余红梅
- 作品数：9 被引量：19H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 透明质烷和CD44参与调节气道黏液高分泌的分子机制被引量：3
- 2010年
- 目的了解透明质烷(HA)和CD44在气道黏液高分泌中的作用,探索信号因子活化表皮生长因子(EGF)/表皮生长因子受体(EGFR)信号通路的分子机制。方法体外培养BEAS-2B气道上皮细胞,给予中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)刺激,以活性氧(ROS)清除剂(DMTU)、透明质酸酶(Hase)、CD44抗体和组织激肽释放酶抑制剂(PI)作为干预因素。RT-PCR检测黏蛋白(MUC)5AC mRNA表达。ELISA法检测MUC5AC及EGF蛋白含量;Western blotting分析磷酸化EGFR(p-EGFR)蛋白水平。结果NE刺激后MUC5AC、EGF、p-EGFR蛋白及MUC5AC mRNA表达均较对照组显著增高(P<0.01),给予DMTU干预后上述指标水平均明显降低(P<0.01);在加入DMTU后用Hase处理细胞,上述指标水平均较DMTU组明显升高(P<0.05),EGF蛋白含量增高更为明显(P<0.01);CD44抗体或PI处理后上述指标水平均明显低于NE组(P<0.05),EGF蛋白含量降低更为显著(P<0.01)。结论NE可刺激细胞产生ROS,后者可裂解HA致其解聚,并使之与CD44结合而活化组织激肽释放酶(TK),由活化的TK对前体EGF加工处理成EGF,由此启动EGFR信号级联反应,上调MUC5AC基因的表达。
- 余红梅周向东
- 关键词：CD44活性氧黏蛋白
- Elafin基因重组气道上皮调节脂多糖诱导的人气道黏液高分泌被引量：3
- 2011年
- 目的探讨天然内生多肽Elafin对脂多糖诱导的气道黏液高分泌的调节机制。方法构建人Elafin重组质粒pEGFP-N1-Elafin,转染正常人支气管上皮细胞HBE16,给予脂多糖(LPS)刺激,激光共聚焦扫描显微镜检测Elafin蛋白含量,Western blot法检测IκBα蛋白含量;荧光素酶报告基因检测系统测定核转录因子-κB(NF-κB)活性;RT-PCR检测Elafin和黏蛋白(MUC)5AC mRNA表达水平;ELISA法分析MUC5AC蛋白相对含量。结果成功构建内生多肽Elafin真核表达载体pEGFP-N1-Elafin并转染HBE16细胞。转染重组Elafin后Elafin蛋白含量及mRNA水平明显增加。与对照组相比,LPS刺激组IκBα蛋白含量降低,NF-κB相对活性明显增强,MUC5AC蛋白含量及mRNA水平也显著增加。转染重组Elafin后再予以LPS刺激,与单纯LPS刺激组相比,IκBα蛋白含量明显增加,NF-κB相对活性显著降低,MUC5AC蛋白含量及mRNA水平也明显降低。结论天然内生多肽Elafin重组气道上皮可下调NF-κB的活性,降低脂多糖诱导的气道黏液高分泌。
- 余红梅李琪尤列.皮尔曼维克多.科罗索夫周向东
- 关键词：脂多糖ELAFIN黏蛋白核转录因子-ΚB
- Elafin真核表达载体的构建及其对气道粘液高分泌的调节
- 2011年
- 目的:构建天然内生多肽Elafin真核表达载体,探讨其对气道粘液高分泌的影响。方法:抽提Elafin行RT-PCR获取Elafin cDNA,双酶切后将片段装载到pMD18-T载体上。以pMD18-T-Elafin为模板行PCR反应,产物胶回收并双酶切后定向克隆至pEGFP-N1上,转化,筛选,双酶切鉴定重组质粒。将pEGFP-N1-Elafin转染正常人支气管上皮细胞HBE16,给予脂多糖(LPS)刺激,Western blot检测细胞内Elafin蛋白的相对含量,RT-PCR检测各组Elafin mRNA和粘蛋白(MUC)5AC mRNA表达水平,荧光素酶报告基因检测系统测定核转录因子-κB(NFκ-B)的活性;ELISA法分析各组细胞MUC5AC蛋白的相对含量。结果:成功构建Elafin真核表达载体,转染重组Elafin的HBE16细胞成功表达Elafin蛋白。LPS刺激可增强NF-κB的活性,该活性在转染重组Elafin后显著降低;MUC5AC蛋白含量及mRNA水平在LPS刺激后也显著升高,在转染重组Elafin后二者的表达水平明显降低。结论:Elafin真核表达载体成功构建,初步发现Elafin可通过降低NFκ-B的活性来下调MUC5AC的表达,为进一步深入研究其对气道粘液高分泌的调节机制奠定了基础。
- 余红梅李琪尤列.皮尔曼维克多.科罗索夫周向东
- 关键词：ELAFIN粘蛋白脂多糖核转录因子-ΚB
- 热休克蛋白90参与糖皮质激素及其受体对气道黏蛋白5AC表达调控的机制被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨热休克蛋白90(HSP90)在糖皮质激素(GC)信号通路中的作用及其对气道黏蛋白(MUC)5AC表达的调控机制。方法:体外培养气道上皮细胞株BEAS-2B,给予HSP90特异性阻断剂格尔德霉素(GA)和地塞米松(DEX)刺激,比较各组MUC5AC的含量,糖皮质激素受体(GR)的核蛋白表达和GR结合活性。结果:与对照组相比,DEX组的MUC5AC mRNA和蛋白水平降低,伴GR核蛋白水平增高(P<0.05);与DEX组相比,GA+DEX组MUC5AC mRNA和蛋白水平升高,GR核蛋白水平降低。放射配体结合实验显示,与对照组相比,GA组的受体最大结合容量(Bmax)降低,平衡解离常数(Kd)升高。结论:HSP90可参与GC及GR的抗气道黏液高分泌效应,其抑制剂可阻断上述效应,该效应是通过降低GR的结合活性来调控的。
- 余红梅周向东
- 关键词：热休克蛋白黏蛋白糖皮质激素糖皮质激素受体
- 鞘氨醇激酶1对肿瘤坏死因子α诱导的气道黏蛋白5AC的调节作用被引量：2
- 2011年
- 目的探讨鞘氨醇激酶1（SphK1）对肿瘤坏死因子α（TNF—α）诱导的气道黏蛋白（MUC）5AC的调节机制。方法培养正常人气道上皮细胞HBE16，给予SphK1特异性抑制剂N，N-二甲基鞘氨醇（DMS）处理及转染SphK1的小干扰RNA（siRNA）后，再各施以TNF-α刺激，四甲基偶氮唑盐法检测各组细胞增殖活力，Westernblot法检测各组SphK1、环氧化酶2（COX-2）、磷酸化P38（P—P38）、磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）和IKBα蛋白相对含量，酶联免疫分析法检测各组MUC5AC、前列腺素E2（PGE2）和环单磷酸腺苷（cAMP）的相对含量，荧光素酶报告基因系统测定cAMP反应结合蛋白（CREB）和核因子-κB（NF-κB）的相对活性，RT-PCR检测各组SphK1和SphK1 mRNA的表达水平，免疫荧光法检测胞内MUC5AC含量。结果与对照组相比，TNF．d组的SphK1 mRNA和蛋白水平显著升高（均P〈0．01），COX-2、PGE2、cAMP、P—P38和p-ERK的含量明显增加（均P〈0．01），IkBα含量明显降低（P〈0．01），CREB和NF—KB的活性明显增强（均P〈0．01），MUC5AC mRNA和蛋白含量亦显著高于对照组（均P〈0．01）；与TNF-α组相比，给予DMS处理后COX-2、PGE2、cAMP、P—P38和p-ERK的含量明显降低（均P〈0．01），IkBα含量显著增加（P〈0．01），CREB和NF-κB的活性明显减弱（均P〈0．01），MUC5AC mRNA和蛋白含量也显著降低（均P〈0．01），转染SphK1 siRNA后上述指标出现同DMS处理一致的变化（均P〈0．01）。结论SphK1参与调节了TNF-α所诱导的MUC5AC高表达过程中的主要信号因子及转录因子的表达，可能是MUC5AC合成及分泌过程中的重要调节因子。
- 余红梅李琪尤列·皮尔曼维克多·科罗索夫周向东
- 关键词：鞘氨醇肿瘤坏死因子Α黏蛋白类转录因子
- 核受体在慢性气道炎症性疾病中的作用
- 2008年
- 慢性气道炎症性疾病以气道炎症反应、气道重塑、黏液高分泌等为主要病理特征。核受体为配体活化的转录因子,可降低气道高反应性,减轻炎性细胞和因子所致的气道炎症,减少黏液分泌等,在慢性气道炎性疾病的发生发展过程中起着重要的作用。核受体可单独或相互联系而发挥作用,亦可与其他转录因子进行交互通话。因此,深入研究核受体及其配体的作用将为慢性气道炎症性疾病展现广阔的治疗前景。
- 余红梅周向东
- 关键词：核受体肺部炎症气道炎症慢性转录因子
- 内生多肽Elafin对气道黏蛋白5AC表达的影响被引量：5
- 2010年
- 目的 探讨内生多肽Elafin调节气道黏液高分泌的分子机制.方法 构建人 Elafin 重组质粒,原代培养正常人支气管上皮细胞 HBE16,分为对照组、香烟抽提物（CSE）刺激组、CSE 刺激＋转染重组质粒、CSE 刺激＋空质粒组、单纯转染重组质粒以及空质粒组6组.四甲基偶氮唑盐法检测各组细胞活力,Western blot法检测p-JNK、p-ERK、p-P38和IκBα蛋白含量,荧光素酶报告基因系统测定激活蛋白-1（AP-1）及核转录因子-κB（NF-κB）活性,RT-PCR检测各组黏蛋白（MUC）5AC mRNA 表达水平,ELISA 法分析各组细胞 MUC5AC 蛋白的相对含量.结果 CSE刺激组的p-JNK、p-ERK、p-c-Jun、IκBα、AP-1、NF-κB、MUC5AC和MUC5AC mRNA 含量分别为（0.55±0.03）μg/mg、（0.64±0.06）μg/mg、（0.60±0.07）μg/mg、（0.27±0.03）μg/mg、7.49±0.31、4.42±0.22、（0.71±0.04）mg/L和0.81±0.04,与对照组的（0.26±0.02）μg/mg、（0.30±0.05）μg/mg、（0.19±0.04）μg/mg（0.61±0.04）μg/mg、2.54±0.22、2.37±0.16、（0.23±0.02）mg/L和0.32±0.03比较差异有统计学意义（均P＜0.05）.转染重组Elafin后再给予CSE刺激,p-JNK、p-ERK、p-c-Jun、IκBα、AP-1、NF-κB、MUC5AC和MUC5AC mRNA含量分别为（0.38±0.04）μg/mg、（0.31±0.04）μg/mg、（0.14±0.03）μg/mg、（0.54±0.03）μg/mg、2.60±0.19、2.55±0.21、（0.28±0.03）mg/L、0.35±0.05,与CSE组相比差异有统计学意义（均P＜0.05）;p-P38蛋白含量在CSE刺激及转染Elafin前后无明显变化.结论 内生多肽Elafin可降低JNK和ERK磷酸化水平并抑制IκBα蛋白降解,从而降低转录激活蛋白-1和核因子-κB的活性,下调黏蛋白5AC的高表达,而p38MAPK在其中的作用并不明显.
- 余红梅李琪Juliy M.PerelmanVictor P.Kolosov周向东
- 关键词：黏蛋白类吸烟转录因子AP-1NF-ΚB
- 激活蛋白-1对香烟烟雾提取物诱导气道黏蛋白5AC基因表达的调控作用被引量：4
- 2010年
- 目的:了解激活蛋白-1(AP-1)参与调控香烟烟雾诱导的气道黏蛋白(MUC)5AC表达的作用机制,探讨此过程中AP-1活化的可能信号途径。方法:体外培养人气道上皮细胞BEAS-2B,给予香烟烟雾提取物(CSE)刺激,干预实验用c-Jun的显性负性突变体TAM67转染细胞阻断AP-1的DNA结合活性;用SP600125和PD98059预处理分别阻断c-Jun氨基端激酶(JNK)和细胞外信号调节激酶(ERK)的活性。以ELISA法检测MUC5AC蛋白含量,Western印迹检测磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化ERK(p-ERK)和磷酸化P38(p-P38)含量,RT-PCR检测MUC5ACmRNA表达水平,EMSA测定AP-1的DNA结合活性。结果:CSE(1g/L)刺激后MUC5ACmRNA表达水平和蛋白含量明显高于对照组(均P<0.01),AP-1的DNA结合活性也明显强于对照组(P<0.01),伴随p-ERK和p-JNK蛋白含量显著增加,与对照组相比,差异有统计学意义(均P<0.01),而P38含量无明显变化(P>0.05);与CSE组相比,TAM67转染细胞后MUC5ACmRNA表达水平和蛋白含量均显著降低(P<0.01);与CSE组相比,用SP600125或PD98059处理细胞后可明显抑制AP-1的DNA结合活性(均P<0.05),并下调MUC5AC蛋白含量和mRNA的表达(均P<0.05)。结论:AP-1参与调控CSE诱导的气道MUC5AC基因表达的过程,此过程是由JNK和ERK信号转导通路激活AP-1,再由AP-1与MUC5AC启动子上AP-1DNA反应元件结合后在转录水平上调MUC5AC的表达而实现的。
- 余红梅周向东
- 关键词：黏蛋白激活蛋白-1
- 重组融合蛋白BoNT-LH(N)-Elafin在毕赤酵母中的表达及其活性被引量：2
- 2011年
- 目的利用毕赤酵母表达系统表达BoNT-LH(N)-Elafin融合蛋白,并检测其生物学活性。方法构建pPIC9K-BoNT-LH(N)-Elafin重组真核表达质粒,转化毕赤酵母GS115菌株,甲醇诱导表达,取上清,经阳离子交换层析纯化融合蛋白,并检测其反应原性、抗弹性蛋白酶活性及对SNARE蛋白复合体的裂解作用。结果重组表达质粒pPIC9K-BoNT-LH(N)-Elafin经双酶切及测序证实构建正确;表达的BoNT-LH(N)-Elafin融合蛋白相对分子质量约为110 000,纯化的融合蛋白纯度达92%,浓度为54 mg/L,反应原性良好,具有抗弹性蛋白酶活性及裂解SNARE蛋白复合体的作用。结论已在毕赤酵母GS115中成功表达了重组融合蛋白BoNT-LH(N)-Elafin,该融合蛋白具有良好的生物学活性,为进一步研究其抑制气道黏液高分泌的机制奠定了基础。
- 余红梅李琪周向东尤列.皮尔曼维克多.科罗索夫
- 关键词：ELAFIN中性粒细胞弹性蛋白酶重组融合蛋白质类SNARE毕赤酵母
