟的影响被引量：2: 2013年; 为了探讨猪卵巢采集月份、保存温度及保存时间对卵母细胞体外成熟的影响,对不同月份、不同保存温度及不同保存时间的猪卵巢采用抽吸法获得卵丘卵母细胞复合体（COCs）,体外培养统计其第一极体排出情况.结果表明,从屠宰场所取卵巢的COCs数5～7月和8～10月期间显著（P＜0.05）高于2～4月和11月至次年1月,而且其卵母细胞体外核成熟率在5～7月和8～10月期间也显著（P＜0.05）高于2～4月和11月至次年1月;采集的猪卵巢分别置于15、20、25、30和35℃的生理盐水中2h,收集卵巢的COCs数差异不显著（P＞0.05）,但是存放在30和35℃的生理盐水中的卵巢的卵母细胞体外成熟率极显著（P＜0.01）高于其他3组;置于35℃生理盐水中2、4、6、8h的卵巢的COCs数差异不显著（P＞0.05）,但存放2h的卵巢的卵母细胞体外成熟率显著（P＜0.05）高于存放4、6和8h的.; 李莉华再东郭帅刘西梅华升郑新民; 关键词：卵母细胞温度体外成熟