余南
- 作品数：11 被引量：16H指数：2
- 供职机构：中山大学中山医学院更多>>
- 发文基金：中山大学校科研和教改项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 3株弓形虫GRA7基因的保守性鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的 比较弓形虫不同地理株 (RH株、ZS2株、GT株 )GRA7基因的异同。 方法 从弓形虫不同地理株的基因组DNA中扩增出GRA7基因 ,对目的基因用限制性内切酶 (Esp3I、CfrI、MboI)酶切并比较。将目的基因克隆至pGEX 4T 1质粒 ,转化大肠埃希菌JM 10 9,进行测序并比较。 结果 PCR扩增出 3株弓形虫的目的基因片段 ,大小均在 5 0 0～ 75 0bp之间 ;经 3种限制性内切酶酶切 ,其大小均与理论值相符 ;3株弓形虫GRA7基因序列相同。
- 郑斌何蔼李卓雅申川军余南郑焕钦张瑞琳李道宁詹希美
- 关键词：弓形虫限制性内切酶克隆
- 刚地弓形虫RH株微线体蛋白MIC3成熟肽的克隆与表达被引量：2
- 2005年
- 目的 克隆编码刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)RH株微线体蛋白MIC3成熟肽的基因,构建原核表达载体pET MMIC3,并在大肠杆菌BL2 1株中表达。方法 采用PCR技术从刚地弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码微线体蛋白MIC3成熟肽的基因,并克隆到T载体上,经测序鉴定后,将目的基因亚克隆到表达载体pET30a(+)上,构建质粒pET MMIC3。表达产物用Westernblot进行进一步确认。结果 经初步菌液PCR鉴定,提取质粒双酶切鉴定并测序,确认插入T载体的序列为所需的目的序列;亚克隆构建pET -MMIC3,转化到宿主菌大肠杆菌BL2 1,得到分子量为37.2kDa的重组表达蛋白,Westernblot的结果与预测相符。结论 成功的克隆并融合表达了刚地弓形虫RH株微线体蛋白MIC3成熟肽,为进一步研究其在弓形虫粘附和入侵中的作用奠定了基础。
- 余南何蔼郑小英申川军郑斌郑焕钦李卓雅曹爱莲詹希美
- 关键词：刚地弓形虫克隆
- 斑节对虾病原、组织病理及其与脂肪关系研究
- 余南
- 日本血吸虫组织蛋白酶L1基因在大肠埃希菌中的表达被引量：2
- 2004年
- 目的 在原核表达体系大肠埃希菌中进行日本血吸虫组织蛋白酶L1(SjCL1)基因表达。 方法 通过PCR从质粒pcDNA3 SjCL1中扩增得到SjCL1基因 ,定向克隆至原核表达载体pGEX 4T 1中 ,构建重组质粒pGEX SjCL1,将该重组质粒转化大肠埃希菌JM10 9,转化子经异丙基 β D 硫代半乳糖苷诱导表达 ,采用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹法 (Westernblotting)分析SjCL1基因表达产物。 结果 获得长约 1kb的PCR片段 ,构建了pGEX SjCL1质粒。SDS PAGE和Westernblotting检测表达产物 ,相对分子质量为 62 0 0 0。
- 易冰李卓雅何蔼郑小英郑斌周豪杰王轶张瑞林余南詹希美
- 关键词：日本血吸虫组织蛋白酶类大肠埃希菌原核表达载体
- 刚地弓形虫醛缩酶基因及其内含子的分析被引量：4
- 2005年
- 目的刚地弓形虫醛缩酶是其速殖子入侵宿主细胞过程中的一个重要分子,本研究对该酶基因序列及其内含子进行实验和分析。方法提取刚地弓形虫RH株速殖子基因组DNA和总RNA,采用PCR技术分别从基因组DNA和cDNA中扩增编码果糖1,6-二磷酸醛缩酶的基因,并克隆到T载体上,经测序鉴定后对其基因组序列和cDNA序列进行比较分析。通过NCBI数据库资源对醛缩酶内含子的分布及大小进行比较分析。结果根据醛缩酶基因设计的引物从基因组DNA扩增得到的片段长度为1315bp,从cDNA扩增得到的片段为993bp。比对结果显示来源于基因组DNA的序列在对应于编码序列起始密码子下游109bp后有一个322bp的内含子。通过在线工具收集得到NCBI及EMBL数据库中来源于不同物种的32种醛缩酶数据,分析显示推断氨基酸序列具有保守性。结论编码刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)RH株果糖1,6-二磷酸醛缩酶基因编码区内存在一个322bp的内含子。醛缩酶氨基酸序列保守性较高。内含子在不同进化等级之间插入位置数目及大小两方面均存在明显的增加趋势。
- 余南何蔼李卓雅郑斌詹希美
- 关键词：刚地弓形虫内含子
- 刚地弓形虫RH株果糖1,6-二磷酸醛缩酶的基因序列分析与融合表达
- 2005年
- 目的:对编码刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株果糖1,6-二磷酸醛缩酶基因进行克隆和 序列分析,并构建原核载体pETcFN融合表达该重组蛋白,以研究该分子在弓形虫速殖子入侵中 的作用。方法:从刚地弓形虫RH株速殖子cDNA中扩增编码果糖1,6-二磷酸醛缩酶的基因,并 克隆到T载体上,测序确认;通过PCGENE及在线工具对此编码序列进行分析;将该基因亚克隆 到表达载体pET30a(+)上,构建质粒pETcFN;表达产物用Western blot进行进一步确认。结果:经 PCR鉴定和质粒双酶切鉴定后测序,确认插入T载体的序列为所需的目的序列。根据序列分析, 推断蛋白的预计分子量为39．2kDa,等电点为7．75;BLAST分析,发现同源性52％以上的序列32 条;模序分析发现其分别在223-233、21-147及15-363位置隐含有与PS00158(ProfileScan)、 PD001128(BlastProDom)及PF00274(HMMPfam)相似的模序,这些序列分子功能均为果糖二磷酸 醛缩酶活性。该编码片段亚克隆到载体上成功构建融合表达质粒pETcFN,转化到大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达,得到分子量为43kDa的融合蛋白。Western bolt的结果与预测相符。
- 余南何蔼郑小英李卓雅郑焕钦詹希美
- 关键词：刚地弓形虫
- 与艾滋病相关的人微孢子虫研究
- 1994年
- 微孢子虫是一种细胞内寄生原虫。人微孢子虫中有两个主要类群与AIDS病相关,即Entetocytozoon和Encephalitozoon。E.hellem和E.cuniculi主要感染艾滋病患者的眼结膜、角膜和鼻粘膜组织等部位,E.biencnsi要感染病人肠道,引起腹泻。这三种病原的感染甚至能引起患者的死亡。在这些微孢子虫的形态学、生活史、分类学等方面已取得不少进展,但治疗方面的研究尚不足,很多研究有待进一步深入。
- 余南
- 关键词：微孢子虫艾滋病
- 弓形虫速殖子入侵宿主细胞MAFU分子模型及相关实验研究
- 本研究为阐明速殖子入侵宿主细胞的分子机制，利用弓形虫生物信息学资源，获得MIC蛋白的序列检索和分析结果，并建立相对完整的入侵相关粘附分子模序特征谱TAMMPMprofile;在TAMMPMprofile基础上建立弓形虫入...
- 余南
- 关键词：刚地弓形虫结构域弓形虫病宿主细胞
- 文献传递
- 弓形虫致密颗粒蛋白基因的表达及其重组蛋白免疫反应性的评价被引量：6
- 2005年
- 目的将克隆入pGEX-4T-1的致密颗粒蛋白基因进行表达并对表达产物的免疫反应性进行评价。方法将重组表达质粒pGEX-4T-1/GRA7转入大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导进行SDS变性蛋白质电泳,分别以Anti-GSTAntibody、免抗弓形虫阳性血清和人抗弓形虫阳性血清为一抗进行WesternBlot分析。用GSTrapFFHiTrapaffinitycolumns纯化重组蛋白,以此蛋白作为包被抗原,BLISA法检测抗弓形虫阴性、阳性血清。结果SDS变性蛋白质电泳显示在43KDa～66KDa蛋白条带之间有特异蛋白的表达,蛋白分子量大小与理论值相符。WesternBlot分析表明该重组蛋白为GST融合蛋白,且该蛋白能被人抗弓形虫阳性血清、兔抗弓形虫阳性血清所识别。ELISA结果表明该蛋白能与人抗弓形虫阳性血清、兔抗弓形虫阳性血清特异结合,而与抗弓形虫阴性血清无反应。结论弓形虫致密颗粒蛋白基因在大肠埃希菌中得到表达;该重组蛋白具有良好的免疫反应性。
- 郑斌余南李卓雅郑焕钦何蔼詹希美
- 关键词：刚地弓形虫免疫反应性酶联免疫吸附试验
- 刚地弓形虫LDH-Like MDHcDNA的克隆和序列分析被引量：2
- 2005年
- 目的获取弓形虫RH株速殖子苹果酸脱氢酶(MDH)的cDNA全长序列,并对推导翻译出的氨基酸(aa)序列进行分析。方法将NCBIGenBank中登录的弓形虫MDHEST序列进行比对、拼接和电子延伸,发现近5’末端的部分核酸序列缺失。基于分析,设计的上游、下游引物分别包含起始密码子ATG和终止密码子TGA(TGA→UGA),使经RTPCR扩增出的片段对应完整的CDS或者ORF。之后对MDHCDS推导翻译出的aa序列进行了保守功能域和同源性分析。结果本研究克隆的MDH的cDNA全长951bp,推导翻译出的蛋白质有316个aa组成,约35kDa,与预期大小接近。保守功能域分析表明,弓形虫MDH最接近类乳酸脱氢酶型(lactatedehydrogenaselike)MDH,其准确定名缩写为LDHlikeMDH,同时弓形虫MDH还具有其它脱氢酶类的特征。弓形虫MDH除与隐孢子虫和恶性疟原虫高度同源外,还与很多细菌等物种同源,但与人的同源性最低(22%)。弓形虫MDHcDNA序列在NCBIGenBank中登录号为AY650028,对应aa序列的登录号为AAT67462。结论本研究首次获得了弓形虫MDH基因的全长cDNA序列和对应的aa序列。MDH是三羧酸循环中的重要酶类,该酶活性的改变,将直接影响弓形虫的存活。弓形虫MDHaa序列与人MDH蛋白间的同源性很低,提示基于MDH蛋白作为药靶,经高通量技术筛选抗弓形虫药具有可行性。
- 申川军何蔼郑小英余南郑斌郑焕钦李卓雅曹爱莲詹希美
- 关键词：弓形虫苹果酸脱氢酶克隆
