刘细保
- 作品数：5 被引量：1H指数：1
- 供职机构：美国国立卫生院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 唾液硝酸盐、亚硝酸盐代谢、功能及分泌机理的研究
- ＜正＞一、立题背景唾液中硝酸盐的浓度是血液中5-10倍（Pannala,et al．Free Radic Biol Med 2003;34．536）,在唾液中硝酸盐可还原成亚硝酸盐,后者能明显增加上消化道粘膜的血流及粘液...
- 王松灵夏登胜孙其飞刘细保Indu AmbudKar史瑞棠邓大君张春梅徐岩英
- 关键词：涎腺功能电生理
- 文献传递
- 人唾液酸转运蛋白在涎腺的表达和定位
- ＜正＞研究背景:唾液酸转运蛋白sialin是由SLC17A5基因编码的游离唾液酸转运蛋白,负责将溶酶体内降解下来的游离唾液酸转运出溶酶体,并具有与质子转运偶联的特性,研究发现sialin的不同突变可引起在不同年龄阶段的常...
- 孙其飞高媛刘细保孙启鸿王松灵
- 文献传递
- 兔抗人唾液酸转运蛋白抗体的制备及特性鉴定
- 2006年
- 目的：制备兔抗人唾液酸转运蛋白（sialin）的抗体，并进行特性鉴定。方法：应用RT—PCR从培养的人颌下腺细胞系HSG中扩增编码sialin N端1～38氨基酸的DNA序列，构建重组表达质粒pGEX-5X-1-sialin，测序鉴定后，转化大肠杆菌JM109，在0．1 mmol／L IPTG的诱导下表达GST—sialin融合蛋白。经SDS-PAGE鉴定后，利用GSTrap FF^TM柱纯化融合蛋白，并以其免疫家兔制备抗人sialin抗体。用ELISA法测定兔抗sialin血清的效价；用Western blot及免疫细胞化学等方法鉴定抗血清的特异性。结果：构建了重组表达质粒pGEX-5X-1-sialin；以其转化大肠杆菌在IPTG诱导下，获得以可溶性形式表达的GST-sialin融合蛋白；表达的GST—sialin经GSTrap FF^TM柱纯化后，免疫家兔制备出抗sialin抗血清，ELISA法测定抗血清的效价为1：32000。Western blot鉴定表明，制备的抗sialin抗体可特异地识别HSG细胞中相对分子质量（Mr）约55000的sialin蛋白。免疫细胞化学检测表明，sialin抗血清识别的抗原定位于HSG细胞的细胞质和胞核。结论：成功地制备出兔抗人sialin抗血清，为进一步研究sialin在涎腺组织的功能奠定了基础。
- 孙其飞高媛刘细保孙启鸿王松灵
- 关键词：融合蛋白原核表达抗体制备
- Sialin(SLC17A5)在腮腺、颌下腺及颌下腺细胞系HSG表达的初步分析被引量：1
- 2006年
- 目的研究唾液酸转运蛋白Sialin在正常涎腺组织和颌下腺细胞系HSG的表达。方法应用基因芯片检测正常人腮腺、颌下腺组织Sialin编码基因SLC17A5的表达;提取腮腺、颌下腺组织及颌下腺细胞系(HSG)总RNA,通过RT-PCR在基因水平上验证SLC17A5基因的表达;提取HSG细胞总蛋白,用免疫印迹法检测Sialin在蛋白水平表达。结果基因芯片检测到Sialin编码基因SLC17A5基因在正常人腮腺、颌下腺均有表达,表达比值分别为226、206·9,不存在表达差异;RT-PCR验证芯片结果并在其他涎腺样本及颌下腺细胞系HSG中能扩增出其全部翻译区1485bp的片段,应用商业化的抗体能够在HSG细胞检测到Sialin相应的约54KDa蛋白。结论正常腮腺、颌下腺组织和颌下腺细胞系HSG均表达SLC17A5基因,但是唾液酸转运蛋白Sialin在组织、细胞内定位和功能需要进一步研究。
- 孙其飞刘细保孙启鸿王松灵
- 关键词：RT-PCR免疫印迹
- 人氯离子通道5抗体制备、特性鉴定和初步应用
- ＜正＞研究背景:电压敏感性氯离子通道家族（CLCs）拥有九个成员,随膜电位变化而开启和关闭,因为氯离子最容易通过而命名,CLCN5是其成员之一。CLCN5的突变可能改变肾小管内的pH和阻止对低分子蛋白的摄取作用,导致小管...
- 孙其飞高媛柳晓兰迟俊高建恩刘细保孙启鸿王松灵
- 文献传递
